Способ получения 5инозиновой кислоты

Союз Советских Социалистических Республик11) 6151 ЭО РВТЕНИ У СВИДЕТЕЛЬСТВ ЗОБ АВТОРСКОМ б 1 Дополнител к авт, свил-ву(45) Дата опубликов 1) 2408841/281)М. К 12 З 1 киосудврственный иом Совета Министров С по делам изооретени открытий. С. Луки обретения Всесоюзный научнои селекции промыисследовательский институт генеленных микроорганизмов(1) Заявитель 4) СПОСОБ ПОЛ Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению 5-инозиновой кислоты методом глубинной ферментации с помощью микроорганизмов, и может быть использовано в пищевой промышленности для улучшения вкусовых качеств пищи.Известно несколько способов получения 5-инозиновой кислоты путем микробиологического синтеза,Известен способ, основанный на способности культур Вгеивас 1 ег 1 цгп агпгпоп 1 адепез, М 1 сгососцз д 1 ц 1 агп 1 сцз, М 1 сг зодопепвее и др, синтезировать 5-инозиновую кислоту из ее предшественника - гипоксантина, добавленного извне или образованного другой культурой 1).Известны также способы получения 5-ино. зиновой кислоты, заключающиеся в прямой ферментации кислоты.Преимушество прямого способа получения 5-инозиновой кислоты состоит в том, что он не требует использования дорогостоящих предшественников - гипоксантина и инозина, добавляемых к среде в виде чистых кристаллических препаратов, либо в виде культуральной жидкости, полученной в результате предварительного культивирования их продуцентов. Однако для достижеНИЯ 5-ИНОЗИНОВОИ КИСЛОТ ния высоких выходов 5-инозиновой кислоты путем прямой ферментации в питательных средах в известных спосооах используютчистые препараты аминокислот, витаминов,пуринов, поверхностно-активных веществ.Известен способ получения 5-ииозиио 5 вой кислоты, путем глубинной ферментациипродуцента Впивас 1 епцгп агпгпог 11 адепев напитательной среде, содержащей источник глерода, азота, необходимые минеральные соли в присутствии источника ростовых фак 1 О торов с последующим выделением целевогопродукта 12.Этот способ является наиболее близкимрешением к предлагаемому изобретению потехнической сущности и достигаемому эффекту,15 По известному способу получают в культуральной жидкости 7-10 г(л 5-инозиновойкислоты.В Советском Союзе производство 5-инозиновой кислоты микробиологическим синтезом не осуществляется из-за отсутствиягоспособа, доступного для организации отечественного производства этого нуклеотида.Цель предлагаемого изобретения заключается в создании более простого и дешевого микробиологического способа полученияг 5 5-инозиновой кислоты на основе использова615130 ния отечественных штампов микроорганизмов и питательных сред, содержащих простые и доступные компоненты, производимые отечественной промышленностью.Цель достигается тем, что по предлагаемому способу в качестве продуцента 5-инозиновой кислоты используют штаммы ВгМ- вастепцгп апгпоп(адепез ВНИИгенетикаи ВНИИгенетика, а в качестве источника ростовых факторов - кукурузный экстракт или автолизат дрожжей.Эти штаммы получены в результате применения генетико-селекционных методов работы, в частности приобретения резистентности к 8-азагуанину. Штаммы хранятся в Центральном музее промышленных культур микроорганизмов ВНИИгенетика под регистрационными номерами ЦМПМ В - 1366 и ЦМПМ В - 1367, соответственно.В предлагаемом способе может быть также использован известный штамм ВНИИгенети ка - 255 - 5.Эти штаммы требуют для роста и биосинтеза 5-инозиновой кислоты в глубинных условиях ферментации аденин, цистеин, биотин и ряд других витаминов группы В (тиамин, пантотеновую кислоту, никотиновую кислоту), Вместо чистых препаратов аденина, аминокислот, витаминов в питательных средах предлагаемого способа используют отходы пищевой промышленности - кукурузный экстракт, а также дрожжевой автолизат, кормобактерин, выпускаемые отечественной микробиологической промышленностью. В качестве источника углерода может быть использована техническая глюкоза.Штаммы ВНИИгенетика - 377 и - 380 по культурно-морфологическим признакам идентичны штамму 255 - 5.В отличие от известного штамма Вг. "агпгпоп 1 адепез 255 - 5 оба штамма обладают способностью к росту на синтетической среде в присутствии 8-азагуанина. Кроме того, штамм Вг. апппоп 1 адепез ВНИИгенетика - 377 отличается пониженной потребностью в аденине для биосинтеза кислоты, а штамм ВНИИгенетика - 380 накапливает меньшее количество побочных продуктов.