Способ диагностики кандидоза

ссюэ сОВетскихКЦВФМПУИЕПЕКРЕСПУБЛИК з(дэ Л 61 В 10 00 госуддрственный комитет сссрпо делАм изОБРетений и отнрытий 1,- йВЫК. ОПИСАН ЗОБРЕТЕН ИДЕТ ЕЛЬСТВ 285/28-13 21) 342 22) .21 46) 23 72 04 82 5.84 Б арственный усовершенст- Кирова 8)Шекланов Н.Д.инской миколо 1978.( ) Т. (71) Лен ордена Г вования (53) 61 (56) 1 . Руководс гии, И. Н. Лебедеваиградскнй госенина институврачей им. С6.992,282(088Кашкин П.Н"Медицина",(54) (57) СП 0 СОБ ДИАГНОСИКН КАНДИДОЗА путем выделения и исследования патологического материала, о т л и ч а ю ц 1 и й с я тем, что, с целью ускорения диагностики, исследуют адгезивную активность СапйЫа а 1 Ь 1 сапз путем инкубации их с эпит лиальными клетками при соотношенпи 1:100 в течение 1,5-2 ч в термоста и при адгезии в среднем 16 и более клеток гриба на одну эпителиальную клетку диагностируют кандидоз.Изобретение относится к областимикологии и может быть использованов диагностике кандидоза, вызванногоСапд Ыа а 1 Ысапз,Наиболее часто кандидоэ вызьваетсядрожжеподобными грибками С.а 1 Ьсапе.Известен способ комплексной клинико-лабораторной диагностики кандидоза, включающий клиническое, микроскопическое, культуральное, серологическое исследование и постановку внутри"кожных проб со специфическим аллергеном 1.Недостатком способа является высеваемость С,а 1 Ьсапэ, положительные серологические реакции и результаты постановки внутрикожных проб соспецифическим аллергеном у частипрактически здоровых лиц, а такжечасто негативные результаты этих тес"тов у больных кандидозом, В связи сэтим кандидоэная природа заболевания устанавливается лишь с учетомдинамики изменения культуральных находок и серолоических сдвигов (увеличение количества клеток гриба в патологическом материале, нарастаниетитров противокандидозных антител всыворотке крови) при повторных исследованиях,Цель изобретения - ускорение диаг"ностики кандидоза, вызванного С,а 1 Ысапз.Поставленная цель достигается тем,что согласно способу путем выделенияи исследования патологического материала обследуемых лиц исследуютадгезивную активность СапйЫаа 1 Ь 1 сапэ путем инкубации их с элителиальными клетками при соотношении1:100 в, течение 1,5-2 ч в термостатеи при адгезии в среднем 16 и болееклеток гриба на одну эпителиальнуюклетку диагностируют кандидоз.Способ осуцествляется следующимобразом,В фазу овуляции (14-18-й деньменструального цикла) от 22 здоровыхженцин забирают поверхностные эпителиальные клетки слизистой оболочки влагалища путем смьва вагинального содержимого О-ю мл стерильного абуференногофизиологического раст.вора (ЗФР) рН 7,2,ьПолученный материал смешивают трижды, отмьвают,таким же раствором центрифугированиемв режиме 2000 об./мин по 10 мин исуспендируют в ЗФР рН 7,2 до конеч П р и м е р 1. Больная 37 лет поступила в клинику глубоких мико" эов с жалобами на эуд наружных половых органов в области ануса, небольшие пенисто-творожистые выделения из влагалыда. При осмотре гинекологом обнаружены явления вульвовагинита. Антитела к специфическому анти- гену присутствовали в сьворотке крови в титрах 3:64. При микроскопии мазков отделяемого влагалища обнаружена влагалищная трихимонада. Посев патологического матерпала на 4045 50 сусло-агар выявил рост дрожжевых грибов в .количестве 12500 колоний/мл, культура идентифицирована как Сапсавда а 1 Ьхсапэ, Выделенный гриб в тот же день засевали на сусло-агар, ин 55 кубировали 2 сут при 37 ОС. Культуру гриба смывали с агара и определя" ли ее адгезивную активность. Индекс адгезии составил 18,0,что указьвало ной концентрации 50000 клеток в 1 мл(подсчет клеток осуществляют в каме.ре Горяева). Двухсуточную культуруисследуемых штаммов С,а 1 Ьсапз, выращенных на сусло-агаре, смываютЗфР рН 7,2, профильтровывают через6-слойный марлевый фильтр, троекратно отмывают от остатков среды20 объемами ЗФР рН 7,2 центрифугированием при 2000 об,/мин в течение15 мин и взвешивают в таком же растворе до концентрации клеток 500000вмл 0,25 мл суспензии эпителиальных клеток, смешивают с равным5объемом взвеси гриба и полученнуюсмесь инкубируют в термостате при37 С в течение 1,5 ч при периодичес.