Способ получения протеолитических

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Со 1 аэ Саветсния Социалистичесних РеспублинП АТ ЕНТУ Завцсимы 1 тЗаявлено атента Лс 82065/28-13 1968 М. Кл. С 124 13/1 О юритет 10.Х 1.1967,51307/67,ВелцкобританиКомитет по делам зобретений и отнрыти при Совете Министров СССР(Дания) 1 ностраццая фирма Терапеутиск Л абораториум А/СК Заявитель НовоОЛУЧ ЕН ИЧ П РОТЕОЛ ИТИЧ ЕСКИНЫХ ПРЕПАРАТОВ, АКТИВНЪХВ ЩЕЛОЧНОЙ СРЕДЕ СПОСОБ ФЕРМЕ Изобретение относится к ферментцой промышленности и касается способа получения протеолитических ферментных препаратов, активных в щелочной среде.Известен способ получения протеолитических ферментов, активных в щелочной среде, культивированием штаммов Епоптор 11 га 1 ея на питательных средах, содержащих источники углерода, азота в присутствии минеральных солей при рН среды 5,0 - 9,0.Разработан способ получения протеолитцческих фермецтцых препаратов активных прц рН 7,5 - 11,0, что достигается использованием 1 птамма бактерий Васпз асаорт 1 цзСВ 8772 илиСТС 4553.Используемые в настоящем способе штаммы описаны в А. Веддером в голландском периодическом издании Апопе нап 1.еспкеплооо том 1, стр. 141 - 14 (1934 г.) ц включены в б-е издание Бергея Руководства цо определецшо бактерий. Штамм Вас 11 цз асаор)т 11 цзСТС 4553 хранится в Национальной коллекции штаммов бактериальцых культур в Лондоне, а штамм под шифромС 1 В 8772 в Национальной коллекции промышленных бактерий, находящейся в Эдинбурге, цо этот штамм по ошибке был назва 11 Васцз виЫ 11 з.Предлагаемый способ заключается в том, что штамм культивируют ца питательной среде, содержащеи источники углерода ц азота в легко усвацваемой микроорганизмами форме, при значениях рН среды 7,5 - 11,0 с последующим выделением протеолитических ферментов, продуцируемых внеклеточно.В качестве источников углерода используютуглеводы, например сахарозу, глюкозу, крахмал, зерна хлебных злаков, солод, рис, сорго ц т, д. Концентрация углеводов в питате,льной О среде может колебаться в широких пределах(25 - 1 - 5 оуо ), причем концентрация 8 - 10% является наиболее благоприятной (указанная концецтрацця углеводов рассчитывается в пересчете ца декстрозу). рН среды поддерживают на нужном уровне за счет добавления буферных веществ, в частности карбонатов, бцкарбоцатов ц фосфатов натрия, а также автоматическим регулированием добавления веществ основного характера.О Источники азота в питательной среде могутбыть неорганические цли органические, В качестве подходяц 1 цх неорганических источников азота можно использовать различные цитраты ц соли аммония, а из органических - соевую 5 муку, муку из хлопковых семян, арахцсовуюхуку казеиц, дрожжевые экстракты 1 мочевицу, альбумиц и т. д.Кроме источников углерода ц азота питательная среда должна содержать в незначи тельном количестве необходимые для ростаЗаказ 3033,8 Изд.1262 Тираж 406 ПодписноеЦПИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж.35, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2350266 Таблица 2 рН среды Штамм 11 12 10 7 7,5 33 100 100 100 75 71 70 85 85 80 54 50 44С 1 В 8772 67 79 100СТС 4553 72 35 Таблица 3 В присутствии пербората при температуре, С В отсутствии пербората при температуре,С41,5 54,7 49,2 Контрольньи опыт в отсутствии зизима 31,5 46,2 46,7 50 55 Активность штаммаСТС 4553 измерялась при постоянном рН 10,1 и температурах 25, 37, 50, 60, 66 и 75 С.