Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту ( )

О П И С А Н И Е 5 О 66 ЗЗИЗОБРЕТ ЕН ИЯ Союз Саветскик Социалистических Респтбчик) 1896306/30-1 аявки М Государственный квмите Совета Министров СССР ло делам изобретенийи открытий 3) УДК 620,186:582.Бюллетень Ме 10 Дата опубликования описания 1205.7 б 2) Авторы изобретения анецкий и Л, П. Поспелова 1) Заявитель 4) СПОСОБ ДИАГНОСТИРОВАНИЯ УСТОИЧИВОСТ СОРТООБРА 311 ОВ ХЛОПЧАТНИКА К ВИЛТУ ЧБ 1 Т 1 С 1 ШиИ ВАН 1.1 А 1. КЬВВ)иологиселек Изобретение относится к микроб ческим исследованиям и к области ции хлопчатника.Известен способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту 5 (Чег 11 с 111 шгп даЫ 1 а 1 К 1 еЬ.), при котором готовят свежие срезы проростков и просматривают их в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа.С целью ускорения процесса оценки сорто образцов хлопчатника к вилту по предлагаемому способу свежие срезы проростков заделывают в парафиновые блоки и флуорохромируют водным раствором акридинового оранжевого концентрацией 0,01 - 0,1% в течение 15 20 мин с последующей промывкой водой, а при микроскопировании производят подсчет микросклероциальных скоплений в сосудисто- волокнистых пучках ксилемы проростков.Способ позволяет диагностировать сортооб разцы хлопчатника на устойчивость к вилту как высокоустойчивые, так и низкоустойчивые.Способ осуществляют следующим образом.Проростки растений инфицируют чи той 25 культурой возбудителя в стебель. На едьмой - восьмой дни после заражения проростки срывают. Стебель разрезают на две части в месте заражения. На анализ берут часть стебля, находящуюся между местом зараже ния и листьями. На этон части стебля готовят препараты для выявления наличия микросклероция с помощью люминесцентного микросхопирования,Предварительно готовится парафиновая матрица (блок) в виде плитки путем заливки разогретого парафина в специальную форму.1-1 а верхней части плитки специальным нокцком делают бороздки глубиной 5 мм и ширлной 3 - 5 мм в зависимости от толщины стебля. Лучше работать одновременно с тремя парафиновыми блоками, Первый блок находится на просмотре, гторой на окраске, третий на промывке.В одном блоке размещается пять бороздок для пяти растений. Разогретую у основания парафиновую плитку прикрепляют к поверхности деревянного блокодержателя, имеющего размеры предметного стекла. В бороздки парафинового блока помещают нижнюю часть стебля до упора, срезают стебель лезвием и так до тех пор, пока весь стебель не будет разрезан на кусочки высотой 5 мм, расположенные поочередно друг возле друга в бороздке. В одну бороздку помещается стебель одного анализируемого растения, примерно, длиной 30 - 40 мм. После этого производят заливку бороздок разогретым парафином прп помощи парафиновой палочки и микроэлектронагревателя. После затвердеванпя параСреднее количество микросклероциальных скоплений иа один срез, шт. Средняя высотараспространениямикросклероциевк листьям, мм Сорт хлопчатника, устойчивость Популяция возбудителя в сосудах в ксилеме 1,50 22 4 29 2,31,0 ТашкентскаяАзербайджанскаяТашкентскаяАзербайджанскаяТашкентскаяАзербайджанскаяТашкентскаяАзербайджанская Ташкент 1 высокоустой- чивый 23,5 45 45 21 14 1)8 2,4 2,51,68 Ташкент 3 высокоустой- чивый 29,814 34 45 4,6 1,6 108-Ф восприимчивый 24 16 35 32,5 4,4 2,5 158-Ф восприимчивый фина блок устанавливают на столик санного микротома и несколькими срезами обновляют поверхность блока. Последний снимают с микротома, переворачивают рабочей поверхностью вниз и помещают в сосуд с водным раствором акридинового оранжевого 0,017 о-ой концентрации, Время флуорохромирования 20 мин. Флуорохромированные препараты промывают водопроводной водой 5 - 10 мин. Затем парафиновый блок устанавливают на столик люминесцентного микроскопа, например МЛ. Препараты просматривают в падающих УФ-лучах с максимумом возбуждения флуоресценции в области 360 нм, Наблюдение ведут на поверхности свежесрезанной ткани стебля при увеличении в 50 - 80 раз.Микросклероций возбудителя вилта не флуоресцирует и поэтому хорошо выделяется на фоне флуоресцирующей поверхности поперечного среза в виде черных точек и пятен.