Среда для определения зараженности почвы

Союз Советскик СоциалистическихРеспубликОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.(22) Заявлено 211278 (21) 2699800/30-15с присоединением заявки йо(51)М. Кл.3С 12 К 1/06 Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(72) Авторы изобретения Всесоюзный научно-исследовательский институт защитырастений(71) Заявитель 54) СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ ПОЧВЫРЦЯАВ 11)М ОХУЯРОВЦМ ЯСНБ. и РПЯАВ 11)МЯО 1 АН 1 АРР,ЕТ.ХВ,Ор 10-0,15 Ор 001-0,0021,5 - 2,01 5-2,0 12-1 бмл/л средыОс тальное,вода Изобретение относится к областисельского хоз яйс тв а, в частности копределению запаса инфекции фитопатогенных грибов в почве.5Известны различные средЫ для выделения и подсчета микроскопическихгрибов в почве 1),Известна также среда для количественного подсчета Г.охузрогцвр в которую входят азотнокислый натрий,фосфорнокислый калий двуэамещенныйрхлористый калий, сернокислый магнийсернокислое железо закисное, сахароза, дрожжевой экстракт, фосфорнаякислота, стрептомицин, агар, вода,15Эта среда также как упомянутая вышеобладает существенным недос татком -зарастает соответствующими почвеннымигрибами, вследствие чего малопригодна для анализа полевой почвы 2. Цель изобретения - расширение ассортимента сред, пригодных для определения зараженности полевой почвы грибами Р.охузроппп и Г.зо 1 ап 1 р. 25 дифференцирующих эти виды и подавляющих сапрофитную почвенную микрофлору еПредлагается среда для определения зараженности почвы Рцзаг 1 цш охуврогцт н Гцзаг 1 щп зо 1 ап 1, которая содержит, вес, Ъ:Азотнокислыйнатрий О, 15-0 20Дв уз амещен ныйфос 4 орнок ислыйкалийХлорисняй калий 0,03-0,05Сернокислыймагний 0,03-0,05Сернокислое железо закнсноеГалактозаАгарПентахлорнитробензол 0 05-0,1Стрептомицин 0,03 0,05Желчь медицин- ская Из состава исключен дрожжевой экстракт, способствующий обильному росту посторонних почвенных грибов и. бактерий, исключено также подкисление средЫ Фосфорной кислотой, Для лучшей дифференциации видов Рцзаг 1 шп сахарову заменяют в среде на галактазу и концентрацию ее уменьшают с3 до 1,5-2 . В качестве веществ,угнетающих рост других грибов,используют пентахлорнитробензал, которыйполностью подавляет рост Мцсаг,В 1 гарцз, Реп 1 с 1111 цщ, присутствующих в почве в значительном количестве, а также медицинская желчь дляограничения роста колоний грибов,что облегчает их подсчет на предлагаемой среде.Технология приготовления среды.Готовят среду следующего состава;ИаБО, КНРО 4, КСХ, МдБО 4, ГеБО 4,галактсза, агар, автоклавируют 20-30минпьаи 1 атм, В охлажденную до45-47 С среду перед разливкой в чаш" 15ки Петри добавляют пентахлорнитробензол, стрептамицин и медицинскуюжелчь. Навеску почвы (в пересчете на10 г воздушна-сухой почвы) вносят вколбу с 90 мл стерильной воды, тща Отельно взбалтывают и приготовляютпоследовательные разведения даХ1:1000, Затем 1 мл почвенной суспенэии в разведении 1:1000 высеваютглубинным способом на рекомендуемуюсреду (па 20 чашек Петри на каждыйпочвенный образец) . Засеянные чашкиинкубируют 7-10 сут. при 25-27 С нарассеянном свету, что способствуетлучшей пигментации гриба. Затем подсчитывают количество колоний грибовкаждого вида и пересчитывают их на1 г воздушно-сухой почвы: КолонииРцэаг 1 цп охуврогцЫ на данной средепушисто-пленчатые, имеют характер-ную телесно-разовую окраску; Г за 1 ап 1 образуют пышный ватаабразный мицелий беловато-кремового цвета,П р и м е р 1.Определение количества инфекций Г.охузрогпп и Г.