Способ определения иммуногенности противочумных вакцин

)5 С 1 ИЕ РЕТ ый государстве й противочу ный каченко, Е.ПГамлешко оых инфекций,ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(56) Проблемы особо о1972, М 6, с. 126 - 127. Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к способам определения эффективности иммунизации против чумы.Целью изобретения является ускорение способа оценки эффективности иммунизации против чумы, экономия экспериментальных животных и упрощение исследования (исключение необходимости работы с вирулентным штаммом чумного микроба).Это достигается определением соотношения субпопуляций перитонеальных макрофагов на 6 - 8 сутки после иммунизации экспериментальных животных подкожно в область верхней трети бедра.Для этой цели перитонеальные микрофдги Опытных и контрольных животных разделяют на отдельные субпопуляции методом адгезии в градиенте температур. Разделение осуществляют последовательно при четырех температурах (2, 10, 28 и 37 С соответственно), при которых,как показали наши предварительные исследования, происходит наиболее четкое разделение на субпопуляции, обладающие(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ ПРОТИВОЧУМНЫХ ВАКЦИН (57) Использование: медицинская микробиология. Сущность изобретения: на 6 - 8 сут после подкожной иммунизации перитонеальные макрофаги экспериментальных животных разделяют на субпопуляции методом адгезии в градиенте температур 2, 10, 28 и 37 С, определяют соотношение между субпопуляциями, полученными при 37 С и 2 С и по величине этого соотношения судят об эффективности иммунизации. 3 табл,раэнонаправленнои активностью при взаимодействии с чумным микробом. Монослои субпопуляций макрофагов, полученные при 2 С (А) и 37 С (Д) промывают культуральной средой, смывают с поверхности чашей, подсчитывают концентрацию клеток в камере Горяева и определяют соотношение между субпопуляциями Д и А, условно названные нами индексом распределения субпопуляций(ИРС), ИРС=Д/А, гдеДи А- концентрация клеток субпопуляций Д и А соответственно, В контроле ИРС 1, Чем эффективнее иммунизация, тем выше ИРС. В случае выживания всех животных ( = 1) ИРС15,П р и м е р 1. На 6 сутки после подкожной иммунизации морских свинок У. резус ЕУ в дозах 1 х 102 - 1 х 10 м.к, перитонеальные макрофаги опытных и контрольных животных наносили на чашки из полистирола, предварительно обработанные бычьим сывороточным альбумином(БСА) и после инкубации при 2 С в течение 30 мин суспензию неприлипших клеток переносили на другие чашки, которые затем инкубировали 30 мин при 10 С, Эту процедуру адгезии-смыва по1818348 20 Таблица 1 вторяли при температуре 28 и 37 С. Моно- слои субпопуляций макрофагов, полученные при 2 и 37 отмывали в 4-х порциях культуральной среды для удаления неприкрепившихся клеток, снимали с поверхности чашек резиновым шпателем, определяли концентрацию клеток в камере Горяева и подсчитывали индекс распределения субпопуляций макрофагов (ИРС) по формуле: ИРС - Д/А, гдв А и Д - субпопуляции макрофагов, выделенные при 2 и 37"С соответственно, Статистическую обработку результатов исследования проводили методом доверительных интервалов с помощью таблиц Стрелкова,Параллельно определяли иммуногенность препаратов по индексу эффективности иммунизации ): -Ь/и, где Ь - количество выживших.росле заражения, а п - общее число взятых в опыт животных. Полученные данные представлены в табл.1.Иэ табл.1 видно, что эффективность иммунизации, оцениваемая в опытах ин витро с помощью предлагаемого способа соответствует индексу эффективности иммунизации, определяемому в опытах заражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного мликроба. Изученная субкультура У, резбз ЕУ обеспечивает резистеитность экспериментальных животных к чуме в дозах 1 х 10 - 1 х 10 м.к,П риме р 2. Условия опыта те же, что в примере 1, Изменен только срок взятия макрофагов, Он составляет 7 суток Иммунизацию проводили антигеном Р В в дозах 6-400 мкг, Полученные данные представле.ны в табл.2.Иэ табл.2 видно, что эффективность иммунизации оцениваемая в опытах ии витро с помощью предлагаемого способа (ИРС), соответствует индексу эффективности иммунизации, определяемому в опытах заражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного микроба.Антигеи ВВ без адъюванта не защищает экспериментальных животных от чумы.П р и м е р 3, Условия опыта тв же, что в 5 примере 1. Изменен только срок взятия макрофагов. Он составляет 8 сут. Иммунизацию проводили антигеном ВВ в неполном адъювантв Фрейнда (НАФ). Полученные данные представлены в табл,З.1 О Иэ табл,3 видно, что эффективность иммунизации, оцениваемая в опытах ин витро с помощью предлагаемого способа (ИРС), соответствует индексу эффективности ммунизации, определяемому в опытах за ражения иммунизированных животных вирулентным штаммом чумного микроба, Антиген ВВ в НАФ обеспечивает резистеитность к чуме в дозах 25-100 мкг.Предлагаемый способ дает возможность быстро определить эффективность иммунизации и иммуногенность препаратов, применяемых для профилактики чумы,в 8 раз сокращает сроки исследования, в10 раз уменьшает количество испольэуе 2 б мых животных, исключает необходимостьработы с вирулентным штаммом чумногомикроба и содержания животных в заразноэкспериментальном отделе,Формула изобретения30 Способ определения иммуногенностипротивочумных вакцин путем подкожнойиммунизации исследуемой вакциной экспериментальных животных и оценкой результатов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью35 ускорения и упрощения способа, на 6 - 8-йсутки после иммунизации. выделяют перитонеальные макрофаги, разделяют их насубпопуляции адгезией в градиенте температур 2, 10, 28 и 37 ОС, определяют величину40 соотношения между субпопуляциями, полученными при 37 и 2 С, а иммуногениостьвакцины оценивают по величине этого соотношения,1818348 Т.аблица 2 Таблица 3 Составитель Л. Веркина ехред М.Моргентал Редакто ректо уль кий комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 10 эво нно-изда Заказ 1926 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5