Способ получения средства, обладающего антидиуретическим действием

СООЭ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК ЯО 111 126 3(59 А 61 К 35/30 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПИЙ(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА,ОБЛАДАЮЩЕГО АНТИДИУРЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, включающий обезжириваниезадних долей гипофиза, экстракциюсырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствораколлоидного железа и выделение целевого продукта, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырьяосуществляют смесью этилового спирта и 4 М ацетатного буфера при ихсоотношении 3:1 и рН 5,3, а приосаждении в экстракт дополнительновводят раствор аммиака, полученнуюжидкую фазу отделяют фильтрованием,а осадок заливают раствором соляной кислоты, нагревают и посче охлаждения в суспензию вновь добавляют раствор аммиака, выпавший осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному фильтрату.Изобретение относится к техно" логии производства медицинских препаратов, обладающих антидиуретическим свойством и может быть использовано на предприятиях медицинской и мясомолочной промышленности при производстве лекарственных средств из животного сьрья, а получаемое в результате применения изобретения лекарственное средство может быть использовано в лечебно-профилактических учреждениях.Известен способ получения средства, обладающего антидиуретическим действием, включающий обезвоживание ацетоном замороженных задних долей гипофиза, экстракцию ра створом уксусной кислоты, депротеинизирование экстракта обработкой раствором коллоидного железа и двууглекислого натрия, отстаивание экстракта, Фильтрование и установление рН 3,5 добавлением 2 н. раствора соляной кислоты, после чего экстракт упаривают с установлением в нем рН 6,5 с помощью 10 -ного раствора едкого натраБиологическая активность полученного средства 0,25 МЕД + 0,1 в 1 мг 13К недостаткам известного способа получения препарата адиурекрина относятся плохая растворимость порошка адиурекрина наличие в порошке большого количества балластных веществ, трудность дозирования и применения препарата в медицинской практике.Кроме того, при использовании порошка адиурекрина имеют место раздражение слизистой носа и другие нежелательные реакции. Выход конечного продукта адиурекрина сопровождается низкой биологической активностью,Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения средства, обладающего антидиуретическим действием, включающему обезжиривание задних долей гипофиза, экстракцию сырья, последующее осаждение балластных веществ с помощью раствора коллоидного железа и выделение целевого продукта, после лиофилизации экстракцию сырья осуществляют смесью этилового спирта и 4 М ацетатного буфера при их соотношении 3:1 и 5 О 15 20 25 30 35 40 45 50 55 рН 5,3, а при осаждении в экстрактдополнительно вводят раствор аммиака, полученную жидкую фазу отделяютФильтрованием, а осадок заливаютраствором соляной кислоты, нагреваюти после охлаждения в суспенэию вновьдобавляют раствор аммиака, выпавшийосадок отделяют, а надосадочнуюжидкость присоединяют к первоначальному Фильтрату.П р и м е р. 1 кг лиофильно высушенных задних долей гипофиза заливают смесью этилового спирта(2,4 л) и 4 М раствором ацетатногобуфера рН 5,3 (0,8 л), Соотношениеспирта и ацетатного буфера 3:1. Полученную массу пропускают через волчок, В реактор предварительно вносят15 л этилового спирта и 5 л 4 М ацетатного буфера. Смесь перемешиваютв течение 3 ч при 25 С, Полученнуюсуспензию обрабатывают на сепараторе,отделяя жмых от прозрачного экстракта,Осаждение, К 2 л полученного экстракта при перемешивании добавляют40 л этилового спирта. Перемешиваниепродолжают 15 мин и оставляют на2 ч при 0 С. Прозрачную надосадочнуюжидкость декантируют, а нижний слойцентрифугируют либо пропускают че рез сепаратор. Полученный осадок,промывают на нуч-фильтре, а затемсушат ацетоном и спиртом. Последующая сушка осуществляется в вакуум-сушильном шкафу при 40 СР в течение 30 мин. Выход сырца составляет 500 г из 1 кг сублимированных гипофизов с биологической активностью 12 МЕ/мг.0,5 кг сырца с биологической активностью 12 МЕ растворяют в 12 л 0,1 .