Способ идентификации граммотрицательный бактерий

и ин О И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союэ Советскик Социалистических Республик(51) М. Кл.С 12 К 1/04 с присоединением заявки ла Гевуаарвтееааыа аеяатт6 ета Маатра 6 Юее иааа а 41 теЮа ещииЮ(45) Дата опубликования описания 200578(71) Заявитель Московский ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский институт гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГРАМ-ОТРИЦАТЕЛЬНЦКБАКТЕРИЙ 0,02-0,060,01-0,03 250,06-1,00,2-0,60,04-0,080,006-0,010,55-0,65 ЗО 3Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в медицине при исследованиях патологического материала.Известен способ идентификации грамотрицательных бактерий, например тифо-паратифозной группы, путем посева исследуемого материала на дифференцирующую среду, содержащую сахара, и видовой идентификации тифа-парати Фозной группы бактеций по ферментативным свойствам 1. Однако известный способ является трудоемким.Цель изобретения - упрощение способа. 15 Эта цель достигается тем, что посев осуществляют в оба слоя двуслойной среды, содержащей в первом слое следующие количества компонентов,2,:Двузамещенный фосфат.калия 0,05-0,15Одноэамещенный фосфат калияТиосульфат натрияГлюкозаИочевинаМетиленовый синийфеноловый красныйАгар Питательный бульон до 100 мла во втором слое (г):Двузамещенный фосфаткалия 0,05-0,15Однозамещенный Фосфаткалия 0,02-0,06Лимонно-аммиачноежелезо 0,01-0,03Лактоза 0,8-1,2Сахароза 0,8-1,2Феноловый красный 0,004-0,01Кристаллический Фиолетовый 0,0001-0,0003Агар 1,8-2,2Питательный бульон До 100 мл причем второй слой наслаивают на первый и скашивают.Нижний слой среды разливают по 2 мя в пробирки, охлаждают в вертикальном положении, стерильно наслаивают среду верхнего слоя, скашивают, оставив столбик высотой до 2 см.Основные группы знтеробактерий и некоторых смежных семейств идентифицируют одновременно в одной емкости по пяти признакам: ферментации лактозы н (или) сахароэы, ферментации глюкозы, продукции газа при ферментации глюкозы, образования сероводорода, уреазной активности, разной степени60883 цию сероводорода - по образованию черного кольца в столбике на границенижнего и верхнего слоев. Измененияцвета индикатора в комбинации с различными степенями редукции метиленового синего дают разные оттенки, придавая нижней части среды полихромныйхарактер.В таблице и выводах даны результатыиспытаний,Редукция метиленового синего Цвет нижнегостолбика реазная ктивность ерментациялюкозы Сероводород Соедний столбик Узкое черное кольцоШирокое черное кольцо Обширное почернениевсего столбика Нет почернения или слегка серый оттенок Скошенная поверхность Лактоза и (или сахароза Оранжевый с переходом в красный и малиновый цвет Желтый цвет Выше использованы следующие обозначения,отсутствие газа;+ слабое образование газа в виде единичных пузырьков в толще среды;более выраженное обРазование газа с крупными пустотами в тдлще сРеды;бурное газообразование с разрывами столбика.,Всего было идентифицировано 65 штаммов, из них шигелл Бойда 38, сальмонелл 6, эшерихий 3, гадоний 7, клебсиелл 5г .;5 протея 1, провиденции 1, цитробактер 3,На основании проведенных испытаний . установлено 100-ное совпадение всех признаков с классическим методом.Полученные результаты позволяют правильно и быстро определить 5 приз- ф наков энтеробактерий, экономить посуду и время.Предлагаемый способ не требует много времени, дефицитных реактивов, среда может быть приготовлена в любых 65 Формула изобретения редукции метиленового синего. Ферментацию углеводов определяютпо изменению цвета среды в кислую зону, уреазную активность - по изменению реакции нижнего слоя среды в щелочную зону, гаэообразование по образованию пузырьков газа в толще среды (при ферментации только глюкозы)и по разрывам столбика (при ферментации лактозы и (или сахарозы), продукЧерно-ФиолетовыйТемно-зеленыйЗеленыйСветло-зеленыйЖелтыйМалиновыйЛиловыйФиолетовый условиях, способ позволяет четко дифференцировать основные группы энтеробактерий и смежных семейств и можетбыть использован в больничных лабораториях при исследованиях экскретовбольных, а также при санитарно-бактериологических исследованиях. Способ идентификации грам-отрицательных бактерий путем посева исследуемого материала на дифференцивльЗаказ 3097/21 Тираж 568 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП фПатентф, г.ужгород, Ул.Проектная, 4 ную среду с последующей оценкой энзиматических свойств бактерий, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа, посев осуществляют в оба слоя двуслойной среды, содержащей в первом слое следующие количества8 компонентов, г: Двуэамещенный фосфаткалия0,05-0,15Однозамещенный фосфат.калия 0,02-0,06Тиосульфат натрия 0,01-0,03Глюкоза 0,06-1, 0Мочевина 0,2-0,6Метиленовый синий 0,04-0,08Феноловый красный 0,006-0,01Агар 0,55-0,65Питательный бульон До 100 мла во втором слое (г): Двуэамещенный фосфаткалия 0,05-0,15Одноэамещенный фосфаткалия 0,02-0,06Лимонно-аммиачноежелезо 0,01-0,03Лактоза Ог 8-1 р 2Сахароза 0,8-1,2Феноловый красный 0,004-0,01Кристаллический фиолетовый 0,0001-0,0003Агар 1,8-2,2Питательный бульон До 100 мл причем второй слой наслаивают на первый и скашивают.Источники информации ,принятые во внимание при экспертизе:1Аммарин И.И. Практическая медицинская микробиология, Медицина, 1966, с.125-126.