Пример 1. Культуру штамма Вгеивас 1 ег 1 шп агпгпоп 1 адепез ВНИИ генетика -377 вы. ращивают в течение 24 ч при 28 С на агаризованной среде Хоттингера. Затем петлей высевают в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащие 100 мл посевной среды следующего состава, /о:Глюкоза 2,0Пептон 1,0 Дрожжевой экстракт 1,0 МА С 1 0,25 в водопроводной воде при рН 7,2, при давлении 0,8 атм в течение 30 мин. Посевной материал выращивают на качалке (220 - 240 об/мин) в течение 18 - 24 ч при 30 С. Полученный посевной материал передают в количестве 10 об. о/о в колбы указанной емкости, содержащие 30 мл ферментационной среды следующего состава, /о.Глюкоза 10,0 Кукурузный экстракт 4,0 КН гРО 1,0 КгНРО 1,0 МдЮ., 1,0 в водопроводной воде (рН среды до стерилизации доводят до 5,0 фосфорной кис О лотой, а после стерилизации - до 7,65 н.раствором КОН( при давлении 0,8 атм в течение 30 мин. После стерилизации к ферментационной среде добавляют раствор мочевины, стерилизуемый отдельно при 0,5 атм в течение 30 мин, до конечной концентрации Обо/о Ферментацию проводят на качалке (220 - 240 об/мин) при 30"С, После 144 ч ферментации в культуральной жидкости накапливается 10,3 г/л 5-инозиновой кислоты.Пример 2, Культура и условия выращивания посевного материала те же, что в примере 1. В составе ферментационной сре ды, приведенном в примере 1,4 о/о кукурузного экстракта заменяют на 0,7 о/о автолизата дрожжей и добавляют 30 мкг/л биотина.Режим стерилизации, засев ферментационных колб и условия ферментации как в примере 1. После 144 ч в культуральной жидкости образуется 8,0 г/л 5-инозиновой кислоты.Пример 3. Культуру штамма Вгеивас 1 епцгп апппоп)адепез ВНИИгенетика - 380 выращивают на агаризованной среде в таких з 5 же условиях, как в примере 1. Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации составлят 10,2 г/л.Пример 4, Культуру штамма Вг. апппоп 1 адепез ВНИИ-генетика - 380 выращивают на посевной среде следующего состава, о/о: 40 Глюкоза 2,0 Кукурузный экстракт 2,0 Ха С 0,25 рН 7,2, 45 при давлении 0,8 атм в течение 30 мин.Условия выращивания посевного материала, состав ферментационной среды и режим стерилизации такие же, как в примере 1. Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации составляет 9,9 г/л.50 Пример 5. Штамм - продуцент Вгеивас 1 ег 1 цт апппоп 1 адепез ВНИИгенетика 225 - 5. Состав сред, условия выращивания посевного материала и ферментации те же, что и в примере 1, Выход 5-инозиновой кислоты после 144 ч ферментации составляет 1 О г/л. По предлагаемому способу на ферментационной среде с технической глюкозой, фос фатами калия, солью магния, автолизатом615130 Составитель М. ЛаринаТехред О. Луговая Корректор А. Лакида Тираж 568 Подписное Редактор В. Блохина Заказ 3846/19 ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 дрожжей, кукурузным экстрактом с помощью адениннедостаточных штаммов ВНИИ- генетика 225 - 5, ВНИИгенетика - 377 и ВНИИгенетика - 380 Вгеу. апппоп 1 адепез получают в культуральной жидкости 8 - 10 г/л 5-инозиновой кислоты. В посевных средах используют техническую глюкозу, кормобактерии, кукурузный экстракт, дрожжевой экстракт, соль натрия, пептон. Совокупность предлагаемых признаков, заключающихся в применении новых штаммов-продуцентов ВНИИгенетика - 377 и - 380, способных осуществлять биосинтез 5-инозиновой кислоты на простых и доступных по составу средах, содержащих техническую глюкозу, дрожжевой автолизат, кукурузный экстракт, обеспечивает простой и дешевый способ получения 5-инозиновой кислоты. Формула изобретенияСпособ получения 5-инозиновой кислотыпутем глубинной ферментации продуцента Вгеивас 1 ег 1 шп апипоп 1 адепез на питательной среде, содержащей источник углерода, азота, необходимые минеральные соли, в присутствии источника ростовых факторов с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения и удешевления способа, в качестве продуцента 5-инозиновой кислоты используют штаммы Вгеивас 1 ег 1 цгп апппоп 1 адепез ВНИИгенетика - 377 и ВНИИгенетика - 380, а в качестве источника ростовых факторов - кукурузный экстракт или автолизат дрожжей.Источники информации, принятые во вни мание при экспертизе:1. Патент США Мо 3268415, кл. 195 в ,1966.2, Адг 1 сц 1 В Ы. с 1 тев, 1971, 35, 7, 1061.