Штамм г04а200, используемый для приготовления бактерийных препаратов

ИЗОБРЕТЕНИЯ РСКОМЮ ТЕЛЬСТВ П 1 М АЭОЬЕЗ-. ЗУЕМЫЙ ДЛЯЬНЫХ ПРЕПАРАно ИЫодас 1 е 200, ЦМПМ ур микроор спользуемы ийных преп шш або 1 ев- -2169 коланизмов ВНИИ- для приготовратов,а ина тикийут А.Ми и СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ 21) 3343967/28-13; 146 ) 23, 04. 83. Бюл. й 1572) Н.П. Тарабрина, В.М. КоршБ.В. Пинегин, Г,И. Гончароваи А.М. Лянная71) 2-й Московский ордена Ленгосударственный медицинский интут им.:Н.И. Пирогова и Московнаучно-исследовательский инстиэпидемиологии и микробиологииим. Г,М, Габричевского53) 576 85 088.8)56) 1, Гончарова Г.И., ЛяннаяКультуральная, морфологическаябиохимическая характеристика. -МНИИЭМ им, Г.Н, ГабричевскогоТ. ХТЛ, М., 1969, с, 415-4262. Авторское свидетельствопо заявке И 3237027/28-13)кл. С 12 1-00, 21.07.81 1,прото,Я 0101347 Р 1/04; С 12 1 Ч 1/00 Р 1/04; С 12 й 1/СО Ь 4) ШТАММ ВПЮОМСт сеУт 18 ГО 4 А 200, испО ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИ ТОВ,157) Штамм В30 35 Минимальные ингибирующие концентрацииантибиотиков, мкг/мл или ЕД/мл антибиотик АнтибиотикоустойчивыйштаммГО 4 а 200 ИсходныйштаммГОСтрептомицин 200 220 2200 Мономицин 100 502000 КанамицинАмпициллин 100 О,1 220 Гентамицин 2200 40 1 101347Изобретение относится к микробиологической промышленности и касаетсяпроизводства бактерийных лечебныхпрепаратов.Известен штамм Вас 1 егилп ЬеГипйапдля получения бификала и бифидум-бактерина 1 1 .Однако известный штамм не обладает устойчивостью к антибиотикам.Известен штамм ВеГИоЬас 1 егиап1 опрпп Д 4 а 200, для приготовлениябактерийных препаратов, обладающийантибиотикоустойчивостью 1 2 1 .Однако бактерийные препараты,приготовленные из известного штамма,эффективны только при лечении детей.Целью изобретения является созда",ние штамма ВЫЫоЬас 1 егып айо 1 еясепМя Г 04 а 200, обладающего антибиотикоустойчивостью, эффективного длялечения взрослых.Штамм ВГИоЬас 1 егап айо 1 еясепИя ГО 4 а 200 выделен из исходногоштамма ВГЫоЬасСегкп айо 1 еясепМяГОпутем селекции. Штамм деПонироеан в коллеции культур микроорганизмов ВНИИ-генетика номеромЦМПМ Вб 9Штамм хараКтеризуются следующимисвойствами. Культурально-морфологические признакиКлетки палочковидной формы, иногда с утолщениями или У-образными раздвоениями на одном или двух концах. В мазках часто обнаруживаются 3 2зернистые формы, Грамположительны,иногда окрашиваются по Грану отрицательно, располагаются беспорядочно или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы.В высоком столбике полужидкогоагара Блаурокка образуют колонии ввиде пирамидок или дисков размеромдо 3-5 мм е диаметре в течение 3-5 сут. В жидкой среде Блауроккадают крошкообразный рост по всейпробирке, кроме зоны аэробиоза, Наплотной и жидкой среде растут такжев присутствии 50 мг/мл канамицина,2 мг/мл гентамицина, 2 мг/мл мономицина и 200 мкг/мл ампициллина.В жидкой среде в присутствии антибиотиков вырастают.на 4-е сутки, наплотной среде - на 4-5-е сутки. После лиофильного высушивания ростштаммов может замедляться.Физиолого-биохимические свост 5 а.Облигатный анаэроб, растет. в высоком столбике 0,73-ного агара или1 О мл жидкой среды в пробирке. Максимум роста при 37,5 ССбраживает арабинозу, ксилозу,целлобиозу, инулин, манниб, салицин.Антагонистические свойства,Проявляют антагонистическую активность по отношению к Рго 1 еця пюгдапз.(штамм 12), энтеротоксигенным штаммам ЕясЬегсМа со 1 05, 015(штаммы 122 и 111 соответственно), БЬде 11 а Г 1 ехпег (штамм 170).Чувствительность к антибиотикампредставлена в таблице.,4Продолжение таблицы Иинимальнце ингибирующие концентрацииантибиотиков, мкг/мл или ЕД/мл АнтибиотикоустойчивыйштаммГО 4 агоо ИсходныйштаммГОАнтибиотик ТетрациклинРифампицин 0,8.0,8 Хлорамфеникол Линкомицин 0,1 0,1 Нистатин 100 100 Как видно из приведенных данных, штамм В, айо 1 еясепСя ГО 4 а 200 с приобретением устойчивости к антибио тикам сохраняет свои основные свойст-ва, в том числе антагонистическую активность по отношению к патогенным энтеробактериям. Кроме того, лабораторная проверка его непатогенность Зф для экспериментальных животныхмышей; крыс, морских свинок ), а также для людей.Штамм используют следующим образом. 33П р и м е р 1 . Изучение влияния совместного применения антибиотиксустойчивых бифидобактерий и антибиотиков на выживаемость мышей при лучевой болезни.