Штамм

УДАРСТВЕННЫЙ КОМ ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИ ТЕНИЯ адной энзикция льтур ьско- огии изнаки мясоОПИСАНИЕ ИЗОБ И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) 1. Авторское свидетельства СССРМа 283152, кл. С 12 К 3/00, 1968.(57) Штамм Вас 111 иа,ацЬШвч-продуцент протеазы (Коллелаборатории чистых микробных куВсесоюзного научно-исследователго института прикладной энзимолпод номером ИПЭ) .Морфологические признаки. 1 Спеткиимеют форму палочек размером 1,73,0 х 0,4"0,6 мкм, обычно расположен"ные в цепочках. Клетки равномерно окрашиваются, грамположительны, подвижны, имеют перитрихиальный тип жгути- .кования. Капсул не имеют. Споры образуются терминально, реже в центре.Споры имеют цилиндрическую или зллипсоидальную форму, размеры 1,2-1,4 хх 0,6-0,8 мкм.Культуральные пр На пептонном агаре после суточной инкубации при 37 С образуются сероватые, непрозрачныеу шероховатые складчатые колонки диаметром 3-6 мм, На ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой и толстой морщинистой пленки, иногда со складками.1 На мясо-пептонном бульоне рост в виде поверхностной желтовато-белой толстой и морщинистой пленки, при зтом собственно бульон остается прозрачным.Физиологические признаки. Аэроб, Оптимальные условия роста; температура 37 С, рН 5,8-6,2. Гйдролизует крахмал, молоко свертывает и частично ф пептонизирует, разжвкает желатину, Культура Лслольауат для роста глюка- Я зу, сахарозу,1/3 маннита и фруктозу с об- в разованием кислоты без выделения газа.фаад Не усваивает лактозу, арабинозу, кси- р лозу, мальтозу, рамнозу, кульцит, инозит и сорбит, На среде Кларка , рь образует ацетилметилкарбинол, не растет на среде с нитратом, восстанав ливает нитраты до нитритов. Хорошоразвивается на среде с 77-ным раствором а, ИаС 1. Культура устойчива к фаголиэи-, СутКультура хранится в анаэробных условиях на ломтиках картофеля в пробирках с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде.67750Изобретение относится к микробиологической промьлЫенности, в частности к получению нового штамма, используемого для биосинтеэа Ферментапротеаэы.Наиболее распространенными продуцентами протеаз являются микроорганизмы вгрибы, дрожжи, бактерии, втом числе бактерии рода. Вас 111 цз,По своим культурально-морфологи-.ческим и Физиологическим свойствамнаиболее близок к заявляемомуштаммВас 111 ця яцЬЫ 1 ъя 103, который в настоящее время используется для йроиз"" водства протеазй в йромьппленном масштабе 1.13."Однако известный шамм-продуцентпротеаз Вас 111 ця яцЬйх 1 хя 103 имеетнедостаточно высокую активность, кроме того, при углубленном культивировании данного штамма Ферментации малостабильны, сама культура подверженафаголизисуи, как следствие, выходизготовления продукции невысок.Целью изобретения является получе ние высокоактивного нового штаммапродуцента протеазы, относящегося квиду Вас 11 ця яцЬсИХя и -отвечающеговсем требованиям производства данногофермента с высокой истабильной протеолитической активностью в условияхглубинного культивирования,Для получения, такого штамма изразличных природных сусбстратов быливыделены чистые культуры бактерий35способных к биосинтезу протеаз. Иэних далее был отобран высокоактивныйштамм, обоэначеннйй после проведениявидовой идентификации как Вас 111 цяяцЬс 11 я 7-50.Полученный новый штамм Васх 11 ця4 ОяцЬс 1 хя 7-50 обладает следующимиморфологическими и культурально-Физиологическими свойствами, Величиныклеток односуточной культуры на мясопептонном агаре 1,7-3,0 х 0,4-0,6 мкм.Я 5На богатых органических средах (1 ЧПАс глюкозой, картофельная среда) тол стйе крупные клеткй обычно расположены в цепочках, Палочки равномерно окрашиваются, грамположительны, подвихны, имеют. перитрихиальный тип жгутикования.Сйоры образуются термийально, режерасположены в центре, Споры цилиндри 4 2ческне или эллипсоидальные размером1,2-14 х 0,6-0,8 мкм.На 111 А после суточной инкубациипри 37 С образуются сероватые, непродзрачные шероховатые, складчатые колонки диаметром 3-6 мм.На ломтиках картофеля рост обильный в виде серовато-белой сухой толстой, морщинистой, иногда со складками пленки,На мясо-пептонном бульоне роств виде поверхностной толстой морщинистой желтовато-белой пленки.Аэроб, Оптимальные условия роста:температура 37 С, рН 5,8-6,2,Культура использует для ростаследующие .сахара: глюкозу, сахароэу,Фруктозу и 1/3 маннита с образованием кислоты без выделения газа. Неусваивает лактоэу, арабинозу, ксилоэу, мальтозу, рамноэу, дульцит, иноэит и сорбит. Восстанавливает нитраты до нитритов. Образует ацетилметилкарбинол на среде Кларка. Не ассимилирует нитрат. Хорошо развивает всреде с 77-ным раствором ИаС 1, гидролиэует крахмал, молоко свертываети частично его пептонизирует, жела,тину разжижает. Культура устойчивак ФаголиэисуП р и м е р. Выращивание новогоштамма -. продуцента протезы Вас 111 цяяЪ 111 я 7-50 производят на стандарт. ной производственной питательной среде (ГОСТ 59-12-73,Главмикробиопром)при 37 С в термостате на круговыхочалках (180 об,мин), а также на бродильных установках типа "Биолофит".На 48 часу роста в культуральной жидкости определяют протеолитическую .активность по стандартной методике(ГОСТ 20264 2.74 Главмикробиопром),Во всех опытах в качестве контролявзят производственный штамм Вас 111 цяяхЬй 11 з 103,Результаты определения протеолитической активности представлены в таблицеПри использовании нового штаммапродуцента протеазы Вас 111 ця яцЬт 1 ы7-50 для производства ферментного пре"парата протосубтилина активностью вкультуральной жидкости увеличивается.на 17% по сравнению со штаммом Вас 1- Тця яцЬ 1:1 ы 103.677504 Количество Протеолитическаяопытов активность (ед/мл) Способ культивирования И штамма 3,42 2,89 7-50 в колбах 103 4,05 в биолофитах 7-50. 3,4 Ь 103 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,. 4 Редактор Е, Месропова Техред Л,Коцюбияк Корректор А. Ильин ееиввеаавв Заказ 7029/1 Тираж 521 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по далам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб , д. 4/5