Способ количественного определения я-парафиновых углеводородов в биоматериалв

ус,с,.экгг 1иРноям;. - ьА "тО П И С А Н И Е 332134ИЗОБРЕТЕНИЯ Сокгз Совегских Социалистических РеспубликЗависимое от авт. свпдетельстьаЗаявлено 21,Х 11,1966 (Ла 1122156/23-4 1, Кл, С 121 с 1(0 грггсоединениекг заявкиПриоритетОпубликовано 14,11.1972. Бюллетень10 Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР661.71 о,2.о 4,3.06 (088.8) Дат ликования описания 18.17.1972 Авторы зобрет Д. И, Кузнецов и Н. Л. Гришина нститут питания Академии Медицинских Наук СССРаявит СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯАРАФИНОВЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ В БИОМАТЕРИАЛЕ 1ится к области аналитинно к методам количести-парафиновых углеводо лах, пищевых продуктах ных и природных водах. Изобретение отно ческой химии, а им венного определения родов в биоматери нефтепродуктах, сто Известен способ количественного определения углеводородов в биоматериале путем экстрагирования их растворителем, упаривания выделенной фракции, хроматографического выделения углеводородной фракции на силикагеле вымыванием ее, например, четырех- хлористым углеродом и последующего определения количества углеводородов в упаренном фильтрате взвешиванием. Такой способ длителен; при использованигг его не происходит полного выделения н-парафинов, так как клеточный материал перед экстракцией растворителем не разрушается. Кроме того, применение взвешивания при количественном определении углеводородов приводит к потере при высушивании углеводородов до 5,0 + 0,9% за счет улетучивания низкомолекулярных углеводородов.С целью интенсификации процесса и повышения точности определения предложено биоматериал предварительно обрабатывать азотной кислотой и полученный хроматографическим разделением слой и-парафиновых углеводородов элюировать ацетоном. Количество и-пдрафпновых углеводородовможет быть определено нефелометрическим способом.П р и м е р. 1 - 10 г биологического образцапомещают в коническую колбу на 150 лгл с обратным воздушным холодильником (100 - 200(14 лглг) нд шлифе, затем добавляют 20 - 25 лгл 11,5 и. раствора азотной кислоты (уд.вес 1,35) и осторожно подогревают на водя 10 ной бане при периодическом перемешиваниисодержимого колбы вращением. В первые минуты наблюдается слабое вспенивагше, которое далее становится бурным. При появлении вспенпвания колбу снимают с водяной бани нд 15 5 - 10 лгии или даже охлаждают водой, а затемпродолжают нагревание до просветления раствора и прекращения бурного образования маленьких пузырьков на поверхности жидкости.Разрушение бпомдтериала продолжается 20 - 20 40 лгин.Затем раствор охлаждают, разбавляют водой в 2 - 3 разя и экстрагируют 25 лтл гексана (встряхиванпе в течение 3 лтин). Водную фазу отбрасывают, а экстракт промывают 25 лтл во 25 ды (встряхиванпе в течение 3 мин). Аликвотную часть промытого экстракта или весь экстракт (в зависимости от ожидаемого абсолютного содержания и-парафинов в навеске образца), предварительно упаренный до мини мального объема на роторном испаргителе всреднее из двух проб среднее из двух проб,проба1,яг проба 2, яг проба 2,мго лсг мг 0,9994 1,0020 0,99940,9995 12,412,612,413,80 1,24 1,25 124 1,30 1,0015 1,0042 1,0014 0,9963 12,5 12,6 12,5 13,0 12,4 12,5 12,4 13,0 15,9 15,4 15,8 15,4 15,9 15,4 158 15,8 15,9 15,4 15,8 15,6 1,59 1,54 1,58 1,56 1 25. 0 03 о 157.