Способ получения витамина е

(22) Заявлено 23.05,72(21) 1783343/31-16с присоединением заявкийаудвувтввийй квиитвт СОФР ю ювао извврвтвнив н втврытий(72) Авторы изобретения Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М, В. Ломоносова(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНА Е Изобретение относится к области по-.лучения лекарственных препаратов.Известен способ получения витамина Е из растительного сырья, напримериз зерен пшеницы, заключающийся в том,что исходный материал экстрагируютсмесью хлороформ-метанол (2:1), омыляют хлороформную фракцию, экстрагируют целевой продукт изоктаном, экстрактвьщаривают, остаток растворяют в хлороформе и используя сефадекс 1.Н., выделяют активные фракции, Выход продуктанедостаточно высок - 0,009 мг/г от сухого веса сыры,Цель изобретения - повышение выхода 15витамина Е из сырья,Зго достигается тем, что в качествеисходного сырья используют культурымнкроорганизмов, например рода Ес 1 оОНж"Ьодозр 1 гйе или Войорвеос 1 опопов, 20выращенные при допащнтетьйом освещении в логарифмическои или стационарнойфаза роста светом спектрального диапазона 270-800 нм и интенсивностью не 2более 10 эрг/см,с в течение от16 х-910 с до 48 ч, и выделяют целевойпродукт после разрушения клеток черезинтервалы времени от 1 мин до 48 чпосле прекращения освещения.П р, и м е р 1. Пурпурные серныебактерии Ес 1 о 11 огйобовр 1 д вйоров 11 п 1"ко 11 выращивают на среде Ларсена,.имеющей следующий состат, вес,%:ЙН СЕ 0,1КН РО+ О,1вСЕ, О,О 5Са С 1., 0,01Васб 0,1Ма 5 9 н о 0,1МаНсоз О 4еСЕ ЬН,О О,ОО 3СН Соойа 0,2-ЭМикроэлементы 0,1 10Н о Культивирование ведут при 30 С рНсреды 8,0-8,2, в анаэробных условияхпри освещении светом от лампы накали0 55 П р и,м е р 2. Культуру бактерийЕС 101 Н 1 ог Нобо 5 РФЦ 5 ИОро 58011 ОМ 11выращивают по примеру 1 на стапионар 3 4.М)6 ванин 60 Вт интенсивностью4 22 10 эрг/см с. В конде логарифмической фазы (24-30 ч) роста бактерии, культивируемые в кварцевых сосудах емкостью 0,6 л, подвергают действию дополнительного света спектральной области 330-690 нм от лампы БУФв сочетании со светофильтром БСинтенсивностью 1050 эрг/см, с в те-. ченйе 12 ч. После воздействия дополнительного света бактерии на 2 ч помещают в исходные условия, после чего клетки осаждают на центрифуге, разрушают ультразвуком 20000 кГц в течение 4 мин. Дезинтегрированные клетки под 15 вергают экстракции смесью хлороформ - метаноо (2:1) в течение 20 мин на холоде 4 С на качалке. Бентрифугированием 4000 х 20 мин разделяют фракции. Нужную фракцию (в хлороформе) отби 20 рают и частично выпаривают под вакуумом при 30 С, К раствору добавляют пирогалпоп и КОН. Производят омыление, для чего раствор кипятят 3 мин, на дели- тельной воронке отделяют фракцию неомыляемых липидов, растворяя их в изооктане. Зту фракцию отделяют, выпаривают и растворяют в хлороформе. Пробу в объеме 0,1 мл запускают в хрома" тографическую колонку, наполненную Яе тобех Ь Н. Происходит разделе:. ние фракций неомыляемых липидов на отдельные компоненты. Отбирают нужную фракцию, содержащую витамин Е ( б -токоферол) и производят количественную оценку выхода продукта, В данном режиме выход витамина Е составляет 12 мг на 1 г сухого веса. Идентификацию витамина Е например с -токоферопа, проводят на основании данных тонкоспойной хроматографии, гепь-фильтрации и Уф-спектров поглощения. Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках 51 К 1 ог. ( Чехословакия) в хлороформе. Для о(.-токоферопа Д0,6. Гепьфильтрацию осуществляют на колонке (1.,0 х 60 см) с 5 ерЬойех .Н(Швеция), подвижная фаза - хлороформ. Величина объема выходатокоферола 30,5-31,0 мл. Спектр поглощения характеризуется одним четким максимумом при Д 295 нм. Во всех случаях используют синтетический Д. токоферол в качестве свидетеля. 78 4ной фазе (40-50 ч) роста, культуру освещают дополнительным светом спектральной области 330-360 нм в течение 24 ч интенсивностью 610 эрг/см; с, Через21 ч после прекращения воздействия дополнительным светом бактерии осаждают, дезинтегрируют по примеру 1, Аналогично проводят экстракцию липидов и разделение их на хроматогрефической колонке, В этих условиях выход витамина Е составляет 0,9 мг на 1 г сухого веса. Идентификаци ю витамина проводят по примеру 1.П р и м е р 3. Бактерии культивируют как указано в примере 1, Культуру освещают вспышкой дсполнательного света спектрального дн:назона1000 нм от лампы ИфП, Г;.ит-;ьсив 15 2постыл 10 эрг/см с а вчем,=:-510 с. Выделение фрак:,:,.:содержащейвитами Е проводят спуст.;. . О мин после освещения дополниГа пьяным светом, Вэтих условиях в.:д витамина Е составляет О, . ":;: .; сухого веса.а р 4, Бактерии культивиру,.о, по примеру 1, Освещение дополнительным светом проводят от импульсногогючочника "Корона 337 нм, дпи тепьность вспышки 510 с, интенсивность210 эрг/см с, частота следования вспышек100 Гц, длительность облучения 10 мин.Выделение фракции, содер кащей витамин Епроводят спустя 2 ч после, прекращенияосвещения дополнительным светом, Выходвитамина Е составляет 0,07 мг на 1 гсухого веса,П р и м е р. 5.Бактерии ВЬоаораеидощопозбР (штамм б ) вырашиваютнасредеЛарсена; описанной в примере 1 по методике, изложенной в этом же примере,Культуру бактерий освещают на логарифмической стадии роста светом спектрального состава 330-630 нм интенсивностью 10 эрг/см с в течение 20 ч, Выделение фракции, содержащей витамин Е,проводят спустя 4 ч после прекращениядополнительного освегцения. Выход витамина Е составляет 0,8 мг на 1 г сухого веса.формула изобретенияСпособ получения витамина Е экстракцией исходного сырья хлороформметанопьяой смесью и выделения из омыпенного экстракта хроматографиче кими метода4306 7 ми, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве исходного сырья используют культуры микроорганизмов, например рода Ьс 1 о 1 МогЬодовргае или КЬодорйеодовоьоб, выращенные при дополнительном освещении в логарифмической или стационарной фазе роста светом спектрального диапазона 270-800 нмьи интенсивностью не более 10 эргlсм с-9в течение от 10 с до 48 ч, и выделяют целевой продукт после разрушения клеток через интервалы времени от 1 мин до 48 ч после прекращения освещения, Составитель С. Шенева Редактор Л. Письман Техред Л. Алферова Корректор Ю. МакаренкоЗаказ 7273/2 Тираж 513 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва;Ж, Раушская наб,; д, 4/5 Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4