Колориметрический способ определения лимонной кислоты в сыре

Союз СоветсккнСоциалистическиеРеслублнк ЬП ИСАНИЕИ ЗЬБРЕТЕ Н ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕПЬСТВУ ц 734562(23) Приоритет Опубликовано 15,05,80. Бюллетень Ле 18 до делам иэооретений и открытий(53) УДК 543.42 (088.8) Дата опубликования описания 18.05,80(54) КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ В СЫРЕИзобретение относится к сыродельной про. мышленности.Содержание лимонной кислоты в сыре явля. ется одним из показаталей степени развития ароматообразующей микрофлоры и может служить косвенной оценкой качества готового продукта. Это имеет важное значение в свете наметившейся в последнее время тенденции к переходу на инструментальные методы контро. ля в сыроделии.1 ОВ настоящее время известен способ определения лимонной кислоты, заключающийся в подготовке реактивов (трихлоруксусной кис. лоты, пиридина, уксусйого ангидрида и раствора нитрата) к анализу;15 подготовке пробы исследуемого продукта (дозировка навески сыра, измельчение и дис. пергирование в теплой дистиллированной воде, охлаждение до комнатной температуры, внесение трихлоруксусной кислоты, выдержка в течение 30 мин и фильтрование); получонии окрашенного раствора (добавление к фильтрату пиридина и уксусного ангидрида перемешивание выдержка в течение 30 мин 2в водяной бане, охлаждение до комнатной температуры); измерении оптической плотности; сравнении результатов измерения с калибровочной кривой и определение содержания лимонной кислоты по формулейЭ.Этот метод известен под названием пиридин - уксусно-ангидридный и основан на окислении лимонной кислоты пиридином в ацетальдегид, за счет чего и происходит окра. шивание раствора.Однако этот метод не нашел широкого применения в производстве из-за высокой стоимости используемых реактивов и их токсичности, Токсичным является также и продукт реакщп лимонной кислоты с пириди. ном - ацетальдегид.Целью изобретения является повышение точности определения.Цель достигается тем, что окрашенный раствор получают добавлением спиртового раствора ванилина к водному раствору лимонной кислоты, при этом последний получают экстракцией серным эфиром с последующей его отгонкой..2,36 2,32. После пресса 2,0% 1,10 1,12 0,84 0,85 2,0% 0,387 0,183 2,0% 0,381 10 0,180 2,0% 0,061 12 2% 0,060 Предлагаемый способ включает следующиеоперации: подготовку реактивов (серныйэфир, серная кислота, этиловый спирт и ва.нилин); подготовку пробы исследуемогопродукта (измельчение, дозировка навескисыра, экстрагирование лимонной кислоты серным эфиром, отгонка эфира при 38 С, разбавление сухого остатка водой и фильтрование);получение окрашенного раствора (добавлениек фильтрату спиртового раствора ванилина,выпаривание, добавление к сухому остаткусерной кислоты); измерение оптической плотности; сравнение результатов измерения скалибровочной кривой и определение содер.жанни лимонной кислоты по формуле.Окрашивание происходит за счет реакциимежду ванилином и лимонной кислотой вприсутствии серной кислоты,В качестве расчетной используют формулу где А - содержание лимонной кислоты впродукте,%;25Сх - показатель, определснный по калибровочной таблице, характеризующийсодержание лимонной кислоты в окра.щенном растворе, мг;Ч -- объем окрашенного раствора, мл;6 - навеска сыра, г.ЗОП р и м е р. Навеску костромского сыра(5 г) после измельчения помещали в дели.тельную воронку на 150 мл и экстрагирова.ли 3 порциями серного эфира (40, 30, 20 млсоответственно). Соединенные экстракты пере. несли в колбу на 100 мл и содержимое колбы выпарили досуха на водяной бане при38 С. К сухому остатку прилили 15 мл дистиллированной воды, поместили в холодильник на 10 мин и профильтровали через без.эольный фильтр. Готовый фильтрат перенеслив вьшаривательную фарфоровую чашку, внесли10 мл этанола и 20 мг ванилина. Полученную смесь тщательно перемешивали и выпаривали досуха на водяной бане при 100 С. Ксухому остатку прибавили 3 капли концентрированной серной кислоты, нагрели на водяной бане в течение 15 мин до появлениятемно-фиолетового окрашивания,Содержимое чашки растворили в дистиллированной воде, перелили в мерный цилиндр, довели объем до 10 мл и измерилиоптическую плотность раствора окрашенногов желто-зеленый цвет на ФЭК - 56 м при длине волны 364 км в кюветах с толщинойрабочего слоя 1,0 мл. Далее, пользуясь калибровочной кривой (см, чертеж) и расчетнойформулой, определили содержание лимоннойкислоты в сыре.Аналогичные исследования были проведе.ны для сыров разной степени зрелости (по.сле пресса, через 4, 6, 10,12 и 14 дней),.Для определения достоверности метода содержание лимонной кислоты в тех же сырах былоопределено стандартным методом, которыйпо методу специалистов считается наиболееточным и может быть использован в качествеарбитражного.Результаты эксперимента представлены втаблице,734562 иююгва мв Тираж 1019 , Подписное ИИПИ з 2159 49 ал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная,5Данные таблицы показывают, что рекомендуемый метод дает отклонение от стандартного метода на 2%, т.е. он является вполнедостоверным.Калибровочная кривая для одного и тогоже прибора строится периодически в зависи.мости от наличйя реактивов одной партии,т.е. с одинаковой степенью очистки.Пример построения калибровочной кривой,Готовят серию растворов лимонной кислотыследующих концентраций; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8;1,0 мг, отмеряя соответственно . 2,4,6,8,10 млстандартного раствора кислоты, 1 г безводной"или 1,0416 г одноводной лимонной кислотырастворяют в мерной колбе на 1 л в 1 й растворе НЗО. 100 мл этого раствора доводятв другой мерной колбе до 1 л НЯО 4 (1 млраствора содержит 0,1 мг кислоты), помещаютв выпаривательную чашку, туда же вносят3 мл спиртового раствора ванилина, тщательно перемешивают и содержимое выпариваютдосуха. К сухому остатку добавляют 3 капликонцентрированной серной кислоты и нагревают до появления темно-фиолетового окрашив алия.Полученный осадок растворяют в воде, доводят до объема 10 мл и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов относительно дистиллированной воды на ФЗК придлине волны 364 км в кюветах с толщинойрабочего слоя 1,0 мл,6Показание экстинкций соответствует мг/млсодержанию лимонной кислоты по калибро.вочной кривой (см. чертеж).Использование способа в практике позволит повысить точность определения содержания лимонной кислоты в сыре, при этомон не требует использования дорогостоящихреактивов и более благоприятен для работыобслуживающего персонала.о Формула изобретения Колориметрический способ определения ли 35 моной осло в сыре, включающий подготовку исходных компонентов, получение окрашенного раствора для колориметрирования, измерение оптической плотности и определение со.держания лимонной кислоты расчетным путем,20 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюповышения точности определения, окрашенныйраствор получают добавлением спиртового раствора ванилина к водному раствору лимоннойкислоты, при этом последний получают экст.ракцией серным эфиром с последующей егоотгонкой,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Международный стандарт, Рег. Мф ИСО2963 - 74. Сыры. Контрольный метод определе.ння содержания лимонной кислоты (прототип),