Способ получения биомассы

+ рост, - ист роста. Бактерия мепиломонасаР 5 М 580 облигатно усваивает метанол в условиях аэрации на питательной среде, содержащей метанол,в качестве источника углерода, источник азота и необходимые минеральные соли.Способ осуществляют следующим образом.Выращивание Л 1 ейу/отопаз зр, РЯМ 580 в периодическом режиме осуществляют прои начальной концентрации метанола в среде 0,5 - 5,0 об. %, предпочтительно прч 2 - 3 об о/оПри непрерывном выращивании штамма концентрацию метанола поддерживают 0,01 - 2 об. % до общего превращения 25 об. о/о метанола при скорости разведения 0,1 - 0,5 ч , рН 4,5 - 9,6, температуре 20 - 45 С,предпочтительно 33 - 36 С.Мейу 1 отопаз зр. РЬМ 580 выращивают при аэрировании воздухом, содерькащим 20 - 60 об. % кислорода со скоростью 0,1 - 0,2 объема,на 1 объем среды в минуту или со скоростью 0,5 - .1,5 объема на 1 объем среды з минуту.В питательную среду,в качестве источника азота вводят соли аммония и/или нитраты, и/или мочевину, а также необходимые для роста вещества: катионы, натрия, калия, магния, кальция, железа, цинка, марганца и анионы - фосфат, сульфат,:нитрат, хлорид и вещества роста.Из полученной трехфазной системы отделяют клеточную, массу и жидкую фазу. Рост МеИту/отогаз зр, ММ 580 на различных источниках углевода в водной неорганической среде при азробных условиях510 1520 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Клеточная масса имеет состав, вес. %: сырой белок 60 - О;,нуклеиновые кислоты 2 - 17; зола 3 - 6; жиры 3 - 8.Клеточную массу высушивают, а жидкую фазу полностью или частично возвращают в процесс.П р и м е р 1. Биореактор объемом 80 л, наполненный 50 л питательного, раствора состава, г: (1 Х 1 Н 4) г 504 200; КНгРО 4 150;1 чагНРО 4 125; Мд 504 7 НгО 25; Са(1 ХОз)гХ Х 4 НгО 125; 1 е 504 7 НгО 0,25; Хп 504 НгО 0,25; КС 1 0,25; вода 50 мл, стерилизуют 10 мин при 121 С, охлаждают до 35 С, асептически смешивают с 1000 лсл метанола, соединяют с 500 мл инокулума метилоионаса зр, РЯМ 580, суспендиру 1 от 28 ч при 35 С с помощью турбомешал 1 си при 300 об./лсин и разводят при расходе потока воздуха 0,7 об./об./лин.Во время разведения в культуре в результате автоматического добавления 6 об, % раствора аммиака поддерживают постоянный рН 7. Через 22 ч реактор охлаждают до 15 С, устанавливают р 1-1 3,0 добавлением серной кислоты и отфильтровывают выпавшую, клеточную массу, промывают водой и высушивают, получая 324 г сухой клеточной массы состава, вес. %: сырой белок 71, нуклеиновая кислота 9, зола 4, жиры 7 (в пересчете на сухую клеточную массу).П р,и м е р 2. Биореактор объемом 340 л, оборудованный 1 п 1 епэог, заполняют 200 л раствора питательных солей состава, г: (1 ххН 4) г 04 о 00; 1 Х Н 41 Х 10 з 500; КНгРО 4 600; ХагНРО 4 500; Мд 504 7 НгО 140; Са(1 чОз)г 4 НгО 15; 1 е 804 7 НгО 6; КС 1 2; водопроводная вода 200 л. Устанавливают рН 6,8, стерилизуют 15 лин при 121 С, охлаждают до 33 С, асептически смешивают с 2000 л метанола, соединяют с 4000 мл 18- часовой форкультуры метиломонаса зр. ВЬМ 580 и разводят при 33 С, расходе потока воздуха 0,5 об./об./мин и перемешивании при 1800 об./яин.Во время выращивания в культуре автоматически поддерживают постоянной концентрацию метанола 0,5 об. % так, что концентрация паров метанола соответствуег концентрации жидкости, в отходящем газе непрерывно регистрируют с помощью плазменно-ионизационного детектора и через пограничный датчик подают необходимое количество метанола, при этом автоматически поддерживают значение рН 6,8 до. бавлением 12 об, % аммиака.По достижении (через 25 ч) клеточной концентрации 14 г/л (сухой клеточной массы) пропускают газ при постоянной подаче воздуха, содержащего 40 об. % кислорода.Массу через 60 ч охлаждают до 15 С, разделяют в центрифуге при концентрации 10 10 г клеточной массы и высушивают.