Способ заполнения капиллярных кювет градиентными гелями и устройство для его реализации

ОП ИСАНИЕИ ЗОВРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветсимкСоциалистическихРеспублми и 966577(22) Заявлено 04.01,81 (21) 32294 б 2/18-25с присоединением заявки йе -(5 )М. Кл. 6 01 й 27/26 3 Ъиударстееиив 1 квмитат СССР ию делам изеаретеиий и открытийЭЩГд 1Специальное конструкторское бюро биологического прибарктроеййяАН СССР и Институт биологической физики АН СССР(54) СПОСОБ ЗАПОЛНЕНИЯ КАПИЛЛЯРНЫХ КЮВЕТ ГРАДИЕНТНЫМИ ГЕЛЯМИ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ 1Изобретение относится к технике электро-" фореза, точнее к способу. заполнения капиллярных кювет градиентными гелями и устройству для осуществления способа, и может быть использовано в биологии и медицине.Известен способ заполнения капилляров градиентными гелями путем засасывания , раствора в капилляр, При этом используется устройство, состоящее из смесителя и трубки, на выходе которой устанавливается эа. полняемый раствором капилляр. Объем и крутизна градиента определяются соотношением скоростей засасывания в капилляр и выте- . кания раствора нз смесителя 11.Однако способ и используемое устройство не позволяют производить одновременное заполнение нескольких кювет.Наиболее близким техническим решением является способ заполнения капиллярных кювет градиентными гелями путем подачи раствора геля с возрастающей плотностью1 в нижнюю часть приемной камеры, сообщающейся с вертикально установленными в ней кюветами. При этом используется устройство содержащее приемную камеру с, расположмным в ней держателем кювет, образующим .:внутреннюю полость приемной камеры, исмеситель, соединенный с нижней частью5приемной камеры (21,Однако способ и используемое устройствоотличаются недостаточно хорошея воспроизводимостью длины геля и формы градиента в,нем, особенно при приготовлении гелей скрутым градиентом плотности. Недостаткивызываются неуравновешенностью гндростати. ческого давления раствора геля в полостиприемной камеры и капиллярных кюветах,. вследствие которого после отключения смеси.теля происходит медленный переток раствора геля нз полости приемной камеры в. капнллярные кюветы. Так как время полиме: ризации раствора геля соизмеримо с временем выравнивания уровней раствора в ука20 занных сосудах, то наложение двух зтнхпроцессов приводит к указанным недостаткам. Воспройзводимость заполнения кюветухудшается также от того что для заполне.ния кювет на ту или другую длину каждый,3 966 рва приходится перестраивать режим работысмесителя и регулировать объем закачиваемого в приемную камеру раствора,Цельизобретения - повышениеиоспро. изводимости параметров геля.Цель достигается тем, что согласно спосо бу заполнения капиллярных кювет грцциентиыми гелями путем подачи раствора геля с возрастающей плотностью в нижнюю часть приемной камеры, сообщающейся с вертикюьно установленными в ней кюветами, подачу раствора геля проводят при уравнове. шенном гидростатическом давлении раствора геля в капиллярных кюветах и приемной камере, при этом измеряют величину устано- вившегося давления в конце подачи раствора геля и поддерживают ее постоянной до окончания его полимеризации.Для реализации способа используют устроиство для заполнения капиллярных кювет градиентными гелями, содержащее приемную камеру с расположенными в ней держателем кювет, образующим внутреннюю полостьприемной камеры, и смеситель, соединенный с нижней частью приемной камеры, в которое дополнительно введен элемент, герметизирующий в верхйей части приемную камеру,.и капиллярные кюветы, регулируемая пневмоемкость и редуктор давления с мана. метром, соединенные с внутренней полостью приемной камеры в ее верхней части при этом объем регулируемой пневмоемкости рассчитывают по формуле- объем регулируемой пневмоемкости; - объем раствора геля, закачиваемогов приемную камеру;- объем воздуха в приемной камересоединительных трубках и манометре;- длина капиллярной кюветы;- длина геля. С помощью герметизирующего элемента уравновешивается гидростатическое давление раствора геля в приемной камере и капил. лярных кюветах и исключается его переток между ними. Регулируемая пйевмоемкость позволяет заполнять капиллярные кюветы иа различную длину без изменения каждый раз объема геля, поступающего из смесителя. Манометр и редуктор давления позволяют поддерживать установившееся в концеподачи раствора геля давление постоянным до окончания полимеризацин раствора геля, предотвращая искажение границы геля в капиллярной кювете и уменьшение его 577 4длины вследствие усадки геля в приемнойкамере.