Способ оценки активности аллергодерматозов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоеетскикСоциалистическихРеспублик ри 952217(22) Заявлено 23.07.80 (21) 2959818/28-13с присоединением заявки Нов(23) Приоритет Р 1 М К з А 61 В 10/00 6 01 И 33/48 Государственный комитет ССС Р по делам изобретений и открытийДата опубликования описания 230882(72) Авторыизобретения Ю.С.Бутов, С.М.Зейни и А.Р.Кушелев 2-й Московский ордена Ленина государствнный медицинский институт им. Н.И.Пирогова(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГОДЕРМАТОЗОВ Изобретение относится к медицине и может быть использованопри оценке активности аллергодерматозов,Известен способ оценки активности аллергодерматозов путем количественного определения аминокислот вплазме крови 1.Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности.Целью изобретения является повышение точности способа.Указанная цель достигается тем,что при осуществлении способа оценки активности аллергодерматозов путем количественного определения ами-нокислот в плазме крови определяютконцентрацию лизина в плазме и суммарную концентрацию.асцарагиновойкислоты и глютатиона в эритроцитахи по изменению величины отношениясуммарной концентрации аспарагиновой кислоты и глютатиона в эритроцитах к концентрации лизина в плазме оценивают активность аллергодерматозов.П р и м е р . Больная М., 17 летОсновной диагноз: диффузный нейродермит, Сопутствующих. - нет. Кожныйпроцесс распространенный. Аналитическое определение аминокислот осуществляют по двухколоночному методу Штейна-Мура на принципах ионообменной хроматографии с последующим окрашиванием раздельных компонентов в процессе нингидриновой реакции с количественной фотометрией окрашенных продуктов.Объем необходимой для анализавенозной крови 10 мл. Забор из вены цитратной крови проводят по общепринятой методике. Разделение на плазму и эритроциты осуществляют, например, центрифугированием при 2 тыс.оборотов в минуту. После этого плазму отделяют от эритроцитов и проводят обработку их, в отдельности сульфасалициловой кислотой: плазму обрабатывают 50-ным, а эритроциты - 4-ным раствором Этой кисло- ь ты. Тщательно перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость отсасывают и переносят в раздельные чистые пробирки, Затем дважды последовательно замораживают, оттаивают и центрифугируют. Элюат отсасывают и вводят в аминоанализатор.Основные аминокислоты разделяютна колонке 150 мм к 9 мм, содержа-, ЗО щей катионообменную смолу "2611",.Но 40 где СО ст КХНОЧ элюирующим натрийцитратным буферным растнором с рН,25 и нормальностью 0,35. Кислые и нейтральные аминокислоты разделяют на колонке 500 ммф 9 мм, содержащей катионообменную смолу "2612", с помощью последовательного элюирования натрийцитратными буферными растворами 1 и И (1 - буФерный раствор рН 3,25, 8 этилового спирта, нормальность 0,2; П - бубуферный раствор рН 4,25, нормаль ность Ор 2).Проводят количественное определение разделившихся аминокислот на хроматограммах, полученных при непрерывной фотометрической регистрации 15оптической плотности окрашенныхпродуктов нингидриновой реакции аминокислот при длине волны света 440 и 570 нм на точечном самописце, в сравнении с хроматограммами стандартных смесей аминокислот. Допустимая ошибка при работе на аминоанализаторе составляет 3.Полученную хроматограмму расшифровывают на основании данных, полученных при анализе стандартной смеси аминокислот и введенного внутреннего стандарта норлейцина (аминокислота, не встречающаяся в живот. ных тканях) . Идентификацию аминокислот, полученных при проведении анализа, осуществляют по расположению пика соответствующей аминокислоты от начала хроматограммы в соответствии с анализом стандартной смеси аминокислот. Количественный обсчет содержания аминокислот в данном образце проводят по формулеХ стИХ Н 1.0,25С = К -- фс 5 х,чМОЧ к онцентр ация ами ноки слоты, выраженная в микромолях на 45 мл плазмы или эритроцитов; коэффициент, показывающий отношение площади нордейцина (Бн,ч) к площадилюбой аминокислоты, полученные при анализе стандартной смеси аминокислот (ст ).