Питательная среда для получения сферопластов микобактерий туберкулеза

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК зсМ) С 12 К 1/20 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 4 чно-исследовательуле 08 ТЬе пдисй 1 оп Ьу уре дгоийЬ 1 и М 1 1. М 1 сгоЬ 1 о 1 оуу 0,1 5-0,17 0,05-0,07 2,5-3,0 1 5,0-20,0 08-10 0,4-0,6 ОстальноеСРЕДА ДЛТОВ МИКОБдержашая кмешенный,ешенный, м Кт- гГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(71) Белорусский н ский институт тубер (53) 576,8.093.1(56) 1., И 111 ей М. 1 уяоыее оГ ап 1.-с соЬасег 1 а.-Сапад 19 бб, 12, р. 11-1 б(54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ ПОЛУЧЕНИЯ СфЕРОПЛАС ГЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА, с лий фосфорнокислый одноза рий Фосфорнокислый двуэам.ЯО 1057533 ний сернокислый, глицерин, сахарозу, лизоцим и дистиллированную воду, о т л и ч а ю ш а я с я тем, что, с целью ускорения получения сферопластов, она дополнительно содержит лаурилсульфат натрия при следуюшем количественном соотношении компонентов, мас, %;Калий Фосфорнокислый,однозамешенный 0,1-0,15 Натрий фосфорнокислыйдвуэамешенныйМагний сернокислый 5 ГлицеринСахарозаЛизоццмЛаурилсульфат натрияОистиллированная вода1057533 30 Изобретение относится к микробиологиив частности к бактериологической диагностике, и касается питательной среды дляполучения сферопластов микобактерий туберкулеза, 5Известна.питательная среда для получения сферопластов микобактерий туберкулеза, содержащая калий фосфорнокислыйоднозамещенный, натрий фосфорнокислыйдвузамещенный, магний сернокислый, глицерин, сахарозу, лизоцим, цитрат аммония,аспарагин, бактоагар, бычий сывороточныйальбумин, никотинамид, хопестерол, ЭЙТВи дистиллированную воду 1Однако известная среда не обеспечи 15вает быстрого псщучения сферопластов,Гжель изобретения - ускорение получениясфер оппас тов.Поставленная цель достигается тем, чтов питательной среде для получения сферопластов микобактерий туберкулеза, содер жащей калий фосфорнокислый одноэамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный,магний сернокислый, глицерин, сахарозу,лизоцим и дистиллированную воду, она ,25допопнительно содержит лаурилсульфатнатрия при следующем количественном соотношении компонентов, вес.%.Калий фосфорнокислыйодн оэвмещенный 0,1-0,15На трий фосфорнокислыйдвуэвмеще нный 0,15-0,17Магний сернокиспый 0,05-0,075Глицерин 2,5-3,0Сахароза 15,0-20,0Лизоцим 0,8-1,0Лаурилсульфат натрия 0,4-0,6Дистиллированная вода ОстальноеСреду готовят следующим образом.П р и м е р 1. Соли, глицерин и саха 40розу берут в следующем порядкев соотношении ингредиентов, вес,%;Калий фосфорнокиспыйоднозамещенный 0,125На трий фосфорнокиспыйдвуэамещенный 0,175Магний сернокислый 0,65Сахароза 17,5Глицерин 2,75Указанные ингредиенты растворяют в2100 мп дистиллированной воды и стери 50лизуют в автоклаве при 0,5 втм в течение 30 мин, После охлаждения раствора кнему добавляют, соблюдая стерильность,лиэоцим и лвурилсульфат натрия при следующем соотношении ингредиентов, вес,%:Лиэоцим 0,9Лаурилсульфат натрия 0,5Среда готова к применению,П р и м е р 2, Среду готовят при следующем соотношении ингредиентов, вес оКалий фосфорнокислыйоднозамеще нный 0,1 На трий фосфорнокислыйдвуэамеще нный 0,15 Магний сернокислый 0,05 Глицерин 2,5 Сахароза 15,0 Лиэоцим 0,8 Лаурилсульфат натрия 0,4 Дистиллированная вода Остальное В приготовленную среду помешают микобактерии туберкулеза человеческого вида штамм НКЧ в концентрации 0,05 г сухого веса культуры на 1 м среды (или 5 г на 100 мл среды), Среду с помещенным в нее штаммом инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37 С после чего полученные сферопласты трижды отмывают путем це.нтрифугирования цри 3 тыс. об/мин, физиологическим раствором, При этом общий вь 1 ход биомассы сферопластов составляет 4,5 г или 90 оот исходного веса культуры, При весовом соотношении ингредиентов среды ниже приведенных в примере значений выход биомассы существенно снижается, Так, при весовом соотношении ингредиентов среды ниже приведенных в данном примере значений на 0,05-0,1 выход биомассы сферопластов с предлагаемой среды составляет 65-75% от исходного веса культуры. П р и м е р 3, Среду готовят при следующем соотношении ингредиентов, вес оКалий фосфорнокислыйоднозамеще нный 0,15На трий фосфорнокислыйдвузамещенный 0,2Магний сернокиспый 0,075Глицерин 3,0Сахароза 20,0Лизоцим 1,0Лаурилсульфат натрия 0,6Дистиллированная вода ОстальноеВ приготовленную среду помещают микобактерии туберкулеза человеческого вида штамм Н Ь,Ч в концентрации 5 г на 100 мл среды, Среду с помещенным в нее штаммом инкубируют в термостате в течение 24 ч при 37 С, после чего полученные сферопласты трижды отмывают путем центрифугирования при 3 тыс. об/мин в физиологическом растворе. При этом общий выход биомассы сферопластов состввпяет 4,9 г или 97% от исходного веса культуЛизис Л Лизис клеток то Д (0,8% лиэоцим0,4% лаурилсульфта натрия) 0-8 70 9 частичный лии елизоцималаурилсульатрия) 0,1 О 0,6 0% 8 0-3 час тичныйлизис клеУ(12,0% лизицима и 0,6% лаурилсульфата натрия) Лизис Лизис клеток кле ток 1 5-2 с изис е ток изисклеток клеток НИИПИ Заказ 9469/3 Тираж 5 писно ктная, 4 Филиал ППП "Патент", г, Ужгород 3 1057 533 4ры, Максимальные весовые значения ингре- цима и 0,4% лаурилсульфата натрия, в диентов, приведенные в данном примере, которой процент сферопластообразования являются оптимальными, при которых на за 24 ч инкубации составил 96,8%. Лиэодреде наблюдается лизис сферопластов, цимы Х и ХХ вызывают лизис клеток.Контроль эа сферопластообраэованием Б Использование питательной среды позпроводят методом фаэовоконтрастной и воляет ускорить получение сферопластов электронной микроскопии, Среды имеют микобактерий туберкулеза (24 ч вместо следукнцие характеристики,сферопласто-14 сут), удешевить среду, исключить образования (см, табл). длительный процесс пассирования, что, вКак видно.из таблицы, наиболее эффек- свою очередь, позволяет снизить расходютнвной оказалась среца П с 0,8% лизо- питательных сред.Сферопластообразование на испытуемых средах