Способ определения нуредала в биологических объектах

(и)890249 Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51)М, Кл,С 01 М 33/48 Государственный комитет СССР оо делам изобретений н открытий((1 мчР.В.Кузьминых Иркутский государственный медицинск йинститут(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НУРЕДАЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЬЕКТАХ Изобретение относится к медицине, в частности к токсикохимическому анализу, и касается техники определения нуредала в биологических объектах.Наиболее близким по своей сущности к изобретению является способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе органических растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом 11. Недостатком известного способа является низкая селективность, так как ванадат аммония используют для идентификации многих препаратов производных изоникотиновой кислоты, и невысокая чувствительность определения нуредала (20 мкг), а также длительное время проведения анализа, вследствие двукратного хроматографирования в системе растворителей и предвари,тельного высушиванйя пластинки в течение 30 мин.Цель изобретения - повышение точности и ускорение .способа.Поставленная цель достигается тем, ф что согласно способу определения нуредала в биологических объектах путемэкстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе орга Онических растворителей и выявлениемзоны нуредала проявляющим реагентом,экстракцию проводят хлороформом,полученный экстракт хроматографируют всистеме растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятых в соотношении20,0: 10,0:0,2- 1,0, а в качестве проявляющего реагента используют 2 Мраствор молибдата натрия.. Способ осуществляют следующим образом.Биологический объект, содержащийнуредал, растирают, переносят в колбу и экстрагируют хлороформом в грех890 15 Формула изобретения кратном повторении. Затем экстракт фильтруют в мерную колбу емкостью 50 мл и разбавляют хлороформом до метки, На стартовую линию пластинки "силуфол" размером 5 М 1 наносят микрокапилляром 0,01 мл раствора в виде пятен диаметром 1 мм для проведения хроматографии. Хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол: ; аммиак, взятых в соотношении 20,0: : 10,0:0,2- 1,0. Пробег фронта растворителя 10 см. Далее пластинку подсушивают, и в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия.Проведение экстракции нуредала из биологического объекта хлороформом в трехкратном повторении позволяет полнее экстрагировать нуредал. Использование смеси растворителей хлороформ:этанол:аммиак в предлагаемом соотношении повышает чувствительность идентификации в 4 раза.Изменение соотношения первых двух компонентов смеси нежелательно,так как приводит к наложению зон нуредала и экстрактивных веществ. Количество аммиака в смеси можно варьировать в зависимости от природы исследуемого объекта, при этом содержание аммиака в смеси 0,2 ч позволяет отделить нуредал от экстрактивных веществ, выделенных из печени и крови,а при содержании аммиака 1,0 ч. отделить нуредал от экстрактивных веществ мочи и таблеточной массы. Использование 2 М раствора молибдата натрия в качестве проявляющего реагента позволяет получить красно- бурое окрашивание только с нуредалом при его низких концентрациях. 2494/зона исследуемого вещества получается более четкой и располагается вцентре пластинки (Ы = 0,53-0,027).Затем хроматограмму помещают в систему растворителей хлороформ:этанол::1,0Пробег фронта растворителя1 О см. Пластинку подсушивают и опрыскивают 2 М раствором молибдата на О трия. Нуредал проявляется в видекрасно-бурых пятен, М = 0,53-0,027.Чувствительность проявляющего реагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг. П р и м е р 2, Из затравленныхбиологических объектов (кровь, моча,печень) нуредал извлекают при рН 5-6хлороформом. Затем на стартовую ли О нию пластинки силуфол" размером 5 Х 11наносят микрокапилляром 0,01 мл полученного экстракта в виде отдельныхпятен диаметром 1 мм. Хроматограммупомещают в систему растворителей хло роформ:этанол:аммиак, взятых в соотношении 20:1 О:0,2. Пробег фронта растворителя 10 см. Пластинку подсушива.ют, опрыскивают 2 М раствором молибдата натрия. Нуредал проявляется ЗО в виде красно-бурых пятен, И: = 0,530,55. Чувствительность проявляющегореагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг.Предлагаемый способ позволяет с 55 высокой точностью. определять нуредалв биологических объектах и сократитьвремя проведения анализа по сравнению с известным в 2 раза. Способпрост, общедоступен и не требует спе циального оборудования для его реализации.П р и м е р 1. Одну таблетку, содержащую 25 мг нуредала, растирают, количественно переносят в колбу и экстрагируют хлороформом 3 раза по 15 мл при рН 5-6. Экстракт фильтруют в мерную колбу емкостью 50 мл и разбавляют хлороформом до метки. На стартовую линию пластинки "силуфол" .размером 5 Х 11 наносят микрокапилляром 0,01 мл полученного раствора в виде пятен диаметром 1 мм, Проведение хроматографии на пластинке "силуфол" позволяет повысить чувствительность определения нуредала, так как 45 Способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракцииорганическим растворителем с последующей хроматографией экстракта втонкомслое в системе органических 5 О растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью повышения точности и ускорения способа, экстракцию проводят 55 хлороформом, полученный экстракт хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятыхв соотношении 20,0:10,0:0,2-1,0, ав качестве проявляющего реагентаиспользуют 2 М раствор молибдатанатрияИсточники информации,принятые во внимание при экспертизеЗаказ 10960/71 . Тираж 910ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб , д,4/5Подписное Филиал ППП "Патент", гУжгород, ул.Проектная,4 Составитель А. БражниковаРедактор О.Персиянцева Техред М, Надь Корректор Г.Огар