Способ получения препарата клубеньковых бактерий

(72) Авторы изобретения сесоюзный научно-исследовательский инстит сельскохозяйственной микробиологииЗаявитель 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ выми бактерия Используют ВО(С Н 40)п Н С,Н 25 С 6 Н 5 Обработками. ся ПАВ обгцей формулы , где и - С 8 Н Сб Н,или С 10 Н 21 - СОН 41 и и= сухого торфа такими ПАВ жидкий ицокупюм зца 1 птемя, необходимое для равно ия бактериальцых кпе 1 ок 1 ьцо несение их в м рцо.э массокращает в распределен Изобретение относится к области сельскохозяйствецной микробиологии и может быть использовано в производстве препаратов клу. беньковых бактерий, которые применяют в сельском хозяйстве при вырашивации бобовых растений.Известны различные способы получения пре паратов клубеньковых бактерий путем перемешивания инокулята азотфиксируюших микроорганизмов с различными субстратами 1.Известен также способ получения бактери апьного удобрения смешиванием торфа. с инокулюмом механическим путем ипи путем периодического напыления инокулюма йа торфяну 1 о крошку при температуре слоя последней не вьюше 35 С до достижения равномерной влажности препарата 35-40% 12 .Как известно, сухой торф с влажностью 15 - 2070 отличается значительной гидрофобностью Кроме того, в торфе содержится до 10% воска и смол (битум), существенным образом снижа. ющих смачиваемость торфа водой или различны. ми водными растворами. Высушивание торфа при 150-180 С приводит к попимеризации би. тумов, усуглубляющей зффект цесмачиваемостиПоэтому во всех случаях смецгивацие происходит в течение длительного времени (1 О - 25 мин),следствием чего является низкая выживаемость5клубеньковых бактерий.Цель изобретения - повысить выживаемостьбактерий в процессе механического перемешивания ицокупюма с сухим торфом,Эта цель достигается тем. что механическое0перемешивание сухого торфа с ицокупюмомпроводят в присутствии неиногеццого поверхност.но-активного вешества (ПАВ). имеющего высо.кую смачиваюшую активность по отношению ксухому торфу, нетоксичного цля кпубецьковыхбактерий и не снижающего азотфиксцрующую5активность растений в симбиозе с клубецько697481 сс торфа при перемешивании. Сокращение врс.мени перемецшвания существенно снижает нроценг гибели вносимых в торф бактериальныхклеток, Благодаря этому становится возможнымуменынить количество инокулюма при сохранении требуемого для препарата исходного титра% от исходного титра Способ получения препарата Концентрация ПАВ в препарате, вес.%после хранения.в течение 6 мес после механическо перемешиванияв течение времени,омин Перемешивание составляющихпрепарата без ПАВ (известный)0 25 60 Х 20 Перемешивание составляющих препарата в присутствии оксиэтилированного спирта: фракции Со-С 2 о 71 58 82 78 0,1 0,5 нонилфенола 61 0,1 57 0,5 73-------------- ДП р и м е р 3. Смесь торфа с ПАВ (без Таким образом, новый способ получения инокулюма), приготовленную аналогично приме- препарата клубеньковых бактерий по сравнению рам 1 или 2, расфасовывают в непроницаемую 5 О . с известным обеспечивает сокращение времени для микроорганизмов упаковку, например поли- перемешивания торфа с инокулюмом с 15 - 25 этиленовые пакеты, стерилизуют одним из из- до 3 мин при обеспечении равномерности смевестных способов и инокулируют в асептических. шивания; повышение выживаемости клубень- условиях инъекцией жидкой культуры клубень- ковых бактерий в процессе приготовления пре 55ковых бактерий непосредственно в пакет. При . парата с.25 до 78 - 82%. этом жидкий инокулюм равномерно распределя- Результаты испытаний выживаемости клубень- ется в массе торфа беэ дополнительного переме. ковых бактерий в препаратах, изготовленныхразными способами, при условии достижения П р и м е р 1. Подготавливают 170 кг нейтрализованного и высушенного торфа с тониной помола 0,1 мм и влажностью 18 - 20%.Затем к нему одновременно прибавляют 130 л инокулюма (с титром 14,2 млрд/мл) и 0,1% (к весу торфа) оксиэтилированного спиртафракции С,о - Со со средней степенью оксиэтилирования 3 моля окиси этилена на 1 моль спирта и перемешивают компоненты до равномерного распределения жидкости в препарате. Время перемешивания 3 мин. Равномерность распределения инокулюма в торфе определяют двумя способами: определением влажности отдельных проб весом 1 г и определением числа бактерий в отдельных пробах весом 1 г. Готовый препара расфасовьизанп и хранят в зечение 6 мес. нрн низких положительных температурах.По предлагаемому способу выживаемость бактерий после пермешивания составляет 82% (11,6 млрд/г), а в контрольном варианте (без ПАВ) для получения равномерного распределения инокулюма требуется время перемешивания не менее 20 мин и в этом случае выживаемость бактерий составляет не более 25% (3,5 млрд/г),При тех же исходных условиях и введении 0,5% аналогичного ПАВ выживаемость бактерий после 3 мин перемешивания составляет 78% (11,1 млрд/г) от исзодного титра.П р и м е р 2. Поступают как в примере 1, по в качестве ПАВ берут оксиэтилированный нонилфенол со средней степенью оксиэтилирования 7 молей окиси этилена на 1 моль нонилфенола в количестве 0,1%, В этом случае выживаемость бактерий после перемешивания составляет 75% (10,6 млрд/г), а при кощентрации ПАВ 0,5% - 73% (10,3 млрд/г) от исходного титра,Результаты примеров 1 и 2 приведены в таблице., Редактор Е. Хорина Тираж 483 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Заказ 6870/18 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 равномерного распределения инокулюма насубстрате-носителехПрепарат обладает низким качеством иэ-занеравномерного перемешивания инокулюмас торфом.ххВыживаемость бактерий при приготовлениипрепарата по существующей технологии,Формула изобретения 10 1, Способ получения препарата клубеньковых бактерий на гидрофобных твердых субстратах, преимущественно торфе, включающий ннокулирование субстрата-носителя жидкой культурой клубеньковых бактерий с последующим перемешиванием, о т л и ч а ю щ и й с я,6тем, что, с целью снижения травмируемости игибели клеток бактерий, процесс перемешивания проводят в присутствии неионогенных поверхностно-активных веществ общей формулыНО (СН 40)п Н, где и - СаН,7 С 6 Н, -- С 12 Н 5 С 6 Н или С 1 оН 21 - С 2 оНф 1 ио=З - 12.2, Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что поверхностно-активные вещества используют в концентрации 0,1 - 0,5% от веса воздушно-сухого торфа,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Доросинский Л. М. Клубеньковые бактерии и нитрагии. Л., "Колос", 1970,2. Авторское свидетельство СССР У 477150,кл. С 05 Е 11/08, 1975 (прототип),