Способ отбора штаммов микроорганизмов, устойчивых k содержаниюмикроэлементов b питательнойсреде

и 1 8 Ю 81 2 ОПИСАН И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(43) Опубликовано 07,03.81, Бюллетень(45) Дата опубликования описания 07.03,81(71) Заявитель Иркутский государственный университет имени(54) СПОСОБ ОТБОРА ШТАММОВ МИКРООРГАНИЗМОВ,УСТОЙЧИВЫХ К СОДЕРЖАНИЮ МИКРОЗЛЕМЕНТОВВ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ Государствеинык комитет (23) Приорите Изобретение относится к микробиологии.Известен способ подбора штаммов микроорганизмов закваски для производства твердых сыров, в котором подбор штаммов микроорганизмов проводят по кислото- и ароматообразованию, протеолизу, синерезису и вязкости сгустка, а также по термои солеустойчивости, а также подбирают штаммы, у которых количественное соотношение накопленных аминокислот соответствует соотношению их в сыре данного вида Однако известно, что большинство штаммов молочнокислых бактерий сохраняют свои свойства на молоке с одинаковым или близким химическим составом. Наиболее существенным колебаниям химического состава молока подвержен микроэлементный состав, Известны случаи, когда количество отдельных элементов молока даже в одной и той же местности, но в разные сезоны года колеблются в десятки раз. Поэтому при изменении химического состава молока штаммы молочнокислых бактерий, входящие в состав закваски, снижают свои первоначальные свойства и продукция, полученная с участием этих штаммов, пониженного качества.Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому резуль- ЗО тату является способ отбора штаммов микроорганизмов, устойчивых к содержанию микроэлементов в питательной среде, включающий проверку исследуемых штаммов к тестам, характеризующим технологический процесс, использующий культуру. Так, например, определяют пороговую чувствительность к бору у штаммов Вас 111 цз тпеиап 1 ег 1 цтп, который дает высокий и постоянный прирост биомассы, и также определяют пороговую чувствительность к кобальту, у штаммов Астпотпусез 1 еог 1 з и затем отобранные штаммы рекомендуют для совместного культивирования в качестве продуцентов витамина В 12 2.Однако известные способы, не позволяют подбирать штаммы, устойчивые к микро- элементным колебаниям молока, что не дает возможности стандартно вести технологический процесс.Цель изобретения - отбор наиболее жизнеспособных микроорганизмов, устойчивых к различным колебаниям микроэлементного состава сырья.Поставленная цель достигается тем, что в способе отбора штаммов микроорганизмов, устойчивых к содержанию микроэлементов в питательной среде, включающем проверку исследуемых штаммов к тестам, характеризующим технологический процесс,(Количество клеток 10) Йг. йасеИас 1 э Згг, 1 аспэ Концентрация микроэлементов,мг/л51255413310 Г42728 - 323 367,ЗС 230 5 С - 1 ЗМ - 1 88 77 0,5 0,6 0,7 0,8 0,8 0,8 0,9 0,7 0,5 0,4 1,6 1,6 0,8 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,5 0,3 0,1 0,7 0,7 0,8 0,8 0,9 1,0 1,0 1,0 0,7 0,1 1,0 1,1 1,2 1,2 2,0 2,0 2,2 2,5 ;3,0 3,0 3,0 З,О 2,5 1,0 0,8 1,1 1,4 1,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 5,0 2,0 0,8 0,3 0,9 3,0 4,0 0 1 2 3 4 5 10 20 50 100 1,0 1,5 2,0 1,2 1,2 1,2 1,1 0,7 1,6 1,0 0,5 0,3 0,2 1,4 1,4 1,0 0,6 0,4 2,0 2,0 2,0 1,0 1,0 4,0 1,5 0,7 0,6 0,5 использующий культуру, в исследуемых штаммах дополнительно определяют пороговую чувствительность к микроэлементам по диапазону между нижним и верхними пределами потребности в микроэлементах 5 для нормального роста микроорганизмов путем внесения в питательную среду водного раствора комплекса микроэлементов в пересчете на чистый металл, мкг/мл: Ге 350, Лп 250, Мп и Сц по 100, Со, 1 и Вг по 10 50, Яп, 1.1 и Т 1 по 10, концентрацию его в питательной среде устанавливают от 1 до 100 мг/л, после чего штаммы с максимальным диапазоном между нижним и верхним пределами потребности в микроэлементах 15 повторно исследуют на исходные тесты.П р и м е р. Готовят питательную среду: 5 а/а кислотного гидролизата казеина глубокого расщепления, 0,5/в витамина В - комплекса, 1/е глюкозы, рН 6,8 - 7,0 стерили зуют при 0,15 МПа, 30 мин. Затем готовят водный раствор микроэлементов из х. ч. солей железа, цинка, марганца, меди, кобальта, титана и лития - сернокислых, йода и брома - солей калия, олова - солянокис лых в следующих концентрациях в пересчете на чистый металл (мкг/мл): 1.е 350, Хп 250, Мп и Сц по 100, Со, 1, и Вг по 50, Зп, 1.1 и Т 1 по 10. Этот раствор содержит комплекс микроэлементов в количестве 1 мг/мл. ЗО Этот комплекс микроэлементов перед стерилизацией добавляют в питательную среду в следующих количествах (мг/л) 1, 2, 3, 4, 5, 10,20, 50 и 100.