Способ хранения биологических проб для определения сульфгидрильных групп

Союз СоветсиикСоциалистическиереспублик Оп ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и 905788(51)М. Кл. О 01 М 33/48 Ьеударетеона кенятет СССР ео делан взебрвтеие и открыти(54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЗЬФГИДРИЗЬНЫХ ГРУПП Изобретение относится к биологии .и медицине и может быть использовано при диагностических исследовани" ях.Известен способ хранения биоло - гических проб для определения сульфгидрнльных групп путем химической обработки пробы 113 .Однако известный способ не позволяет длительно хранить биологические пробы, так как происходит быстрое окисление Н-групп в течение 4 ч.Целью изобретения является увеличение сроков хранения.Эта цель достигается тем, что способ хранения биологических проб для определения сульфгидрильных групп осуществляют путем химической обработки пробы, обрабатывают 5 АМ раствором хлористой ртути в соотношении 1:2 и затем добавляют сульфосалицнловую или трихлоруксусную кислоту до рН 2,0-2,5. 2Способ осуществляют следующимобразом,Свежеотобранные пробы обрабатывают 5 10 И раствором Нд С 10 в двойном количестве по отношению к взяф тому объему пробы и подкисляютф5 Е-ным раствором сульфосалициловойили трихлоруксусной кислоты дорН 2,0-2,5 Нд С 1 вступает в реакцию с 5 Н-группами, образуя ста Обильное меркаптосоединение, дающее возможность восстанавливатьпервоначальное значение количест фва 5 Н"групп, а подкисление преду" 1преждает образование в пробе иныхсвязей ртути с другими функциональными группами.Во взятой после хранения пробеизбыток Нд С 1, не вошедший в соединение с 5 Н-группами, оттитровывают-310 М раствором глутатиона и поразности между внесенными количествами Нд С 1 л при взятии пробы иоттитрованным в конце определенит905788 количеством определяют истинное содержание общерастворимых ЬН-групп.П р н м е р . К 0,3-0,5 мл гемопиэата крови человека, полученного путем разведения цельной крови в 40 раз, добавляют 0,6- мл 5 О М раствора Нд С 1, подкисляют 57-ным раствором сульфосалици" ловой или трихлоруксусной кислот до рН 2,0-2,5 и оставляют на хранение в плотнозакрытом флаконе при 4 5 ОС.Во взятой после хранения пробе оттитровывают избыток не вошедших в реакцию ионов ртути 1О М раствором глутатиона. Конечную точку титрования находят графическим путем, По разности мещцу внесенным количеством НдС 1 у при взятии пробы и оттитрованиым в конце определения находят количество общерастворимых БН-групп в расчете на 100 мл цельной крови по Формуле где О, - содержание общерастворимых5 Нтгрунп на 100 мл цельнойкровиК - коэффициент поправки, харак" зетериэующий взаимодействиеНдС 1) с ЬН"групами 1Ч - объем 5-10 М раствора НдСГТдобавляемого к гемолизату,)Ч - объем непрореагировавшвгоНд С 1), определяемый графическим путем 1Чг - объем гемолизата, взятогодля анализа.П р и м е р 2. К О, 2-0, 3 мл зкст- оракта печени свинки, полученного цен"трифугированием гомогената, приготов"ленного при 4 ОС на 0,154 М раствореКС 1 с 1 М,ц, ЭДТА в соотношении 119(эквивалентнык 10-15 мг ткани соответственно), добавляют 0,4-0,6 мл5: О"фМ раствора НдС 1, добавлением 5 Ж-ного раствора сульфосалициловой и трихлоруксусной кислоты,устанавливают в пробе рН 2,0"2,5и оставляют на хранение в плотноукупоренном Флаконе при 4-5 фС,Во взятой после хранения пробе оттитровывают избыток ионов ртути, не вошедших в реакцию, 1 10 М раствором глутатиона. Конечную точку титрования находят графическим путем, откладывая количество добавленного 4глутатнока на оси абсцисс, а на осиордннат - силу тока по гальванометру, По разности внесенного количества НдС 1 при взятии пробы и оттитрованного в конце определенияопределяют количество общерастворимых сульфгндрильных групп в пересчете на 100 г ткани по формуле4 К,-,)9=%ггде 0 - содержание общерастворимых5 Н-групп в расчете на 00 гткани,К - коэффициент поправки, характеризующий взаимодействиеНд С 1)1 с БН"группами гомогената печени;аствора НдСдобавленного к гомогенату)ЧТ - объем непрореагировавшего5 10 фМ раствора НдС 1;д - количество ткани печейи гТ)взятого для анализа.П р и м е р 3. К 0,2-0,3 мл экстракта селезенки крысы, полученногоцентрифугированием гомогената, приготовленного при 4 бС на 0,154 М раствора КС 1 с 1 М,О. ЭДТА, в соотношении1;19 (эквивалентных 0-1 мг ткани),добавляют 0,4-0,6 мл 510 4 М раствора НдС 1 и 57-ным,раствором сульфосалициловой или трихлоруксусной кислоты устанавливают в пробе рН 2,02,5. Пробу оставляют на хранение при4 5 ос,Через месяц после хранения во взятой пробе избыток ионов ртути, невошедших в реакцию, оттитровывают1 1 О М раствором глутатиона. Определение содержания общерастворимыхЬН-групп проводят по Формуле, как впримере 2.Использование предлагаемого способа хранения биологических проб позволяет заготавливать и сохранятьвзятые для анализа пробы в течениепродолжительного времени (до 30 дней).с надежным сохранением имеющегосяуровня ВН-групп,Способ прост в осуществлении иможет быть использован в клинических и экспедиционных условиях, исключающих необходимость немедленного использования проб.Формула изобретенияСпособ хранения биологическихпроб для определения сульфгидрильСоставитель С.МалютинаТехред М. Надь Корректор Г.Назарова Редактор Л.Пписак Заказ 357 63 Тираж 882 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5 905788 бнык групп путем химической обработки сульфосалициловую илн трихлоруксуспробы, о т л и ч а ю щ и й с я ную кислоту до рН 2,0-2,5.тем, что, с целью увеличения сро- Источники информации, ков хранения, пробу обрабатывают принятые во внимание при экспертизе 5;1(4 М раствором хлористой ртути в % . Апа 1 уй В 1 осЬещ, ч. 25, 1968, соотношении 1:2 и затем добавляют р. 192.