Способ обработки спермы кроликов

у гА Н И Е 1ТЕНИЯ О 42 Союз Советск оциапистическ Республик(6 полнительное к ввт. свид 9562/3 2) Заявлено 13.01.77 (21) 2 51) Ч.Кл.-А 61 О 7/О с присоединением (23) Приоритет -явки Ъе оударстеенныи комитет плетень Ъо 53) УДК 591.463.1(43) О иковано 28.02.79. о делам изобрете и открытий бликования описания 11.03,79, Помыт С. Андр и о-исследователь ии институтролиководств шного звероводства(54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ КРОЛИКО области жи- тскусственноИзобрете вотноводства му осеменен относится частности кроликов. Известные результатов п ющей способн ского примет осеменении. способы не дали устойчивых 5активности и оплодотворясти спермы пря практичения ее при искусственном Известный способ получения активной заморокенно-оттаянной спермы кролика состоит из следующих операций: приготовление разбавителя, взятие спермы у самца, первичное разбавление спермы, адаптация, 15 вторичное разбавление спермы, эквилибрация, расфасовка спермы, замораживание спермы, оттаивание спермы, определение активности у спермы, определение оплодотворяющей способности за мороженно-от таянной спермы.Известен способ получения активной замороженно-оттаянной спермы кролика, состоящий из вышеперечисленных операций и заключающийся в разбавлении спермы 25 1: 5 разбавителем, состоящим из следующих компонентов: 20 .чл куриного желтка;1,16 г цитрата натрия; 2,4 г декстрозы;0,7496 г гликокола; 0.,168 г бикарбоната натрия; 0,32 г хлористого калия; 0,01 г ЗО лимонной кислоты и до 100 л 1 л дистиллированной воды, хранение ее при температуре 5 С в течение 3 - 4 ч; во вторичном разбавлснии в соотношен 1 ьп 1: 1 тем же разбавителем, содержащем 16 О 1, глицерина, в применении периода эквплибрации в течение 5 ч, в расфасовывании спермы в стеклянные флаконы и замораживании в изопропиловом спирте с сухим льдом со следующей скоростью охлаждения: до - 40 С пять градусов в минуту и от - 52 до - ОС восемь градхсов в минут, в хранении образцов в .холодильнике чри температуре - 90 С в течение 24 ч и оттаивании в водяной бане при температуре +5 С. Однако, этот способ замораживания не дал устойчивь 1 х резх льтатов по оплодотворяемости (из 22 осемененных самок принесли пометы всего 3) и малоприемлем для практики из-за трудоемкости процессг замораживания, который обусловливается снижепиех 1 температуры пр.1 замораж:1 вании добавлением сухого льда в изопропиловый спирт.Существующий способ получения активной спермы кролика с применением в качестве криофплактического средства 12" дп,1 етилсульфоксида в сочетанпии с 63649425 мальцого количества потомства с высокими племенными качествами.Поставленная цель достигается приготовлением растворов - разбавителей, со ставы которых указаны в таблице. Состав на 100 лл дистиллированной водыКоиионеиты иаотопииеский гипертонический 1,88 3,14 Гли,о ол, г11 ат 1 ий лпгво 1 гно-к:1 саыйре.гааиегиеииый, пятивотнв:и г/Кел он к . иод ница, лл 1( иофилактииеское средство, лл:г,и;первидвинетиисусьфоксид Пепииллии, тыс. и ед. 0,3820 0,572 в 18 15 15 15 Концентрация веществ в гипертоническом разбавптеле - гликоле лимонно- кислом по сравнению с пзотоническим повьш 1 ается: неэлектролпта-гликокола на 67% цитрата натрия трехзамещенного пя тцводного на 50%.Пеоед взятием спермы у самца разбавитель растворяют в 100 лел прокипяченной дистиллированной воды, добавляют пегнщиллпн и, отмерив нужный объем, добавляют соответствующее количество желтка и крцофплактического средства (в гц псдтоццчсский разбавитель),Для лу 1 шего раствореш 1 я в разбавителе желтка разбавитель прогревают в во дяной бане прп температуре 60 - 62" С в те 1 ение 10 11 ин.