Способ определения жизнеспособности яиц цестод

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ае а АНИЕ ИЗОБРЕТ К АЗТОРСИ.ТЕЛЬСТВУ й зональныйкий ветеринарЯР О СО ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(56) 1. Камалова А.Г. Разработка исравнительная оценка методов установления жизнеспособности яиц тениидКанд,дис. И., 1948,2. Е.Меущаг 1 ап.взаимосвязь междухозяином и паразитом при эзинококкозе.-Американский журнал тропическоймедицины и гигиены т.10, вып.5,961, с.719-726. дш А 61 В 10/ОО; С 01 И 33/48(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ЯИ 11 ЦЕСТОД, включающий активацию яиц путем инкубации их при 36-40 С в водном растворе, содержащем пищеварительный фермент - панкреатин, соду .пищевую и овечью желчь, о т л ич а ю щ и й с я тем, что,с целью повышения точности способа и его ускорения, перед инкубацией яйца цестод помещают в 1,3-2,2 й-ный раствор едкого калия или соляной кислоты на 8- 12 мин, 109 3324 ЪИзобретение относится к ветернна- нии указанного времени пробу вынирии, в частности к определению жизне- мают иэ термостата и яйца дваждыспособности яиц гельминтов, промывают, Для этого раствор остоИэвестен способ определения жизне- рожно удаляют фильтровальной бумагойспособности яиц тениид, включающий 5 так, чтобы не захватить яйца эхиновоздействие на них 1%-ного раствора кокков и часть освободившихся инкосернистого натрия 11, сфер, затем вливают в лунку с помощьюНедостатком этого способа являет- капельницы 10-12 капель дистиллирося непригодность его для определения ванной воды, снова удаляют с помощьюжизнеспособности яиц других видов 10 фильтровальной бумаги, снова добавляцестод, как эхинококков, ют воду в лунку и вновь удаляют. ПодИзвестен также способ определения микроскопом можно пронаблюдать освоЖизнеспособности яиц эхинококков, божденные онкосферы яиц в результавключающий активизацию яиц путем ин- те действия 2 .-ного раствора едкогокубации их при 36-40 С в водном раст калия,воре, содержащем пищеварительный После этого в луночки вливаютфермент - панкреатин, соду пищевую раствор, содержащий пицеварительн.:еи овечью желчь2.секреты, на основе воды, соду пищеНедостатком данного способа явля- вую и кишечные Ферменты, а именно,%:ется низкое содержание освободивших панкреатин 1, желчь овечья 20 и содася и подвижных онкосфер, длитель- пищевая 1,3, вода дистиллированнаяность воздействия на яйца, сложность остальное, помещают в термостат иопроцедуры активирования с применением выдерживают там при 38 С в течениецентрифугирования пробирок для осаж мин. После этого пробу вновь выдения яиц. 25 нимают из термостата.Целью изобретения является повыше- Для подсчета освободившихся онконие точности способа и его ускорение, сфер часть осадка суспензии переноПоставленная цель достигается тем, сится на другое предметное стекло,что проводят активизацию яиц путем после чего ведется просмотр при маломоинкубации их при 36-40 С в водном 30 (объектив х 8) и большом (объектив храстворе, содержащем пищеварительный 40) увеличении микроскопа на предфермент - панкреатин, соду пищевую мет наличия онкосфер и их подвижи овечью желчь, перед инкубацией ности,яйца цестод помещают в 1,8-2,2 -ный При данном способе освобождаетсяраствор едкого калия или соляной от оболочек яиц 98% онкосфер, изкислоты на 8-12 мин, них 79% - подвижных.оЗатем инкубируют при 36-40. С,про- П р и м е р 2. На шести предметмывают, добавляют водный раствор, ных стеклах с лунками или часовыхсодержащий панкреатин 0,8-1,21 овечью стеклах поместили с помощью глазнойжелчь 18-22, соду пищевую 1,1-1,51 и 4 О пипетки по 2-3 тыс. зрелых свежевывновь инкубируют в течение 10 мин, деленных яиц эхинококков, хранивпосле чего пробу просматривают под шихся в физрастворе в холодильникемикроскопом. при температуре воздуха 5 Т.П р и м е р 1, Членики эхино- Две пробы яиц были опытными (1 икокков с помощью препаровальных 2), остальные четыре (3-6) - конт-.игл освобождают от яиц, к последним рольные.добавляют дистиллированную воду и В качестве активизирующих средполученную суспензию яиц с помощью приготовили три раствора. Растворглазной пипетки вливают в луночку 1 - 2%-ный водный раствор щелочи КОН.предметного стекла в количестве до 5 О Раствор 2 имеет следующий состав2-3 тыс.яиц, на дистиллированной воде: сода пиПосле этого лишняя вода удаля- щевая (Яа 11 СО ) 1,3 , панкреатин меется с помощью фильтровальной бума- дицинский 1,желчь овечья 4 кап,/ги и в луночку добавляется с помощьюмл раствора,капельницы или глазной пипетки 10- , Раствор 3 .