-ного растворе уксусной кислоты, перемешивая его при подогреванииодо 80 С. Такую температуру поддерживают в течение 1 ч. Далее температуру снижают до 20 С. Для освобождения экстракта от белка к охлажденному раствору добавляют 37 л воды и 15 л 1 О -ного раствора коллоидного железа и доводят рН раствора до . б,б 12 -ным раствором аммиака. Выпавший осадок отделяют с помощью бумажного фильтра, а раствор собирают в емкость. Отделенный осадок коллоидного железа вместе с фильтратом переносят в экстракторный аппарат и заливают 30 л 0,1 н.3 1113 раствора соляной кислоты при одновременном подогреванин до 80 С в течение 16 мин, а. затем охлаждают до 30 С (15 мин), В суспензии устабнавливают рН 6,5 путем добавления 121-ного раствора аммиака После установления нужного рН в суспензии осадок отделяют, а надосадочную жидкость присоединяют к первоначальному Фильтрату. Полученный осадок 1 О повторно помещают в емкость и дважды обрабатывают, как описано (2,5 ч), после чего образуется высококонцентрированный раствор. Фильтраты объединяют и доводят рН до 3,5. Биологическая активность такого концентрированного раствора составляет 60+10 МЕ/мл. Данный раствор разбавляют дистиллированной водой, консервируют нипагином, фильтруют и разливают в полиэтиленовые флаконы емкостью 1,5 мл с биологической активностью 20 и 40 ИЕ/мл.Биологическую активность конечного продукта определяют двумя мето дами: методом определения биологической активности по вазопрессорному эффекту на белых беспородных крысах массой 250-300 г. основанным на способности вазопрессина, содержащегося в препарате, повьппать уровень артериального давления (испытания приведены в сопоставлении с Международным стандартом ВОЗ); методом определения биологической активности35 по способности препарата задерживать диурез у белых крыс с водной нагрузкой по сравнению с контрольной группой животных, которым не вводился испытуемый препарат. Результаты исследований антидиуретической активности средств, полученных известным и предлагаемым способами. проведенных через 5 ч после водной нагрузки (1 О мл физиологического раствора в/бр,) представлены в таб 26 4лице (в 1 мл 20 Ед, животным вводят по 0,02 Ед/100 г массы тела).Предлагаемый способ получения антидиуретического препарата дает возможность использовать конечный продукт в более удобной лекарственной форме, в виде носовых капель, а не в виде понюшекПримером практической реализации предлагаемого способа является новая технология получения лекарственного препарата, которая предусматривает экстрагирование биологически активных веществ (нейропептндов) в раствор, который стандартизируется и может использоваться в,медицинской практике в виде носовых капель по следующей прописи: концентрированный раствор стандартизованного целевого продукта 35 мл (2000 МЕ); нипагин (консервант) 100 мг; дистиллированная вода до 100 мл.Полученный раствор разливают во флаконы до 1 мл с 20 МЕ или 40 МЕ/мп.При приготовлении раствора с 40 МЕ/мл целевой продукт в данной прописи удваивается. Предлагаемыйспособ обеспечивает получение антидиуретического средства с большимвыходом.Практическое внедрение предлагаемого способа в производство способствует получению эффективного лекарственного средства для медицинской практики. Эффективность предлагаемой технологии выражается вудешевлении технологического процесса получения препарата за счетувеличения выпуска готового лекарственного средства более чем в1,5 раза по сравнению .с адиурекрином, Удешевление технблогического процесса составляет 607. от прототипа и исключает необходимость ввыпуске трудноиспользуемого и ма" лоэффективного лекарственного препарата адиурекрина в порошке.1113126 Количество выделенной мочи Характервоздействия Количествоживотных мл ддиурекрин 7,5 Контроль 75 6,8 Опытная 68 Контроль 6,3 Опытная 8,3 83 Контроль 6,5 Опытная Средство, полученное предлагаемым способом 70 Контроль 40 Опытная 80 Контроль 48 Опытная 8,1 81 Контроль 4,5 45 Опытная Составитель В.БрусиловскаяРедактор Т.Колб Техред М,Надь Корректор Ю.Макаренко Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Заказ 6488/6 Тираж 687ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5