Способ получения лимонной кислоты

10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 кости после его засева замоченными спорамп и подачи в него мелассного раствора со скоростью 0,06 - 0,09 м/ч на 1 м объема среды посевного ферментатора.Одновременно с мелассным раствором в посевной ферментатор целесообразно ввести питательные соли, при этом используют мелассный раствор с концентрацией сахара 30 - 50 кг/м.Способ осуществляют следующим образом.Приготавливают 3 - 4% -ную питательную среду, в которую вводят все необходимые питательные соли и раствор желтой кровяной соли в оптимальных концентрациях, установленных по данным биохимических анализов меласс. Этой питательной средой заполняют посевной ферментатор, который засевают предварительно замоченными на питательной среде А 4 спорами гриба Аэрегр 111 цз п 1 дег производственного штамма Л. Замоченные споры готовят по известной технологии. После засева ферментатора спорами включают мешалку и подают воздух для аэрации: первые 1 - 2 ч 2 - 3 объема воздуха в 1 ч на 1 объем среды, а последующие часы объем подаваемого воздуха постепенно доводят до 18 - 20 объемов в 1 ч на 1 объем среды.Через 12 - 16 ч после засева посевного ферментатора в него подают мелассный раствор и одновременно начинают отбор культуральной жидкости. Питательные соли подают вместе с мелассным раствором, скорость подачи которого выбирают в пределах 0,06 - 0,09 м/ч на 1 м объема среды, а концентрацию - 30 - 50 кг/м.Для оценки активности непрерывно выращиваемого мицелия и определения влияния продолжительности на качество посевного материала отобранным подрощенным мицелием засевают основные ферментаторы по общепринятой технологии - 10% мицелиальной жидкости от объема среды в основном аппарате. Биосинтез лимонной кислоты проводят в основных ферментаторах по общепринятой технологии, при этом критерием биологической активности процесса по выходу конечного продукта - лимонной кислоты служит обобщенный показатель - съем кислоты с единицы объема основного ферментатора за сутки (кг/мз сутки), который учитывает и выход кислоты от введенного сахара и содержание лимонной кислоты в смеси образующихся кислот.П р и м е р 1. Приготовленную питательную мелассную среду засевают предварительно замоченными спорами гриба Азрегр 11 цз п 1 дег по известной технологии. Через 12 ч после засева спорами посевного ферментатора в него непрерывно подают мелассный раствор с одновременным сливом культуральной жидкости, Питательные соли подают вместе с мелассным раствором. При объеме среды в посевном ферментато ре 18 л и расходе мелассного раствора 0,9 л/ч скорость подачи последнего составляет 0,06 м/ч мКонцентрация сахара в мелассном растворе 50 кг/мз.При непрерывном подращивании мицелия гриба - продуцента лимонной кислоты в течение 20 сут культуральной жидкостью разного возраста засевают производственные ферментаторы для определения активности подрощенного мицелия, которую оценивают по величине съема лимонной кислоты (кг/сутки с 1 м объема среды). Контролем являются данные по биосинтезу кислоты при засеве основного ферментатора 24- часовым подрощенным мицелием.Результаты опытов приведены в таблице. Съем лимоннойкислоты, кг,мсутки Возраст подрощенногомипелия, засеваемого в производственные ферментаторы, сут Пример 1 12 18 20 Контроль12,9 13,2 13,8 13,6 12,7 12,1 1 6 11 18 Контроль 12,4 12,7 12,9 11,9 11,8 1 712 15 Контроль 14,3 14,9 14,8 14,6 13,65 П р и м ер 2, Условия опыта такие же, как в примере 1. Скорость подачи мелассного раствора концентрацией по сахару 30 кг/м равна 0,089 м/ч м (расход 1,6 л/ч) . Продолжительность культивирования 18 сут. Данные опыта приведены в таблице,П р и м е р 3. Условия опыта аналогичны примеру 1. Мелассный раствор вместе с питательными солями подают в посевной ферментатор через 16 ч с одновременным отбором культуральной жидкости, которую периодически через определенной время (см. таблицу) используют для засева производственных ферментаторов. Продолжительность культивирования 15 сут. Результаты опыта приведены в таблице,Анализ данных, приведенных в таблице, показывает, что использование предлагаемого способа позволяет увеличить съем лимонной кислоты с единицы объема среды в производственном ферментаторе примерно на 10 - 15/о, а расход спор сократить в 3 - 5 раза. Продолжительность подращивания мицелия по отъемно-доливному способу, т, е. по известному, не превышает 3 - 5 сут,682566 Составитель М. Ларина Корректор Л. Орлова Техред Н. Строганова Редактор Т. Фадеева Заказ 2104/9 Изд. Мо 526 Тираж 549 Подписное НПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 а по предложенному достигает 15 - 20 сут.Внедрение в производство предлагаемого способа не вызывает затруднений и возможно при существующем ферментационном оборудовании при незначительном изменении сго обвязки коммуникациями..о прсдварительным расчетам годовой ;ко омичсский эффект от внедрения способа па существующих заводах составит около 60 - 60 тыс, руб.10 Формула изобретения1. Способ получения лимонной кислоты, предусматривающий приготовление питательной мелассной среды, засев ее замоченными спорами гриба - кислотообразователя Лзрегр 11 пз п 1 дег в посевной ферментатор, приготовление подрощенного мицелия с последующим засевом им производственных ферментаторов, брожением и выделением лимонной кислоты из сброженных растворов, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности мицелия, снижения расхода спорового материала и тем самым повышения эффективности процесса, приготовление подрощенного мпцелпя осуществляют путем непрерывного отбора через 12 - 16 ч из посевного ферментатора культуральной жидкости после его засева замоченными спорами и подачи в него мелассного раствора со скоростью 0,06 - 0,09 мз/ч на 1 мз объема среды посевного ферментатора.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что одновременно с мелассным раствором в посевной ферментатор вводят питательные соли, при этом используют мелассный раствор с концентрацией сахара 30 - 50 кг/мз.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1, Авторское свидетельство СССР Уз 335278, кл. С 120 1/04, 1970,