оком перемешивании. Затем материал ресуспендируют и на предметных стеклахготовят по 5 мазков для каждого изисследуемых штаммов. Мазки высушиваютпри комнатной температуре, окрашивают0,17.-ным раствором трипанового синего в течение 10 мин, остатки краскисмьвают слабой струей водопроводнойводы и стекла вновь подсушивают. Вкаждом мазке под микроскопом подсчи"тывают общее количество клеток гриба,прилипших к 100 неповрежденным 30эпителиальным клеткам. Результатывыражают индексом адгезии, определяющимся по формуле:общее количество прилипшихклеток гриба5001093323 4 активность полученного гриба, Индекс адгезии оказался равным 6,2, что сви детельствовало о кандиданосительстве у данной больной. 5 3на наличие у больной кандидоэноговульвовагинита,Действительно, на основании пов"торных микологических и серологических исследований, проведенных черезнеделю, у больной подтвердилось наличие кандидозного вульвовагипита.Больной поставлен диагноз хронического вульвовагинита смешанной кандидозно-трихомонадной этиологии в стадии обострения. Сочетанное лечениепротивогрибковыми и антитрихомониазными препаратами привело к положительному эффекту.П р и и е р 2, Больная 42 лет поступила в клинику глубоких микозов сжалобами на сухой постоянный кашель,затрудненное дыхание, боли в левомбоку при вдохе, непереносимость едкихзапахов, слабость, субфебрильную тем.пературу по вечерам, головные боли.В 1977 г. впервые перенесла пневмо-.нию, после чего беспокоит постоянныйкашель, слабость, периодическое повы.йение температуры до субфебрильной.С 1975 г. на работе имеет контакт сплесневыми грибами. При объективномОбследовании у больной обнаруженыявления трахеобронхита,При бактереологическом исследова"мии мокроты выявлен стафилококк. 21апреля иэ мокроты выделены плесневые грибы (аспергил и пеницилл). Приповторном микологическом исследовании патологического материала, проведенном 5 мая, в мазке мокроты обнаружены единичные дрожжевые клетки,а посевном материале - дрожжевые гри.бы в количестве 400 колоний /мл, которые были идентифицированы какСапдда а 1 Ьхсапэ, Одновременно вы"деленную культуру гриба засеяли насусло-агар, инкубировали 2 сут при37 С и 13 мая определяли адгезивную 45 количествоштаммов индекс адгеэии От 16 до 17 От 17 до 18 От 5 до 6 От 6 до 7 Штаммы гриба, выделенные отздоровых количество индекс адгезииштаммов Действительно, последующие микологические и иммунологические исследования, проведенные спустя неделю,подтвердили отсутствие кандидоза у10 больной. Был поставлен диагноз хро"нического бронхита бактериальноплесневой этиологии в стадии умеренного обострения, микогенной сенсибилиэации к СапдЫа а 1 Ъсапз,обус 15 ловленной кандидоносительством вбронхахТаким образом, предложенный способ позволяет обойтись при диагностике кандидоза без постановки сероло20 гических реакций и внутрикожных проб,а также исключает необходимость повторных культуральных и серологических исследований,Предложенный способ позволяет сок 25 ратить Бремя диагностики кандидоза насрок около б дней.Предлагаемое изобретение проверено на 20 штаммах СапдЫа а 1 Ьсапз,выделенных от больных кандидоэным30 вульвовагинитом, и 10 культурах тогоже гриба, полученных от здоровых женщин. Результаты исследования показаличто у грибов., полученных из влагалищаздоровых женщин, индекс адгезии гриЗ 5 ба к клеткам эпителия влагалища непревышал 1 1, у грибов, выделенных извлагалища здоровых женщин, этот показатель равнялся 16 и более.Результаты, опытов представлены40 в таблице.Таким образом, предложенный способ позволяет сократить время исследо.вания с 10 до 4-х дней, что ускоряетдиагностику кандидоза на 6 дней. Штаммы гриба, выделенные отбольных1093323 Продолжение таблицы Штаммы гриба, выделенные отздоровых Штаммы гриба, выделенные отбольных индекс адгезии количествоштаммов индекс адгезии количествоштаммов 23,4 Составитель Г, КрюковаРедактор С.Патрушева Техред Т.Фанта Корректор А,Лежнина 3326/3 Тираж 688 Подписно е ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Иосква, Ж, Раушская наб., д,4/5Заказ Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 От 7 до 8 От 8 до 9 От 18 до 19 От 19 до 20