При проверке молочнокислых бактерий 35 берется суточная культура определяемого штамма, выращенная на обычном молоке, и 1/а вносится в жидкую питательную среду с концентрацией микроэлементовот 1 до 100 мг/л и культивируется в одинаковых ус ловиях (для мезофильных культур при 30 С, для термофильных при 40 С). В суточном возрасте в культурной среде с этими концентрациями микроэлементов определяется количество живых клеток чашечным методом, сущность которого заключается в высеве исследуемой культуры на плотную питательную . среду в чашке Петри с последующим подсчетом выросших колоний визуально. При этом, исходя из того, что каждая колония является результатом размножения одной клетки (плотная питательная среда - вышеописанная жидкая, к которой добавлено 3/а агара).В .жидкой питательной среде с этими концентрациями микроэлементов вырастает различное количество клеток исследуемой культуры. Оптимальное количество микроэлементов для данной культуры будет то, при котором вырастает наибольшее количество живых клеток.Нижняя пороговая чувствительность штамма к микроэлементам считается та, при которой количество живых клеток достигает высокого значения при минимальной концентрации микроэлементов. Верхняя пороговая чувствительность штамма к микроэлементам считается та, при которой количество живых клеток сохраняет высокое значение при максимальной концентрации микроэлементов.Для изучения берут культуры четырех видов молочнокислых бактерий с близкими внутривидовыми физиолого-биохимическими свойствами. Полученные данные представлены на табл. 1 и 2. В целях сокращения цифрового материала представлены данные только количества клеток культуры, не менее трехразовой повторности.Рассматривая данные для Ягер 1 ососспз 1 ас 11 з, можно рекомендовать для использования штамм 5 Си ЗМс предпочтением штамму 5 С.(Количество клеток 109) ХЬш, Ьцайагецгп Яг, сгеаог 1 з Концентрация микроэлементов,мг/л 5 1654 2222 280 3 36525 5 6,3 4 20 С2 12 18 0,8 0,5 0,3 0,8 0,6 0,7 0,8 0 1 2 3 4 5 10 20 50 100 0,6 0,6 1,4 1,0 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,3 1,3 0,8 0,3 0,1 0,6 0,7 0,9 0,7 0,4 0,8 0,8 0,6 0,3 0,1 0,5 0,5 0,4 0,2 0,1 0,9 0,9 0,8 0,6 0,3 0,7 0,7 0,5 0,3 0,1 0,6 0,4 0,1 О, 0,1 1,4 1,0 0,6 0,4 0,2 1,1 1,1 1,1 0,8 0,5 0,9 0,9 0,9 0,5 0,3 0,8 0,7 0,5 0,3 0,1 Формула изобретения Составитель И. Привалова Техред И. ПенчкоРедактор Л. Волкова Корректор Л, Орлова Заказ 502/16 Изд231 Тираж 530 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 Из представленных культур Ягер 1 ососсцз йасе 111 ас 11 з более перспективным оказался штамм 728-3, Если этот штамм чем-то не устраивает, можно рекомендовать штамм 230. Из рассмотренных культур Ягер 1 ососсцз сгегпопз перспективнее всех штамм 12, а для 1.ас 1 оЬас 1 ег 1 цгп Ьц 1 даг 1 сцгп 25,Итак, пороговая чуствительность для рассмотренных культур очевидна. Это дает возможность отдельные штаммы рекомендовать как более устойчивые к различным колебаниям химического состава молока.Предлагаемый способ позволяет подбирать штаммы микроорганизмов при составлении заквасок для производства молочной продукции, более жизнеспособные и устойчивые к различным колебаниям микроэлементного состава молока. Это дает возможность повысить качество вырабатываемой продукции.Такой способ подбора микроорганизмов возможен практически для всех видов микроорганизмов, применяемых в промышленности для биосинтеза биологически активных веществ. Способ отбора штаммов микроорганизмов, устойчивых к содержанию микроэлементов в питательной среде, включающийпроверку исследуемых штаммов к тестам,характериэующим технологический процесс,использующий культуру, о т л и ч а ю щ и й 5 ся тем, что, с целью отбора наиболее жизнеспособных микроорганизмов, устойчивыхк различным колебаниям микроэлементногосостава сырья, в исследуемых штаммах дополнительно определяют пороговую чувстви 10 тельность к микроэлементам по диапазонумежду нажним и верхним пределами потребности в микроэлементах для нормального роста микроорганизмов путем внесения в питательную среду водного раствора5 комплекса микроэлементов в пересчете начистый металл, мкг/мл: Ге 350, Хп 250, Мпи Сц по 100, Со, 1 и Вг по 50, Ьп, 11 и Тпо 10, концентрацию его в питательной среде устанавливают от 1 до 100 мг/л, послечего штаммы с максимальным диапазономмежду нижним и верхним пределами потребности в микроэлементах повторно исследуют на исходные тесты.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРМю 277535, кл. А 23 С 9/12, 1968.2, Монография Летунова С. В. и Ковальского В. В. Геохимическая экология микроЗо организмов, М., Наука, 1978 (прототип),