+О 02 ол,вакууме, создаваемом водоструйным насосом, наносят ца пластину (18 р,13 см) с силикагелем КСК, содержащим 5% очищенного гипса (пластину с силикагелем очищают предварительным пропусканием ССл или смеси диэтиловый эфир - петролейный эфир (1: 1) через слой адсорбепта), и производят распределение в СС 1, за фронтом распространения которого движутся только углеводороды. Проявленную в парах йода полосу углеводородов ца хроматограмме очерчивают, а силикагель с углеводородами после испарения йода соскаблцвают и смешивают с 5 - 10 мл ацетона, после чего слой органического растворителя отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр3 или 4, промывают сцликагель на фильтре ацетоном (2(2 мл), фильтрат переносят в мерную колбу ца 10 - 25 мл, доводят объем раствора до метки ацетоном и производят цефелометрцческое определение углеводородов по модцфццироваццому методу Лурье и Щербакова, предложенному для определения нефтепродуктов. В колбу объемом 10 - 15 лл, содержащую соответственно 6 цлн 15 мл раствора пищевого желатина (1 мг/мл) в 0,5%-цом растворе СНзСООН, вводят 0,5 или 1,0 мл ацетоцового испытуемого раствора и тем же раствором желатина доводят объем до метки. Далее содержимое колбы взбалтывают и через 15 мин производят измерение ца ФЭК (светофильтр На йдено углев одородов в дрожжах без добавкиТаким образом, в случае введения добавки - 0,3% смеси углеводордов в кормовые дрожжи, содержащие 1,25+ 0,03% углеводородов, при разрушении кормовых дрожжей азотной кислотой обнаруживают 1,57 + 0,02% углеводородов. Газохроматографическое сравнение состава смеси углеводородов до ц после нагревания с азотной кислотой дано в табл, 2.2, толщина кюветы 1 см). Концентрацию углеводородов находят по стандартной калибровочной кривой, построенной в коордипатах (100 в ) % - С, Калибровочную кривую полу чают для концентраций смеси углеводородов25, 50, 100, 200, 300, 400, 500 лткг, вводимых в ацетоцовом растворе в колбу на 25 лл в том же порядке, что и испытуемый раствор, причем содержание ацетона в каждом стандарте 10 должно быть одинаковым. Найденное цо стандартной калибровочной кривой значение концентрации углеводородов делят ца 0,8 для того, чтобы учесть потери прц 15 хроматографическом отделении углеводородов ц объективные ошибки метода нефелометрии. Чувствительность цефелометрического метода определения углеводородов 2 лкг/лл, 20 Продолжительность анализа по предлагаемому способу не больше 4 час. Нижний предел определения абсолютного количества н-парафинов в образце составляет 250 мкг, если вымытую с пластины смесь н-парафинов раст ворцть в 10 мл ацетона, отобрать 1 мл этогораствора и приготовить исследуемый раствор с желатцном в мерной колбе на 10 лл цли пцкцомстре. 30 Результаты определения количества я-парафинов в искусственных смесях с кормовыми дрожжами представлены в табл. 1,Найдено углеводородов в дрожжах с добавкой 03%Как видно из таблицы, при обработке азотной кислотой разрушения отдельных углево дородов це происходит. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает полное выделение н-парафиновых углеводородов из растительных и животных 40 клеток, является быстрым, эффективным и чувствительным, це требует специальной подготовки образца к анализу.332134 П р ед м ет изобретения Таблица 2 Состав смеси углеводородов, используемых в процессе биосинтеза,Углеводород до нагреванияСоставитель Л. Русанова Техред Е. Борисова Редактор 3. Горбунова Корректор О. Тюрина Заказ 93015 Изд.405 Тираж 443 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 С 1 С Сс С С 21 С Сз Изо-С Изо.С. Изо-Ср,3,2 98 14,5 15,5 15,2 12,3 10,7 7,8 5,8 3,7 1,6 2,0 8,7 14,3 15,6 15,4 12,4 11,17,4 4,2 0,9 Следы Возможные отклонения при газо- хроматографическом определении содержания индивидуальных у гл еводор одов,35,5 10,0 8,5 9,0 6,0 3,5 2,0 4,0 10,0 11,5 27,59,0 12,0 12,5 1. Способ количественного определенияиипарафиновых углеводородов в биоматериале путем экстрагирования их растворителем, упаривания выделенной фракции, хроматографического разделения четыреххлористым углеродом на силикагеле и последующего определения количества и-парафиновых углеводо родов известными способами, отличающийсятем, что, с целью интенсификации процесса и повышения точности определения, биоматериал предварительно обрабатывают азотной кислотой и полученный хроматографическим разде лением слой и-парафиновых углеводородовэлюируют ацетоном. 2. Способ ио и. 1, отличающийся тем, чтоколичество н-иарафиновых углеводородов оп ределяют нефелометрическим способом.