Кюветная камера для определения аденазинтрифосфата

"Ц аС-А.сНРЕТЕ аз Советскин щиапистическин респубики и 728782.08,78 (21) 2660108/30-15 с присоедии (23) Припри ем заяв А 01 б 7/00 С 01 Ю 1/30 ауднрстннннын кнмнтнт нв данаи нтеннн публиковано 25.04.8 Ь 1 оллетень Ю(53) УДК 542,242, ,2(088,8)отирыт ия описания 28.04.8 та опубликов 2) Авторы изобретен Ерохин и А, П. Гордиенко В 71) Заявитель Н КЮВЕТЦАЯ КАМЕРА ДЛЯ ОПРЕ АДЕНАЗИНТРИФОСФАТА Изобретение относится к технике измерения спабых свечений при биолюминесцентных реакциях, и именно к устройствамкюветных камер для биолюминесцентногоизмерения количества аденазинтрифосфата(АТФ) но его реакции с люциферин-пюциферазным фермент-субстратным комппексом из светоносных органов светляков(1 сЛоВл г Ъдгс й,1 сск.Известна кюветная камера для опредепения АТФ, содержащая установленный наопоре светонепроницаемый корпус, в котором находится фотодетектор с рабочим окном и кювета для введения реагентов, Фотодетектор отделен от кюветы с помощьюфотозатвора Ц ,Однако в таком устройстве при занопнении кюветы фермент-субстратным комплексом пюциферин-пюциферазы вне светонепроницаемой камеры возникает значитная нестабильная ошибка за счет паразитной затухающей люминесценции стекла кю,веты, возбуждаемой при проведении манипуляций с кюветой на свету, Кроме того,наличие фотозатвора обуславливает необходимость применения бпокировочных устройств для защиты фотодетектора, в результате чего усложняется аксппуатация кюветной камеры, Например, при проведении одного измерения необходимо минимум два раза вынуть кювету из камерЫ и выполнить шесть операций по открыттпо и за крытию фотозатвора, Удаленность кюветы от фотодетектора ведет к потерям за счеторассеяния света.Известна также конструкция кюветнойкамеры для биопюминесцентного определения.аденазинтрифосфата, содержащая уста 15новленный на опоре светонепроницаемый корпус, в котором размещен фотодетектор с рабочим окном и кювета с сифоном для введения в нее реагентов, причем кювета отделена от фотодетектора с помощью фоець- , тозатвора (2Такая конструкция кюветной камерыимеет те же недостатки, кроме того, иснопьзуемый способ перемешивания реагентов не всегда обеспечивает реакцию до 7287статочным количеством кислорода, поскольку перемешивание реагентов в кювете осуществляется за счет впрыскивания через сифон исследуемого раствора ЛТФ в определенный обьем фермент-субстратного комплекса, что отражается на результатах измерения, так как реакция лимитируется по кислороду.Йель изобретения - улучшение эксплуатационных характеристик кюветной ка меры, повышение точности измерения и устранение паразитной люминесценции,Это достигается тем, что кювета установлена непосредственно нв рабочем окнефотодетектора и между кюветой и фотодетектором размещен слой оптической смазки, причем кювета снабжена дополнительным сифоном и связанной.с ним системойвакуумного отсоса и продувки реагентовгазами, а светонепроницаемый корпус кюветной камеры установлен на опоре шарнирно.На фиг, 1 схематически изображенапредлагаемая кюветнвя камера, продольныйразрез; на фиг; 2 - сечение А-А, на фиг 1(сечение по шарнирному соединению корпуса кюветной камеры с опорой),Предлагаемая кюветная камера содержит светонепроницаемый корпус 1, и кото- ЗОрый заключена кювета 2 для реагентов сзеркальным отражающим покрытием еебоковой внешней поверхности, установленная непосредственно на рабочем окне 3фотодетектора (фотоумножителя) 4, Оптическая связь кюветы 2 и фотодетектора4 осуществляется через слой оптическойсмазки 5 (например,селиконового масла).