Затем для операции замораживания отбцра:от эякуляты с активностью спермы 0,8 - 0,9. Определяют объем, концентрацию и резпстентность спермы. 1(ондентсацця спермы должна быть цс менее 250 л 1 лн в 1 1 ы, рсзнстентеОсть не ниже 1250.Полученную сперму после оценки раз бавляют г, первый раз цзотоническим гликоколом лимонно-кислым (с температурой 35 - 38 С) в соотношении 1: 3. Разбавитель приливают осторожно по стенке сосуда. вращательными движениями смешивал его 35 со спермой. Разбавитель приливают дв, - кратно с промежутком в 5 минут; в первь.и раз - в кратности 1; 1., во второй раз - добавляют остальное количество, Разбавленную сперму через 5 мин 40 проверяют по активности, наливают во флаконы из-под пенициллина, прикрепляют этикетку и, предварительно обернув их изоляционным слоем ваты толщиной в 1 см, ставят в полиэтиленовых мешочках 45 в холодильник при температуре 5 - 8 С на период адаптации в течение 1,5 ч, По истечении периода адаптации сперму разбавглицерина не дает положительных результатов,Цельо изобретения является получение более активной спермы высокоцецного производителя для получения от него максиляют г,горично охлажденным при температуре 5 - 8 С гипертоническим разбавителем с криофилактцческим средством в соотношении 1: 0,5 к общему объему спер, ы с разбавителем (1 - часть спермы с цзотоцическцм разбавителем; 0,5 - части гипертонического разбавителя с криофилактическцм средством). Перед разоавлеццсм гипертонический разбавитель тщательцо перемешцваот, набирают в нужном объеме в охлажденную пипетку и осторокно по стенке флакона медленно приливают к сперме. Перед и после разбавления сперму не встряхивают и не перемешивают с разбавителем до окончания перцеда эквцлибрацни.Период эквилибрации длится 3 ч при температуре 5 - 8 С. После окончания периода эквцлцбраццц сперму расфасовыва 1 от прц помощи шприца из полиэтилена с иглой для 1;нъекцип в полиэтиленовые трубочки соломинки размером: длина 26 сл 1, диаметр 3 л 1 м, объем 0,5 л 1 л.Перед расфасовыванием полиэтиленовые трубки и шприц обеззараживают облучением бактерицидной лампой БУВцли БУВи охлаждают в холодильнике при температуре 5 - 8 С. Охлажденный шприц обертывают поролоновым изоляционным слоем толщиной не менее 1 слг.Сперму разливают в трубки вручную по способу сообщающихся сосудов, поместив их в кассету - металличсскуо тубу в 11-образцом положении (длина тубы 9 сл 1, диаметр 3 сл 1),Перед тем как заполнить шприц спермой, его предварительно ополаскивают охлажденным гипертоническим разбавителем с криофцлактическим средством.Флакон с охлажденной спермой во время расфасовывания спермы в трубки держат в термосе со льдом или в холодильнике.После расфасовки спермы концы трубочек заливают растопленным парафином.Замораживание спермы кролика производят быстрым способом в парах азота в течение 3 лгигг по одной минуте на расстоянии 16, 8 и 1 слг над уровнем жидкого азота. После чего сперму погружают в жидкий азот на 1 - 2 лгин и переносят в сосуд Дьюара с жидким азотом на хранение при температуре - 196 С. Такой способ замораживания способствует равномерному и быстрому снижению температуры со скоростью 50 С (в первую минуту), что лучше сохраняет активность спермы кролика.Оттаивание замороженной спермы в соломинках производят в термостате при температуре 38 С. Полная активность у спермы кролика при оттаивании в этих условиях выявляется через 25 лгин.Осеменение самок производят в течение не более часа с начала размораживания спермы. Осеменяют кроликов спермой с активностью не ниже 0,3, При этом доза оттаянной спермы - 1,0 лгл; количество подвижных сперматозоидов в дозе - от 4,5 лглн и более,Замороженная сперма указанным способом сохраняет оплодотворящую способность,П р и м е р. У свежеполученной спермы определяют активность, густоту, берут пробу на определение концентрации и резистентности.