имеет следующий состав:12 капель 2%-ного водного раствора сода пищевая 1,З , панкреатин медиедкого калия, Предметное стекло поме цинский 1 , желчь овечья 4 кап./1 млщают в термостат и выдерживают там холестеринтвин - 80) 0 05", трипо3 10933Раствор 4 - 17-ный водный растворсернистого натрия,В лунки предметных стекол двухопытных проб 1 и 2 добавили с помощью капельницы 10 капель раствораДве контрольные пробы 3 и 4заполнили 10 каплями раствора З,контрольные пробы 5 и 6 заполняли 10каплями раствора 4. После чего все Об проб яиц эхинококков поместилив термостат при температуре воздуха37-38 С. Через 8-10 мин все пробыовынули иэ.термостата.В опытных пробах 1-2 жидкость уда. 5лили с помощью фильтровальной бумагитак,чтобы яйца остались в осадке.Затем лунки заполнили каплями дистиллированной воды и снова удалили надосадочную часть жидкости. Промываниекультуры яиц эдинококков повторили2-3 раза. В контрольных пробах отмывание яиц не проводилось,Результаты воздействия сред наблюдали под малым (х 8) и большим (объек- д 5тив х 20) увеличением микроскопа.После отмывания яиц в опытные пробы добавили по 10-12 капель раствора2, В контрольных пробах 2 и 4 и 5 иб оставались прежние активизирующиерастворы 3 и 4,Все пробы яиц Е,ягапо 1 озцз сновапоместили в термостат при режиме37-38 оС продолжительностью на 10 мин,По истечении указанной экспозициипробы яиц эхинококков достали из35термостата и наблюдали под микроскопом. Путем подсчета количества вылупленных и подвижных онкосфер учиты вали эффективность нового и известных способов активизации яиц.При наличии в пробах Онкосфер, в том числе:. и активных, часть осадка спомощью глазной пипетки перено ,сили в другую лунку и исследовали на процентное содержание онкосфер, а также на наличие подвижных зароды дыней. В случае отсутствия или малого количества выделенных онкосфер 50 пробы с яйцами снова помещали в термостат на 10-15 мин, после чего их исследовали прд микроскопом. При необходимости термостатирование культур яиц повторяли 2-3 раза, об щей продолжительностью до 90 мин.П р и м е р 3. На четырех предметных стеклах с лунками или на ча" 24 4совых стеклах поместили с помощьюглазной пипетки по 2-3 тыс, свежевыделенных яиц. М. мультицепс, выдавленных из зрелого членика цестоды, хранившегося в физрастворе приотемпературе воздуха 5 С в холодильнике,Две пробы заведомо живых яиц былиподопытными, две служили контролем.В качестве активизирующих средиспользовали три раствора.Раствор 1. 27.-ный водный растворсоляной кислоты (НС 1). Раствор 2имеет следующий состав, г/Х содапищевая (ИаНСО ) 1,3, панкреатин медицинский 1,2, 4 кап 1 мл растворадицинский 1,2, желчь овечья 4 кап,/1 мл раствора, вода дистиллированнаяостальное,Раствор 3. 1 Е-ный водный растворсернистого натрия.В лунки предметных стекол опытныхпроб 1 и 2 добавили с помощью капельницы по 10 капель раствора 1.Две контрольные пробы 3 и 4 заполнили 10 каплями раствора 3, Затем 4пробы яиц поместили в термостат прио38 С. Через 9-10 мин все пробы вынули иэ термостата. В опытах 1 и 2 спомощью фильтровальной бумаги жидкость осторожно удалили так, чтобыяйца остались в осадке, Затем лункизаполнили несколькими каплями дистиллированной воды и снова удалили надосадочную часть жидкости. Отмываниекультуры яиц М.мультицепс повторилидважды. В контрольных пробах отмывание яиц не проводили.Результаты воздействия сред наблюдали под малым (объектив х 8) и большим (объектив х 20) увеличением микроскопа,После отмывания яиц в опытные про"бы добавили по 10-13 капель раствора 2. В контрольных пробах оставался активирующий раствор 3.Все пробы яиц М.мультицепс сновапоместили в термостат при температуре воздуха 37-38 С продолжительносТьюна 9-10 мин. По истечении указаннбй экспозиции пробы яиц достали из термостата и наблюдалипри малом и большом увеличении микроскопа.Предложенный способ определенияжизнеспособности яиц цестод повышаетэффективность активизации яиц цестод,достигается выход 987 освободившихсяонкосфер, из них 807. подвижных, или3 1093324 Э Составитель М.БелоусоваРедактор С,Патрушева Техред Т.фанта Корректор А.Лежннна Заказ 3326/3 Тираж 688 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 в среднем активность повышается в два раза; ускоряет процесс определе ния жизнеспособности яиц в 4,5 раза; .предложенный способ может с успехом применяться для определения жизнеспособности яиц цестод для выявления овоцндных препаратов.