На срезе каждого кусочка стебля подсчитывается количество микросклероциальных скоплений в сосудах сосудисто-волокнистых пучков ксилемы и в межклетниках ксилемы. Учет проводится примерно на 6 - 10 срезах, что зависит от длины анализируемого участка стебля.Высчитывается среднее количество микрослероциальных скоплений на один срез, Показателем устойчивости сорта является среднее количество микросклероциальных скоплений на одном срезе, Чем меньше гриб образовал микросклероциев в сосудисто-проводящей системе растения, тем выше устойчивость сорта к определенной популяции гриба.Предлагаемый способ значительно экономит время (17 - 18 дней вместо 50 - 70 дней) Как видно из таблицы, у высокоустойчивых сортов количество микро оклер оциальных скоплений значительно меньше, чем у восприимчивых. Указанная зависимость отмечается при оценке сортов и гибридов хлопчатника на устойчивость к возбудителю вилта. Оценка на устойчивость проводится на седьмой, восьмой дни после заражения проростков. На приго товление препаратов и их анализ затрачивается 30 - 40 мин,Кроме того, значительно сокращаются рабочие площади на выращивание растений как за счет сокращения времени на завершение 10 опыта, так и за счет сокращения анализируемых растений. Испытание способа проводили на вновьрайонированных высокоустойчивых сортах 15 хлопчатника Ташкенти Ташкент, ина восприимчивых - 108-Ф и 153-Ф. Из-за отсутствия абсолютно устойчивого сорта для проверки способа использовали модельные растения других видов, на которых возбуди тель вилта не паразитировал, например растения огурца и фасоли. Опыты ставили на проростках растений, выращенных в теплице.Заражение проводили инокулиумом в стебель. Растения заражали черными штаммами 25 Ъ. с 1 аИ 1 а 1 Ташкентской (Янги-Юльскийрайон) и Азербайджанской популяций, полученных из лаборатории микологии ВИЗР. На анализ брали растения на восьмой день после заражения. В каждом варианте опыта было 30 взято по пять проростков. Опыты ставили втрехкратной повторности с разрывом во времени примерно через 10 - 15 дней. Количество микросклероциальных скоплений в сосудисто- проводящей системе проростков сортов хлоп чатника в зависимости от устойчивости сортаи агрессивности патогена представлены в табл, 1. на двух популяциях гриба, отличающихся различным географическим происхождением, 40 В табл. 2 приведены другие виды растений,абсолютно устойчивые к данным популяциям гриба.Сортхлопчатника,устойчивость Популяциявозбудителя в сосудах в ксилеме фасоль Огурец На других видах растений, абсолютно устойчивых к названным популяциям гриба, каких-либо симптомов поражения сосудов не обнаружено. Следовательно, у будущих абсолютно устойчивых сортов хлопчатника, по-видимому, должно быть полное отсутствие микросклероция в сосудисто-проводящей системе,формула изобретения заделывают в парафиновые блоки, флуорохромируют водным раствором акридинового оранжевого концентрацией 0,01 - 0,1 ев течение 20 мин с последующей промывкой водой и при микроскопировании производят подсчет микросклероциальных скоплений в сосудисто- волокнистых пучках ксилемы проростков.15 Составитель М, Дранишников Корректор Е Рожкова Редактор Г. Мозжечкова Текред Г. Андреева Заказ 999 9 Изд. М 1204 Тираж 549 Годппсное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 ТашкентскаяАзербайджанскаяТашкентскаяАзербайджанская Кроме этого, из таблицы видно, что та 1 пкентская популяция сильнее поражает сосудисто-проводящую систему растений, чем азербайджанская. Эти данные подтверждают возможность определения данным способом, как устойчивость сорта, так и агрессивность возбудителя вилта. Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту (Чег 11 с 11- 11 пгп даЬ 11 а 1 К 1 еЬ.), включающий приготовление свежих срезов проростков и просмотр их в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса оценки сортообразцов хлопчатника, свежие срезы проростков Средняя высота распространения микросклероциев к листьям, мм Среднее количество микросклероциальных скоплений на один срез, шт.