Способ идентификации лосося, кумжи и их гибридов

СОЮЗ СОВЕТСКИХсйииюакникРЕСПУБЛИН ВАО 1 о ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ( 54) (57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛОСОСя, КумИ И ИХ 1 ИБРИДОБ, предусматривакКкй взятие у рыб образцов тканей, приготовление экстрак-та белков этих тканей, электрофорез экстракта белков в полиакрилаведном геле, ннкубирование геля, получение электрофореграмм видеоспецифических белков и сопоставление последних со стандартаве, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения процесса и повиаения точности видовой идентификации, а такае возмоаности проведения анализа различных возрастных групп рыб, элек-.трофорез экстракта белков в полиакриламидном геле осуществляют в Е Течение 30-40 мин, гель инкубнруют в растворе 4-метилумбеллнферилаце тата в течение.20-60 с, а получение электрофореграмм проводят путем С сканирования геля в ультрафиолетовом свете. сИБ пвва 1 йеввпУ ггейФ"о 1 од ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ РЪ 3275513/28"13(71) Институт общей генетики А153) 639.3.03(ОРЯ. 856) 1. Тацуцс 1 Н; оЬе.гав Е,:Соби ВЕАацвс 1 е,ргойепв о 1 РафаТаоп (опсогГпопцв) сообщениеТЬе верагайоп оГ ацвс 1 е ргойево)цЬ 1 е 1 п 1 ои опс вСгепкСЬво 1 цйопв Ьу в 1 огсЬ е 1 есйгорЬоСападай .оцгпа 1 оГ 8 осЬеввеапд Рауво 1 о 9 у 1962,. чо 1. 1 О,р. 19-936.2.Раупе В.Н., С 14 А.й. апд"ТЬе ехрепсе оГ пайцга ЬуЬгЬейиееп впе Ецгореап й гоцф апд1 ааСс: ва)воп.,оцгпа 1 оЕ ГвЬч 4, В 2, 1972, р. 233"236. ИЯИзобретение относится к рыбной промышленности, а именно к способам идентификации лосося, кумжи и их гибридов, и может быть использовано для определения качественного состава и количественной оценки промысловых уловов лососей в Балтийском море отдельно по видам при искусственном воспроизводстве, включающем селекцию производителей рыб отдельно по виду "лосось" (За 1 во за 1 аг и виду "кумжаф (5 а 1 во гц 1 Фа Е) с 1 последующей выбраковкой межвидовых гибридов, а также при осуществлении контроля чистоты видов в возрастных группах молоди, выращиваемой на рыбоводных заводах.Известен способ идентификации лосося, кумжи и их гибридов, включающий взятие у рыб образца скелет" ной мышцы, измельчение его в равном объеме трис НС 1 буфера и центрифугирование в течение 1 ч для получения экстракта белков, электрофорез белков в крахмальном геле в течение 25 ч, после чего гель помещают на 4 ч в 7-ную уксусную кислоту для коагуляции белков и иХ локализации, белки окрашивают путем,выдерживания геля в течение 15 мин в 7-ной уксусной кислоте, содержащей 1 красителя "Амидочерный 10 В", затем избыток красителя удаляют иэ геля, промывая его несколькими объемами 7-иой уксусной кислоты в течение 14-18 ч и получают на геле полосы окрашенных белков в виде спектров, которые сравнивают со стандартными спектрами видоспецифических белков скелетных мышц, на основании чего идентифицируют принадлежность исследованных рыб к определенному виду ЯОднако известный способ не требует больших затрат времени и не может быть использован при оценке показателей вылова лососей по видам, поскольку операция по иссечению образцов скелетных мпац нарушает целостность кожного покрова и, следовательно, снижает товарную ценность рыб иэ промысловых уловов, поступающих на предприятия рыбообрабатывающей промышленности.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ идентификации лосося, кумжи и их гибридов, сущность которого со" стоит в том, что у исследуемых рыб берут образец крови, образец центрифугируют и Фильтруют для получения экстракта белков, проводят электрофорез полученного экстракта . белков в полиакриламидном геле в течение 3 ч, затем гель инкубируют в течение ночи в слабом растворе индьксилацетата и получают электрофореграммы видеоспецифических белкови сопоставляют последние со стандартами 121, Этот .способ также является длительным, что не позволяетиспользовать его в производственныхусльвиях. Не может быть Использованспособ и при работе с молодью рыб,поскольку у последних очень сложнополучить образец крови ввиду незна.чительных их размеров.) 10 Кроме того, известный способ недостаточно точен.