На чертеже схематично показано устройство для заполнения капиллярных кюветградиентными гелями.Устройство состоит из приемной камеры 1,с крышкой 2 и прокладкой 3, которыевместе составляют герметизирующий элемент,капиллярных кювет 4, держателя кювет 5,1 О регулируемой пневмоемкости 6, пневмати.чески связанной с внутренней полостью при.емной камеры в ее верхней части, кранов7, 8, смесителя 9, манометра 10 и редуктора давления 11,1 Б Способ заполнения кювет градиентнымигелями осуществляют с помощью устройстваследующим образом.В приемную камеру 1, сняв крышку 2 ипрокладку 3, устанавливают капиллярные20 кюветы 4, фиксируя их в вертикальном по.ложении держателем кювет 5, после чегокамера и кюветы герметизируются в верх.ней части с помощью крышки 2 и прокладки 3. В соответствии с требуемой длиной25 геля в кюветах 4 устанавливается объем регулируемой пневмоемкости 6. Закрываетсякран 7, кран .8 оставляется открытым, После этого включается подача раствора геляот смесителя 9.зй После окончания подачи раствора кран 8закрывается, открывается кран 7 и с помощью редуктора давления 11 по манометру10 устанавливается давление, соответствующее давлению в приемной камере 1 и связанной с ней регулируемой пневмоемкости 6 в35момент окончания подачи раствора геля,после чего открывается кран 8, приемнаякамера 1 и регулируемая пневмоемкость6 оказывается связанными с редукторомдавления 11, с помощью которого давление40в системе поддерживается неизменным доокончания полимеризации геля.Применение данного способа и устройствапозволит повысить воспроизводимость лабораторных экспериментов, что значительно4 сократит время их проведения вследствиеуменьшения количества контрольных опытов,Возможность получения коротких гелейс крутым градиентом, которая обеспечивается по данному:способу, позволит существо венно уменыщпь количество исходного материала для электрофоретического анализа.Формула изобретения1, Способ заполнения капиллярных кюветградиентными гелями .путем: подачи раствофф ра геля с возрастающей плотностью в нижнюю часть приемной камеры, сообщающей.ся с вертикалью установленными в нейкюветами, о т л и ч а ю щ и й с я996577 6приемной камеры в ее верхней части, приэтом обьем регулируемой пневмоемкостирассчитывают по формуле 1Ч=Ч - -Чаказ 7834/б аж 887 Йодпйсно ктная, 4 5тем, что, с целью достижения воспроизводи.мости параметров геля, подачу раствора ге.ля проводят при уравновешенном гидростати ческом давлении раствора геля в капиллярных кюветах и приемной камере, при этом изме.ряют величину установившегося давления в конце подачи раствора геля и поддержива. ют ее постоянной до.окончания его поли.меризации2. Устройство для заполнения капиллярных кювет градиентными гелями, содержащее при.емную камеру, с расположенными в ней дер.жателем кювет, образующим внутреннюю по. :,лость приемной камеры, и смеситель, соеди.пенный с нижней частью приемной камеры, о т л и ч аю щ е е с я тем, что устрой.ство дополнительно содержит элемент, герме тизирующнй в верхней части приемную каме.ру, и капиллярные кюветы, регулируемую . пневмоемкость и редуктор, давления с манометром, соединенные с внутренней полостьюВ Филиал ППП "Патент", г. У где Ч - обьем регулируемой пневмоемкости;Ч - объем раствора геля, закачиваемгов приемную камеру;10 Ч - обьем воздуха в приемной камересоединительных трубках и манометре,1. - длина капиллярной кюветы;1 - длина геля.Источники информацииМ принятые во внимание при экспертизе1. Ультрамикроанализ нуклеиновых кислот,Под ред, Кнорре Д. Г; М."Наукаф, 1973,с. 80,2. Осборы Н. Н, Микрохимический анализуп нервной ткани. М., "Медицина", 1978, с,209,213 (прототип).