Результаты представлены ниже.Температура, С 25 37 50 60 66 75 Акти шость 14 32 65 100 26 2 Фермсцтцые препараты используются в различных моющих составах, в препаратах для гидролиза белков, для удаления волосяного покрова, для мытья посуды, а также В качестве добавок в септические резервуары и установки для очистки вод.Порошок эцзима, полученный из штамма8772 по вышеописанному методу, используют в промывцых экспериментах, которые проводятся с помощью полосок испытательной ткани116, пропитанной ЕМРА, выпускаемой фирмой Айдгецоесише Материалпрюфуцгс уцд Ферзуханштальт, Сант Галлея, Швейцария, путем нанесения ца ткань крови, молока и сажи. Используемый цетергецт (поверхностцо-ак.тивцое вещество) имеет следующий состав, г:додецилбсцзолсульфоцат (50% -ный) 20иоцилфецол, 9, 5 ЕО 5триполифосфат натрия 30карбоцат цатрия оезводный 15СМС (45% -цый) 2сульфат натрия безводный 28Условия для промывания следующие;Жесткость воды, градус 10Отношение веса ткани к воде 1;20Время опыта, мин 30р 1-1 раствора около 10Концентрация детергецта, г/лпромывающего раствора 4,8Протеолитичсская активность, 0,04измеренная при рН 7,5, единицаЛцссгца ца литр промывающегораствора Температура во время промывация, С 60 и 70.Промывной процесс, который проводится при 60 С, осуществляется следующим образом.20 мл раствора, полученного из порошка фермента, имеющего температуру 20 С, рН 11,2 и протеолитическую активность 0,24 сл. Ацсца ца 1 л раствора, с помощью пипетки вносят в стакан емкостью 200 лл. Затем прибавлгпот 100 л раствора детергецта, рН которого равна 11,8 прц температуре68 С. Смесь переносят в колбу Эрлецмейсряс высоким горлышком емкостью 200 м,г и помец 1 яют в аппарат лля встряхцвяцпя. Тсзперятуру смеси, равную 60 С, поддерживают цаводяной бацс.В колбу помсщаот шесть полосок ткацп116, пропитанной ЕМРЛ общим весм10 3,0 г, встряхивают в тсчеццс всего временипро ывацп 5 (30 .син) . Зйтс иромВЯ 01 цпйраствор отделяют, охлаждают и измеряют рН,ЛЦЯЛЦТЦЧССКЦС ПОЛОСКЦ ЦСП 1 ТЯТСЛЬЦОЙ ТКЙППпрополаскцвают в горячей водопроводнойволе.Полоски затем подвергают измерсцшо цяспектрофотоз 1 етрях Бекмсца с целью Оценкистспсцц ослабления окраски прц ллццс волны460 мин. Пол Осляолецием Окраски понимаютколпчсстВО сВста, Отряженного От пспьтятел- цой полоски и выраженное в процентах от количества свста, отряжеццогс от образца окиси мапшя,В экспериментах, проводимых прц темпера 25 туре 70 С, раствср Летергецта имеет температуру 80 С.Были ТрОвелец соцтрол.ц 1 е экспериментыы, в которых вместо раствора фермента использовалась вода.30 Кроме того, все эксперименты проводят прциспользовании пербората (ХЯВОз 4 Н,О) ця1 л промывающего раствора.Результаты экспериментов представлены втабл. 3. Прц этом вслцчшя ремиссии представляет собой среднее значение, получеццос в результате цзмсрсццй рсмпссцц каждого цз шсстц образцов. Предмет цзобретсцц яСпособ получения протсолцтцческцх фермецтцых препаратов, актцвцых В щелочной среде, путем выращивания цх продуцецтов 60 ца питательной среде, содержащей источникиуглерода, азота в присутствии минеральных солей при щелочном зцачеццц рН среды, Отличаюисиися тем, что в качестве пролуцсцта используют штаммы оактерцй ВЯСИ 1 пэ 65 асаорЬ 11 пэС 1 В 8772 цлцСТС 4553,