зо 1 ап 1 впочве проводят с помощью среды следующего состава, вес, :ИаЮЭ - 0,15КНРб 4 0,10КСХ 0,03ГеБО 4, 0,001 45мдЯО 4, 0 03Галактоза . 1 5Агар 1, 5Вода Ос тальное,Среду стерилиэуют 20 мин при501 атм, после охлаждения да 45 в неедобавляют пентахлорнитробенэол 0 05,стрептомицин,0,03, желчь медицйнскую 12 мп/л среды Затем в 20 чашекПетри производят глубинный посев 1 млпочвенной суспензии в разведении1:1000 и заливают средой. После 7 сутинкубации при 25 аС на среде в чашкахПетри хорошо различимы колонии Р.охуз 1 огцш и Р.за 1 ап 1, Подсчитывают количество колоний каждого вида в 20 чаш" Щках и пересчитывают на 1 г воэдушнасухой почвы, Для этого определяютсреднее количество колоний каждоговида в одной чашке и умножают наразведение (1000),П р и м е р 2.Для определения за.раженности полевой почвы видамиГ.охузрагцщ и Р,.зо 1 ап 1 используютсреду следующего состава, вес,:ь)аИО 0 17К 4 НРО 4 0 12КС 3 О., 04МдЯО 47 НО 004ГеЯО 4 0,001Галактоэа 1,7Агар 1,7Вода Остальное.После 25 мин стерилизации средыоВри 1 атм ее охлаждают до 47 С и добавляют пентахлорнитробенэол 0,07,стрептомицин 0,04 и желчь медицинскую 14 мп/л среды. Затем производят посев почвенной суспензии паописанной выше методике. После 8 сут.инкубации засеянных чашек на рассеянном свету при 27 С проврдят подб"счет колоний каждого вида. гриба ипересчитывают их количество на 1 гвоздушно-сухой почвы,П р и м е р З,Количественное определение запаса почвенной инфекцииГохузрогшп и Г,яа 1 ац 1 проводят насреде следующего состава, вес, :ИаКО 0,20КсуНРО 4 0,15КСХ 0,05МдЯО 4 7 НО О, 001Пен тахлор-нитробензол О, 1Стрептомицин О, 05Желчь медицинская 16 мл/лРеЯО 0,002Галактоза 2,0Агар 2,0вода Ос таль ное,Среду стерилиэуют при 1 атм30 мин и после охлаждения ее до 47 Свводят пентахларнитробенэол, стрептамиции и медицинскую желчь в укаэанных концентрациях, Посев проводят по описанной ранее методике; посоле 10 сут.инкубации чашек при 27 Сна рассеянном свету подсчитываютколонии Г,охузрогцв и Р.за 1 ап 1 ипересчитывают на 1 г воздушна-сухойпочвы.Анализ почвенного образца, проведенный на описанных трех вариантахпредлагаемой среды, дает идентичныерезультаты.Формула изобретенияСреда для определения зараженности почвы Гцзаг 5 лып ахузаагцв ЯсЬ 1.и Гц - заг 1 цтв за 1 ап 1 Арр.еС.Иг.,включающая пзотнокислый натрий, двузамещенный, фасфорнакислый калий, сернокислый магний, хлористый калий, сернокислое железо. закисное, стрептомицин, агар и воду, а т л и ч а ю щ а я -я тем, чта, с целью подавления са763468 0,001-0,002 Составитель М.МирзаевРедактор Т.Девятко Техред И.Асталош Корректор С.Шекмар Заказ 6234/25 Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо. делам изобретений и открытии113035,Москва, Ж, Раушская наб., д,4/5 филиал ППППатентф, г.Мкгород, ул.Проектная, 4 профитной почвенной микрофлоры и дифференциации видов Гцзаг 1 цп, она дополнительно содержит пентахлорнитробензол, медицинскую желчь и галактозу, причем компоненты содержатся в среде в следующем соотношении,вес.%:Азотнокислыйнатрий 0,15-0,20Двузамещей-,ный фосфорнокислый калий 0,10-0,15Хлористыйкалий Ор 03-0(05Сернокислыймагний 0,03-0,05Закисноесернокислоежелезо Галактоза 1,5-2,0Агар 1,5-2,0Пентахлорнитробензол 0,05-0.,1Стрептомицин 0,03-0,05желчь медицинская 12-16 мл/л средыВода Остальное,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Руководство по изучению поч-,венных микроорганизмов и их метаболитов. Под редакцией Н.А. Красильникова Изд-во МГУ, 1966, с. 11-20.2, Вих 1 оп Е, Кепйг 1 сК . А ве 1 Той15оЕ 1 зо 1 аС 1 щ РйуЫцщ зрр, апй Ризаг ив охузрогит тров Бо 11, Апп.А 1В 1 о 1 1963, у, 51, р, 221-215 (прототип),и. рр