Целью изобретения является ускорение процесса и повьвение точностивидовой идентификации, а также воз"15 можность проведения анализа различных возрастных групп рыб.Для достижения поставленной целив способе идентификации лосося,кумжи и их гибридов, предусматриваю 20 щем взятие у рыб образцов тканей,приготовление экстракта белков этихтканей, электрофорез экстракта белков в полиакриламидном геле, инкубирование геля, получение электро 25 Фореграмм видеоспецифических белкови сопоставление последних со стандартами, электрофореэ экстракта белковв полиакриламидном геле осуществляют в течение 30-40 мин, гель инкубируют в растворе 4-метилумбеллиферилацетата в течение 20-60 с, а полу.чение электрофореграмм проводят путем сканирования геля в ультрафиолетовом свете.Способ осуществляют следующимЗ 5 образом. У исследуемых рыб берут образец тканей мышц или внутреннегооргана (скелетная мышца, мышца серд"ца, печень, мозг, кишечник) . Образецобрабатывают 20-ной сахарозой в40 процессе его измельчения, отстаивают измельченный образец для получе"ния экстракта белков данной тканив течение 1-2 мин и проводят электрофорез в блоке полиакриламидного45 геля известным способом в течение30-40 мин, затем гель помещают в0,003-ный раствор Флюоресцирующегосубстрата-метилумбеллиферилацетата для инкубации, которую осуществляют в течение 20-60 с,После инкубации сканируют гель впроходящем или отраженном ультрафиолетовом,свете для получения электрофореграмм видеосцецифичного белка4-метилумбеллкферилацетатэкстразы,которые сравнивают с известнымистандартными электрофоретическимивариантами 4-метилумбеллиферилацетатэкстеразы лосося, кумжи и ихгибридов.60 Пр и м е р. У исследуемых рыбполучают образец ткани, например,кишечника весом 50 мг. Образец по"мещают в пробирку, приливают 3 объема по весу образца) 20-ной саха 65 розы, раздавливают его стекляннойКвалификация подокументамр/завода Год гибридлососяи кумжи лосось кумжа 1979 Производителилосося 100 р. Нева1980 Нарвский рыбоводный завод Се голетни лосося,Рыбоводный заводфТомеф (Латвийская ССР) Се гол ет ки лосося2,6 97,4 1980 ВНИИПИ Заказ 10601/8 Тираж 721 Подписное Филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4 палочкой, отстаивают измельченный образец в течение 1 мин, отсасывают надосадочную жидкость, содержащую белки данной ткани, и проводят электрофорез в блоке полиакриламидного геля в течение 30 мин. После окончания электрофореза гель извлекают из злектрофоретической камеры, помещают в 0,003-ный раствор флюоресцирующего субстрата-метилумбеллиферилацетата (4 ИУО) на 30 с и затем сканируют гель в проходящем или отраженном ультрафиолетовом свете. При сканировании в геле видны четкие Флюоресцирующие электрофоретические варианты 4-МУФ-Эст в виде дискрет ных полос, которые сопоставляют с известными стандартными электрофоретическими вариантами 4-МУФ-Эст лосося, кумжи и их гибридов, Результаты видовой идентификации рыб регист О рируют в,протоколе,В 1979 и 1980 г этим способом были проанализированы промысловые уловы лососей из рек Лснинградской области и группы молоди, выращиваемой на рыбоводных заводах Латвийской ССР и Ленинградской области. Результаты видовой идентификации производителей и молоди лососей приведены в таблице. Результаты генетико-биохимического определения долей лосося, кумжи 1 и их гибридов в промысловых уловах и в группах заводской молоди (Латвийская ССР, Ленинградская обл).Использование предлагаемого способа генетико-биохимической идентификации лосося, куюа и их гибридов в прощюсловых уловах и в группах заводской молоди дает возможность осуществлять видовую идентификацию лососевых рыб в течение 1 ч, начиная с момента получения образца тканей для анализа, позволяет использовать для анализа наряду с кровью и скелетными ьыацами другие виды тканей или органов рыб, что не нарушает их товарной ценности.Кроме того, предлагаемый способ может быть использован для качественной и количественной оценки по видам промысловых уловов лососей, поступающих на предприятия рыбообрабатывающей промышленности и на рыбоводные заводы, а также для осуществления в сжатые сроки эффективной селекции производителей, используемых в искусственном воспроизводстве запасов лосося и кумжи и для контроля чистоты видов в группах молоди, ,выращенной на рыбоводных заводах.