Механическое крепление кюветы 2 к фотодетектору 4 обеспечивается оправой 6, 40например, из пластмассы, Для введенияреагентов и промывочных растворов в кнвету 2 служит сифон 7, а для отсоса отработанных реагентов и промывочных растворов кювета 2 снабжена дополнительнымсифоном 8, который сообщен через трехходовой кран 9, магистраль 10 и перепускную емкость 11 с вакуумом, например,водоструйным насосом (на черт. не показан), Для перемешиввния реагентов и обо- агашения их кислородом (газами), осуществляемого путем продувки кислорода (газов) через сифон 8, последний также через ходовой кран 9 соединен с магистралью 12, обеспечивающей подачу кислорода (газов) в сифон 8, Кюветнвя камераимеет вертикальное рабочее положение изакреплена нв штативе с помощью шарниЬ 24ра 13 с фиксатором (на черт, не показан) для отклонения кюветной камерыот рабочего положения, Это значительнооблегчает и ускоряет отсос отработанныхреагентов и промывочных растворов изкюветы,Измерения в предлагаемой кюветнойкамере осуществляют следующим образом,После проведения темнового тока фотодетектора 4 в кювету 2 через входнойсифон 7 впрыскивают с помощью шприцадозатора (на черт, не показан) определенный обьем фермент-субстратного комплекса люциферин-люциферазы и измеряют уровень свечения (фоновое высвечивание),Затем в кювету 2 через сифон 7 вводяттакже с помощью шприца-дозатора исследуемый раствор с АТФ. Одновременновключают блок регистрации свечения сотметчиком времени и подачу кислорода(газов) через дополнительный сифон 8 дляобогащения кислородом (газами) и перемешивания реагентов. Через 10 сек подачу кислорода (газов) отключают перекрытием трехходового крана 9, после чегореакция свечения стабилизируется в течение 20 сек. Затем проводят регистрациюсвечения в течечие 60 сек. Снятие показаний осуществляется автоматически через равные интервалы времени (например,через 10 сек на цифропечать. По окончании измегений с помощью трехходовогокрана 9 подключают отсос воздуха длясоздания в перепускной емкости 11 вакуума и отработанные реагенты поступают,в перепускную емкость 11. Затем черезсифон 7 вводят промывочный раствор иодновременно отсасывают его в перепускную емкость 11. Полный отсос промывочного раствора из кюветы 2 производятонаклоном кюветной камеры на 25-30 Сот вертикального (рабочего.) положениявокруг шарнира 13. Степень промывкикюветы 2 контролируют по величине темпового тока фотодетектора 4. По окончании промывки отсос воздуха отключают,а кюветную камеру возвращают в исходное положение. После этого она готовак новому циклу измерений, Длительностьобработки одной пробы, составляет 5-6 мин.Испытания кюветной камеры показали,что прн использовании неочищенного комплекса люциферин люциферазы можно уве-лоренно определить до 10 г АТФ в 1 млпробы, тогда как в кюветной камере по-Япрототипу определяется до 10 АТФ,Затраты времени на одно определение снижаются более чем в два раза,Кюветная камера дпя определения аде О назинтрифосфата, содержащая установленный на опоре светонепроницаемый корпус, в котором размещен фотодетектор с рабочим окном и кювета с сифоном для введения в нее реагентов, о т л и ч а ю щ а - 15 я с я тем, что, с целью улучшения эксплуатационных характеристик кюветной ка- меры, кювета установлена непосредственПодача сало ИИПИ Заказ 1824/3 Тираж 723 Подписное филиал ППП "Патентф, г, Ужгород, ул. Проектная,572Предлагаемая кюветная камера может найти широкое применение в научно-исследовательских учреждениях при проведении массовых исследований с различными целями,формула изобретения 87826но на рабочем окне фотодетектора н между кюветой и фотодетектором размещенслой оптической смазки, причем кюветаснабжена дополнительным сифоном и связанной с ним системой вакуумного отсс- са и продувки реагентов газами, а светонепроницаемый корпус кюветной камерыустановлен на опоре шарнирно.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент США % 3359973,кп, 128-1, 1967,2. Данюков Ю. Г. и Мильман Л, С,Упрощенный фотоэлектрический прибор дляэнзиматического определения АТф при помоши системы люциферин-люцифераза,Вопросы медицинской химии, т. 12, в. 5,с. 548-555, 1966 (прототип).