В этих условиях процесса, выход составляет 0,44 г сухой клеточной массы/г метанола со731903 формула изобретения 50 Составитель А. БражниковаТехред А. Камышникова Корректор И. Осиновская Редактор Н. Хубларова Заказ 580/706 Изд. М 310 Тираж 522 Подписное 11 ПО 11 опск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, )К, Раушская наб., д. 4/5Тип. Харьк, фил. пред. Патент става, вес. %: белки 76; нуклеиновые кислоты 6,5; зола 5; жиры 4,5, считая на сухую клеточную м а ссу.П р и м е р 3. Биореактор объемом 80 л, снабженный 1 п 1 епзог, наполняют 50 л раствора питательных солей, состава, указанного в примере 1, 1000 лсл культуры метиломонаса зр. РЬМ 580, которую предварительно за 15 ч культивировали при 35 С, разводят при 35 С, расходе потока воздуха 0,5 об./об./мин, перемешивании при 1200 об/мссн и постоянном рН 7,0. Через 18 ч культуру продувают при расходе потока воздуха 0,05, через последующие 48 ч повышают расход потока воздуха до 0,1 и затем в течение 120 ч ступенчато повышают расход воздуха до 0,35 об./об./псин. При этих условиях поддерживают постоянным равновесное состояние при выходе сухой ,клеточной массы 0,46 г/г метанола и продуктивности 10,8 г/л/ч. 50 об. % полученного фильтрата культуры после достижения, равновесного состояния возвращают в реактор при соответствующем уменьшении использованного раствора питательных солей.Клетчатка имеет составвес. %: сырой белок 72; нуклеиновые кислоты 4,5; зола 3,5; жиры 5,5, считая на сухую клеточную массу.Предлагаемый способ получения биомассы имеет то преимущество, что в,нем впервые выращивасот метилотрофную бактер 1 иго, обладающую значительно большей продуктивностью по сравнению с известны,ми, В предлагаемом способе исключается развитие мутантов, которые утрачивают способность роста на метаноле. Используемая в способе бактерия стабильна, ее обсмен веществ сведен к минимуму.Другим преимуществом способа является то, что ферменты, диссимилирующие и ассимилирующие,метанол, являются составны.ми. При выполнении предлагаемого способа непрерывно в условиях, лимитирующих метанол, содержание нуклеиновых кислот клеточной массы низкое и потеря метанола на испарение практически равна нулю. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 1. Способ полученсия биомассы, предусматривающий выращивание бактерий рода Мейу 1 опгосгаз в условиях аэрации на питательной среде, содержащей метанол в качестве источника углерода, источник азота и необходимые минеральные соли, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью интенсификации процесса и повышения качества получаемого продукта, из бактерий рода Ме//гу 1 опгопаз используют штамм Ме 1 йу/отосгаз зр. Р 8 М 580, облигатно усваивающий метанол.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выращивание ЛЛеЯу 1 опгопаз зр, РЬМ 580 в периодическом режиме осуществляют при начальной концентрации метанола в среде 0,5 - 5 об. %.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что прп непрерывном выращивании штамма концентрацию метанола поддерживают 0,01 - 2 об. %.4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что непрерызчое выращивание осуществляют прп скорости разведения 0,1 в .0,5 ч,5. Способ по пп. 1 - 4, о тл и ч а ю щи йс я тем, что выращивание Ме 1/гу 1 опгопаз яр, Р 5 М 580 осуществляют при поддержании рН в диапазоне 4,5 9,6.6. Способ по пп. 1 - 5, о тл и ч а ю щи йс я тем, что выращдванпе штамма осуществляют прси температуре 20 - 45 С,7, Способ по пп. 1 6, о т л ич а ю щ и йс я тем, что выращивание Месгу 1 опгосгаз вр, РЬМ 580 осуществляют при аэрировании воздухом, содержащим 20 - 60 об. % кислорода со скоростью 0,5 - 1,5 объема на 1 объем среды в минуту.8. Способ по пп, 1 - 6, отличающийс я тем, что выращивание штамма осуществляют при аэрировании воздухом, содержащим 20 - 60 об. % кислорода со скоростью 0,1 - 0,2 объема на 1 объем среды в минуту. Источник, информации, принятый во внимание прп экспертизе:1. Патент Великобритании1420445, кл. С 12 Р 13/06, опублик, 07.01.76.