площадь норлейцина, добавленного в качестве внутреннего стандарта к иссле.дуемой пробе;разведение образца, полученное в процессе подготовки пробы для анализа.Как правило, для плазмы Ь 0 М = 1,1; для эритроцитов - 4;количество образца, введенного в прибор для анализа; Ь 5 0,25 - количество норлейцина вмикромолях, введенное в анализируемый образец Б - площадь любой аминокислоты, полученной по результатам анализа исследуемой пробы, подсчитывается по формуле Но- расстояние от нулевой линии бумаги до верхушки пика на хроматограмме;Н - расстояние от нулевой лиВнии бумаги до основания пика 1И - расстояние, равное половине ширины пика.Распределение содержания аминокислот в пике в условиях данной методики соответствует Гаусову распре. делению, следовательно, оценку площади пика можно проводить по вписанному в пик треугольнику, так называемый НИ-метод. Для того чтобы найти И провор,-т линию, параллельную нулевой линии бумаги, через точку, лежащую на середине высоты пика, Это расстояние равно (1/2 Н+НВ) . После проведения линии подсчитйвают количество промежутков, заключенных между точками, располагающимися над линией. Так как точки на хроматограмме ставят через равные промежутки времени, то подсчитанное количество точек может служить оценкой ширины пика в условных единицах. Для всех аминокислот (кроме пролина) подсчитывают количество промежутков по красной линии (для пролина - по синей).Кровь была исследована трижды на 2,7,20 сут. На вторые сутки при первом исследовании аминокислот крови (до начала лечения) отношение аспарагиновой кислоты с глютатионом в эритроцитах к лизину в плазме О, 70,0- что выражалось в. коэффициен 9те, равном 3,608. В процессе лечения (больная получала кортикорропин по 20 ед., в течение 15 дней, седативные и антигистаминные препараты) кожный процесс улучшился, зуд и эритема разрешились, Наблюдалась инфильтрация кожи в виде остаточных проявлений в области локтевых сгибов и подколенных ямок, При повторном исследовании аминокислот крови отношение содержа" ния аспарагиновой кислоты с глютатином в эритроцитах к лизину плазмы1,338составило .д-, коэффициент, соответственно 7,392,952217 Группы Количествобольных 5 АктивноетечениеНеактивноетеченИе 4,227+1,995 8,139+1,117 10 10 Количествобольных Группы КонтрольнаягруппаНейродермит 10 12,041+1,133 Активноетечение 16 3,704+1,203 Неактивноетечениеэкзема 12 10,595+2,273 Составитель Р.КатосоваРедактор Н.Гунько Техред М.Тепер Корректор О.Билак Заказ 6001/6 Тираж 714 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5.Филиал ППП "Патентф, г.ужгород, ул.Проектная,4 Через 9 дней наступило клиническое выздоровление. Аминокислотный1, 295 коэффициент составил в -= 6,573. Больная выписалась из отделения. Стойкая ремиссия наблюдалась в течение 7 мес. Показатели аминокислот- ного коэффициента оставались высокимиАнализполученных результатов позволил по величине аминокислотного коэффициента диагностировать активность патологического процесса.Показатели аминокислотного коэффициента ( Х 6) и активность аллергодерматозов представлены в таблице..Предложенный способ позволяет свысокой точностью диагностироватьактивность аллергодерматозов и более эффективно оценивать качествотерапии.формула изобретения15: Способ оценки активности аллергодерматозов путем количественногоопределения аминокислот в плазме крови, о т л и ч а ю ш и й с я тем,что, с целью повышения точности спо 20 соба, определяют концентрацию лизинав плазме и суммарную концентрациюаспарагиновой кислоты и глютатионав эритроцитах и по изменению величиныотношения суммарной концентрации ас 25 парагиновой кислоты и глютатиона вэритроцитах к концентрации лизинав плазме оценивают активность аллергодерматозов.Источники информации,ЗО принятые во внимание при экспертизе1. Кряжева С.С., Марголина Н.И.,Дукарский Ф.Т. Обмен аминокислоту больных ихтиозом и нейтродермитомВестник дерматологии и венерологииф,1977, Р 7, с.28-32,