С целью усиления лечебного эффекта антибиотиков и одновременной колонизации кишечника бифидобактериями мышам с постлучевым дисбактериозом вводили совместно два антибиотика45 ампициллин и гентамицин ) и антибиотикорезистентные бифидобактерии В. айо 1 еясепдя ГО 4 а 200.Беспородных мышей весом 18-18,5 г облучают на установке ГУБЭдозой 700 Рмощность дозы облучения фф 180 Р/мин ), После облучения мышей разделяют на 4 равные группы по 15 животных .в каждой. Первая группа мышей получает ампициллин, гентамицин и бифидобактерии, вторая группа жи- фф ватных получала только бифидобактерии, третья группа животных получала . только антибиотикиампициллин, гентамицин ). Животным четвертой группы вместо лечебных препаратов вводят стерильный Физиологический раствор хлористого натрия. Препараты вводят интрагастрально через зонд один раз в сутки. Суточная доза ампициллина составляла 1 мг, гентамицина - 20 мкг, бифидобактерий - 1 х 10 ф жизнеспособных клеток, Препараты вводят в объеме 0,25 мл.Для лечения облученных животных используют следующую схему: антибиотики и бифидобактерии на 1,3, 5,7,9, 11, 13, 15, 17, 19,21 день послеоблучения ( с интервалом 48 ч У. Совместное введение ампициллина, гентамицина и бифидобактерий ( штамм ГО 4 а 200 ) при лечении облученных мышей обеспечивает увеличение процента выживаемости этих животных по сравнению с . мышами, получавшими только антибиоти" ки, или нелеченными мышами. На 19-й день после облучения процент выживаемости мышей в группе, получавшей ампициллин, гентамицин и антибиотико устойчивые бифидобактерии, в группе, получавшей только бифидобактерии, в группе, получавшей только ампициллин и гентамицин, и в группе мелеченых животных составляет соответственно 26,6;16,3; 13,3, и 10,0. На 30-й день после облучения процент выжи" маемости в 1-й, 2-й, 3"й и 4-й группах соатавляет 26,6; 16,3; 13,3 и 6,6 соответственно, Выживаемость в 1-й группе была выше, чем в 4"й группе в 4 раза.Составитель К, ОвчинниковРедактор О, Половка Техред Л,Пекарь Корректор,М. Лемчик Заказ 2942/34 Тираж 521 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Подписное Филиал ППП "Патент"г. Ужгород, ул, Проектная, 4. 10134Таким образом, для эффективного лечения постлучевого дисбактериоэа наряду с антибиотиками целесообразно испольэовать бактериотерапию с применением антибиотикорезистентных 5 штаммов, что позволяет начинать бактериотерапию с самого начала леченияч и одновременно со стерилизациеи желУ" дочно-кишечного тракта антибиотиками, проводить заселение его представите е лями нормальной микрофлоры.1П р и м е р 2 . Определение колонизационной активности бифидобактерииштамм ГО 4 а 200 ) при введении их в желудочно-кишечный тракт. 5Исследование проводят на 4 добро" вольцахавторах ). 2-суточную культу ру бифидобактерий штамма ГО 4 а 200, выросшую на жидкой среде Блаурокка, центрифугируют при 3,5 тыс об/мин. 20 при 4 С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остужен- . ной до комнатной температуры воде, после чего с помощью оптического стандарта мутности определяют концентрацию микробных тел в исходной суспензии, а затем разводят эту суспензию кипяченой водой таким образом, чтобы л 1 мл ее содержалось 1 х 10клеток бифидобактерий. Все добровольВ цы принимали антибиотикорезистентные бифидобактерии через рот однократно в объеме 5,0 мл, запивая бактериаль 73 4ную суспенэию кипяченой водой, Передприемом бифидобактерий, а такжечерез 3 сут после приема бактерийного препарата у всех добровольцевопределяют.в испражнениях общий уровень бифидобактерий и уровень антибиотикореэистентных бифидобактерий,В результате проведенных исследований было установлено, что до приема взвеси иэ бифидобактерий в испражнениях здоровых людей антибиотикоустойчивые штаммы бифидобактерий отсутствуют. На 4-й день после приема бифидоба кте ри й количество антибиотикоустойчивых бифидобактерий составляет в среднем 2,5 х 10+ клеток на 1 г испражнений. Следует отметить, что . введение в кишечный тракт антибиотикореэистентных бифидобактерий приводит к повышению уровня эндогенных бифидобактерий, чувствительных к антибиотикам. Кроме того, прием взвеси антибиотикорезистентных бифи. добактерий ни в одном случае не вызывает каких-либо побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта, также как и со стороны всего организма в целом,Использование штамма ВГЫодас 1 егпмп айо 1 евсенИв ГО 4 а 200 позволяет проводить лечение взрослых людей одновременно с антибиотиками.