Способ диагностирования зимостойкости генотипов яблони

ц 741828 ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик(51) М. Кл. А 01 Н 1/00 Геаударстеанвй камитет СССР йе демам изабретеиий и открытий(7 ) Заявитель Приморская краевая плодово-ягодная опытная станция(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИРОВАНИЯ ЗИМОСТОЙКОСТИ П.НОТИПОВ ЯБЛОНИИзобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции плодовых культур на зимостойкость.Известен способ диагностирования генотинов яблони, при котором уровень зимостойкости сортообразца определяется реакцией фенотипа на резкие суточные колебания температуры по характеру изменения суммарного содержания крахмала во всех тканях однолетнего прироста 1,11.По такому способу оценка зимостойкости сортообразца проводится в течение одного зимнегопериода, но требуется обязательное искусственное воздействие переменными температурами и, следовательно, наличие термоквмеры, а определение крахмала производится визуально, что не исключает субъективных ошибок, снижающих достоверность результата.Известен также способ определения зимостойкости сортов яблони по состоянию рибонуклеиновой кислоты (РНК). У зимостойких сортов отмечается более 2высокое содержание связанной с белкомРНК в зимний период 2.Однако этот способ требует повторения анализов в течение двух-трех лет и невсегда является четким тестом зимостойкости генотипа.Цель изобретения - ускорение окончательной опенки зимостойкости сортообразцов и повышение достоверности результатов.Это достигается тем, что на протяжении годичного цикла роста и развитияопределяют реакцию фенотипа на естест.венные суточные колебания температурысреды по связи между соотношением свободной и связанной форм рибонуклеиновойкислоты в коре однолетнего прироста исредней величиной суточной амплитудытемпературы воздуха, накануне и в деньанализа, а зимостойкость генотипов оцеакивают по величине коэффициента корреляции.Способ осуществляют следующим образом.741828 фя. кой безводным уксусным ангидридом,контрольные препараты обрабатывают рибокуклеаэой, Интенсивность окраски препаратов оценивают на микрофотометре5МФ, Содержание РНК выражают в единицах оптическрй плотности. Для вычисления соотношения форм РНК оптическуюо- плотность свободной формы РНК делятна оптическую плотность связанной формы10 РНК, Результаты анализа форм РНК представлены в табл. 1,Таблица 1 Амурскоеурожайное 9,2 3,06 ,1 2,20 н-Д 9,8 оровинка ных колебасле дующимамплитуда авна 17,1 6,Х.1973 температуоС до арифмети - 1,5.Знак при амплиту(+ 12,5). танавливается ичиной ы воз 3Содержание и формы (свободная и св занная) РНК определяют ежемесячно в коре однолетних приростов гистофотомет рическим методом на постоянных препаратах. Отрезки средней части однолетних приростов фиксируют смесью Карнуа Препараты окрашивают пиронином )1(, Ин тенсивность окраски оценивают на микр фотометре, например, типа Мф, Содер жание РНК выражают в единицах оптической плотности. Свободную форму РНК определяют без предварительной обработки препаратов. Связанную форму РНК определяют путем обработки препаратов15 перед покраской безводным уксусным ангидридом. Контрольные препараты обрабатывают рибонуклеазой. По результатам анализов высчитывают соотношение между формами РНК (свободная РНК; связанная РНК).Затем рассчитывают среднюю амплитуду суточного колебания температуры эа два дня (эа день, предшествующий отбору, и день отбора проб), При переходе к отрицательным температурам ипи при колебаниях от положительных к отрицательным температурам и обратно знак при суточной амплитуде устанавливают по знаку среднесуточной температуры.Далее вычисляют коэффициент корреляции между соотношением форм РНК и величиной амплитуды колебания температуры воздуха за год.Величина корреляции является тестом35 зимостойкости генотипов. У зимостойких сортов коэффициент корреляции лежит в пределах 0,00-0,50, у среднестойких в пределах 0,50-0,70, у незимостойких в пределах 0,70-1,00,4 ОП р и м е р, Из трех сортов яблонис заведомо известной, например для Приморского края, зимостойкостью (Амурское урожайное - зимостойкий, ДжонДоуни - среднезимостойкий, Боровинка -45незимостойкий) берут на анализ однолетние приросты.Отрезки средней части однолетнихприростов фиксируют смесью Карнуа и готовят постоянные препараты. Препаратыокрашивают пиронином Ж. Для определения свободной формы РНК препаратыокрашивают без предварительной обработки, Связанную форму РНК определяют путем обработки препаратов перед покрасСреднюю амплитуду суточний температуры вычисляютобразом; 15.Х,1973 суточнаколебания температуры была(от - 3,1 С до + 14,0 С),суточная амплитуда колебаниры была равна 7,9 (от + 2,8+ 10,7 С). Находят среднееческое значение 1 7 1 + 7 92 Такие же. процедуры проделывают и в другие сроки. По полученным данным рассчитывают коэффициент корреляции между соотношением форм РНК и величи ной амплитуды колебания температуры в соответствующие сроки -эа год.В табл. 2 приведены данные корреляции между соотношением форм РНК и ве л суточной амплитуды температу р духа.+89 7. У 1-,74 6, У -74 3 45 корреляцииДжон-Доуниветственно чгселекци метрами е н ой тоянию Тираж Подписное ЦНИИПИ Заказ ул. Проектная, 4 иал ПП Патент, г Коэффициент для Амурского урожайного, и Боровинки составляет соот + 0,24, + 0,53, + 0,76.Для диагностирования зимостойкости генотипов яблони по предлагаемому способу достаточно проанализировать кору однолетних приростов в течение одного годичного цикла. Данный способ исключает лабораторное промораживание, что снижает расходы по диагностике зимостойкости сорта, улавливает реакцию сорта на сравнительно небольшие колебания . температуры, что повышает точность диа ностирования. Благодаря приготовлению постоянных препаратов обеспечивается равномерное распределение объема рабо ты в течение года. Способ обладает высокой производительностью. Силами одного специалиста можно проанализировать до 20 сортообразцов.Для доведения предлагаемого способа до массового использования достаточно обеспечить соответствующие ные и лаборатории микрофот подготовить специалиста. формула и з о б рСпособ диагностирования кости генотипов яблони по с бонуклеиновой кислоты включающий ежемесячное гистофотометрическое определение содержания и форм рибонуклеиновойкислоты в коре однолетних приростов вгодичном цикле роста и развития, о т -личающийся тем,что,сцельюускорения окончательной оценки зимостойкости сортообразцов и повышения ее5 достоверности, определяют реакцию фенотипа на естественные суточные колебания температуры среды по связи междусоотношением свободной и связанной формрибонуклеиновой кислоты в коре однолетф него прироста и средней величиной суто.ной амплитуды температуры воздуха накануне и в день анализа, а зимостойкость генотипов оценивают по величинекоаффициента корреляции.5 Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССРпо заявке М 2536781/30-15,кл, А 01 Н 1/04, 18,10.77,О2. Леонченко В. Г. Изучение содержания и соотношения нуклеиновых кислотв связи с зимостойкостью. (Сборник"Методика определения зимостойкостии морозостойкости плодовых и ягодныхкультур." Мичуринск, 1972 (прототип).