Тушитель белковой флуоресценции

Соеэ СоввтсиикСоциалистическииРеспублик ОП ИСАНИ ЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ в 894496(22)Заявлеио 050580 (2)2923582/18-25с присоеиииеиием заявки М(23) Приоритет(5)М. Кд. О 01 й 21/74 1 ЬвудврвтвеаМ квяктвт ссер ав Авлви извбрвтвнн 1(5 я к биофизике,ения белковойбыть примененония Флуоресцен ющие тушит Сэ+, 3 белкоэ.+ них обладаютать белки10 О ) - высокойзонах возбужов. 3 спосо;с белками, РОвностью тушения.1к искажению реи требует внеициентов.олучение неисбелковой Флуоцель достигается е тушителя белко меняют молибдат емуйфлуотрия. Изобретение относитса именно к методам изуч Флуоресценции, и может для избирательного туше ции ионами.Известны следу воф флуоресценции ГЕ +, РО. и др, (Однако некоторые иэ способностью коагулиро (СзР+), другив (ГР+, оптической плотностью дания белковых хромофо бен вступать в реакцию обладает малой эффекти Все это может привести зультатов исследования сения поправочных коэффЦель иэобретениякаженных характеристик ресценции.Указаннаячто в качествресценции при ванский государственный медицинский институт ЕЛЬ БЕЛКОВОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦ 2В настоящее время молибдат натрия применяют в производстве лаков и красок, а также в химии для определенияХ- рв кулой среде анионов РС , АэО+ 510 в виде гетерополисоединений,Новое назначение вещества основа" но на его способности тушить флуоресценцию белковых хромофоров.П р и м е р. Все растворы готовят на 10 мМ трис-НС 1 буфере (рН,8). Раствор молибдата натрия (1 мл в концентрации 1,5 мМ) непосредственно перед измерением смешивают с 3 мл раствора САЧ (сывороточный альбумин человека в концентрации 100 мкг/мл) или раствором триптофана (20 мкг/мл). Полученной смесью заполняют измерительную кювету с рабочей ранью в 1 см, которую помещают в рабочий отсек спек трофлуориметра. Монохроматор длины волны возбуждения устанавливают на ве личину 280 нм (в случае САЧ и триптоФана) или на 296 нм (где поглощает только триптофан). Регистрацию флуо894496 формула изобретения ресценции проводят в интервале длин волн от 300 до 350 нм, максимум флуоресценции приходился на 332 и 344 нм при реГистрации спектров флуоресценции САЧ и триптофана, При анализе экспери- з ментальных данных эффект внутреннего фильтра рассчитывается в тех случаях, когда оптическая плотность превышает 0,15 ед. Оптическая плотность определяется на спектрофотометре Ч 50-2 Р. Ни в не приведены параметры тушения флуоресценции САЧ и триптофана молибдатом и другими тушителями ( нитрат натрия и йодид калия) в равных концентрациях (1,5 М), 15Данные о концентрационной зависимости тушения флуоресценции триптофана в растворе ионами МоО представлены на фиг. 1 в Штерн"фольмеровских координатах: Ц ф - -1 с - концентра"Эо 36 3ция тушителя (Зю- интенсивность флуоресценции без тушителя 3 - интенсивность флуоресценции с тушителем). Как следует из фиг. 1, тушение Флуорес" И ценции триптофана полностью соответ" ствует закону Втерна"Фольмера во всем использованном интервала. концентраций (от 0,5 мИ до 15 мМ), Полученные величины констант тушения (К) показыва- зе ют,что молибдат обладает более высокой эффективностью тушения Флуоресценции триптофана по сравнению с йодидом (для йодида к6,25 М ", для молибдата К 11,2 И. Это наглядно видно нафиг, 2, на которой представлены кривые тушения флуоресценции триптофана молибдатом,и йодидом (1-спектр флуоресценции триптофана без тушителя, 2 - спектр тушения йодидом,:3 - спектр 4 в тушения молибдатом). 4На фиг. 3 представлен спектр флуоресценции САЧ в отсутствии (4) и вприсутствии 1,5 мМ молибдата натрия(5).Молибдат в отличие от йодида неспособен вступать в реакцию с белками,Об этом свидетельствует тот факт, чтомолибдат не приводит к изменению формы спектров флуоресценции триптофанаи САЧ и к смещению их максимумов. Молибдат в зонах возбуждения флуорвсценции белковых хромофоров не обладаеттакой высокой оптической плотностью,как нитрат и Ге+,так, если поглощение КО при алиневолны 296 нм условно принять за 1004,то оптическая плотность МоО состав%ляет 393. Это позволяет в случае применения молибдата не рассчитывать поправку на эффект внутреннего фильтра,так как оптическая плотность растворовтриптофана и белка не превышает0,15 ед. При добавлении МОз требуетсявнесение поправки на эффект внутреннего Фильтра.Преимущество предлагаемого тушителязаключается в том, что он обладает вы-сокой эффективностью, не вступает вреакцию с белками, не требует внесенияпоправочных коэффициентов при длинеолны 296 нм. Применение молибдата натрия в качестве тушителя белковой флуоресцен" ции Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Бурштейн Э.А. "Биофизика", 1968,13,. 3, 433894496 фив. У Составитель В. КармановТехред А Бабинец орректор А. Дзятк едактор Н. Безродная Подписно ее ав етеФилиал ППП "Патент", г. Ужгород ул. Проектная, 4 11472/68 ВНИИПИ Государств по делам изобр 113035, Москва, Ж, Тираж 910нного комитета СССРтений и открытийаушская наб., д :М 5 М ФФ ЖУфигЗ