Определяют объем и разбавляют в первый раз изотоническим разбавителем гликоколом лимонно-кислым в соотношении 1; 3, приливая его двукратно с пятиминутным промежутком в первый раз 1: 1, через 5 лгин добавляют остальную часть.У разбавленной спермы определяют активность, затем наливают во флаконы изпод пенициллина с этикеткой и, предварительно обернув флаконы ватой толщиной в 1 слг, в полиэтиленовом мешочке ставят в холодильник при температуре 5 - 8 С на период адаптации в течение 1,5 ч. Затем спсрму разоавляют вторично охлажденным при той яе температуре гипертоническим разбавителем с диметилсульфоксидом в согетднии с глицерином в соотношении 1: 0,5 к общему ооъему спермы с разбавителем.Перед разбавлением разбавитель с криофилактичсским средством тщательно перемешивают, набирают в нуяном объеме в охлажденную пипетку и осторожно по стенке флакона медленно приливают к сперме. Перед и после разбавления сперму не встряхивают и не перемешивают с разбавителем до окончания периода эквилибрации, который длится 3 ч. После окончания периода эквилибрации сперму расфасовывают при помощи шприца из полиэтилена с иглой для инъекций в полиэтиленовые трубочки, в соломинки размером: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 55 длина 26 слг, диаметр 3 лглг, объем 0,5 лг,г. Перед расфасовкой шприц и полиэтиленовые трубки охлаждают в холодильнике при температуре 5 С. Охлажденный шприц обертывают горолоновым изоляционным слоем толщиной нс менее 1 слг. Перед расфасовкой шприц предварительно ополаскивают охлажденным гипертоническим раст вором с криофнлактическим средством.Сперму разливают в трубки по способу сообщаю;.цихся сосудов, поместив их в кассету. Трубки закупоривают расплавленным парафином.Сперму замораживают быстрым способом в парах азота в течение 3 лгин по одной минуте на расстоянии 16, 8 и 1 слг над уровнем жидкого азота, Затем сперму опускают в жидкий азот и через минуту переносят нд хранение в сосуд Дюара с жидким дзотом при температуре - 196 С, Сперму хранят в течение месяца и более,От."апванпе замороженной спермы производят в термостате при температуре 38 С. Полная активность спермы кроликов при оттаивании з этих условиях выявляется через 25 лгин.Осеменение оттаянной спермы производят в течение часа с начала размораживания. Осеменяют кроликов спермой с актппност:;ю 0,3 - 0,5; доза разбавленной спермы -олжна составлять 1,0 лгл, количество подвижных спермиев в дозе 10 лглн. и выгпе. Использование предлагаемого способа замораживания спермы обеспечивает по сравнен:по с существуюпгихпг способдми следующие преимущества;сохраняет активность у здмороженнооттдянной спермы до 0.4 при средней активности 0.25;дает возможность неограниченно использовать сперму ценных производителей;позволяет постоянно использовать самца с равномерной нагр зной (и ри х ранении его спермы в замороженном состоянии). Формула изобретения Способ обработки спермы кроликов, включающий двукратное разбавление спермы, адаптацию, эквилибр ацию, хранение в замороженном виде и оттаивание, о т л ич а го ш и й с я тем, что, с целью сохранения высокой биологической активности спермиез. первое разбавление осуществлягот в соотношении 1:3, а вторичное разбавление - гипертоническим разбавителем 1: 0,5, адаптаци:о проводят в течение 1,5 - 2 ч, эквилибрируют в течение 3 - 4 ч, здморавсивд:от сперму в парах:кидкого дзота в течепис 3 лгггн: по одной минуте нд уровнях 16,8 и 1 слг над поверхностью жидкого дзота, и оттаивание проводят при температуре 38 С в течение 25 - 30 лгин,