Способ определения периодов гипертонической болезни

(ГОСПАТЕНТ СССР) ИЕИ ПИ ЕТ МУ СВИ К АВТО Финститут и Ук- шенствования Ю,И.Кулагин,в В сб а Гипертороз и коронар-, 988, с. 34-36.(21) 4893914/14 (22) 26.12,90 (46) 23,03.93. Бюл. 3 Ф 11 (71) Крымский медицинский рэинский институт усовер врачей (72) В.Н,Нескоромный, Н,С.Кузнецов и В,В.Николае (56) Кулагин Ю,И, и соавт. -ническая болезнь, атероскле ная недостаточность, Киев, 1 Изобретение относится к медицине, вчастности к кардиологии, преимущественной областью его использования являетсядиагностика различных периодов клинического течения гипертонической болезни(ГБ)- гипертонического криза и внекризовогопериода.Цель изобретения - упрощение способадиагностики различных клинических периодов течения ГБ за счет сокращения трудоемких операций путем определения у больных; ГБ активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов,Способ осуществляется следующим образом,Из локтевой вены больного в пробиркус раствором цитрата натрия отбирают 5 млкрови, центрифугируют 10 мин (4000об/мин) и затем отделяют эритромассу отплазмы, Эритромассу дважды промываютфизиологическим раствором (перемешиванием и центрифугированием по 5 мин при2000 об/мин), После второго центрифугирования надосадок сливается. Для определения активности каталазы 0,1 мл промытойэ ритромассы гемолизируют дистиллирован.-ной водой и получают гемолизат разведения(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕРИОДОВ ТЕЧЕНИЯ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ (57) Использование: медицина, диагностика периодов(криз, вне криза) течения гипертонической болезни (ГБ), Сущность изобретения: измеряют величину активности каталазы или супероксиддисмутазы эритроцитов, Способ позволяет упростить, ускорить и обезопасить процесс диагностики различных периодов течения ГБ, не сни)кая точность и надежность диагностики; т 1;2000. 0,1 мл полученного гемолиэата переносится в пробирку, доводится 0,05 М ТрисНС буфером рН 7,4 до 1 мл, прибавляется 2 Змл 0,03Н 202 и инкубируется в термостате при 25 С втечение 10 мин. После инкубации .вносится 2 мл 4 раствора молибдата аммония, Полученную пробу спектрофотометрируют при длине волны 410 нм, Экстинцию ойытной пробы сравнивают с экстинцией контрольной пробы, которую получабт та- в ким же образом, только 0,1 мл гемолизата р добавляется в пробирку после инкубации в термостате, непосредственно перед добавлением молибдата аммония, По разнице между экстинциями контрольной и опытной О проб судят о величине катализной активно сти. Расчеты производят, исходя из коэффи- ЧО циента миллимолярной экстинции перекиси водорода, и результаты выражают в мМ ) инактивированной Н 2021 л эритромассы за 1 секунду, Для определения активности СОД брали 0,1 мл отмытой эритромассы, как это рекомендовано Е,Е Дубининой и соавт, при подготовке эритроцитов для исследования СОД в системе феназинметасульфат- НАД н-нитросиний тетразолий (Лаб. дело, 1983, 10,30-33). Эти 0,1 мл отмытой эритро 1803869зы составила 165 мМ Н 202/л с, активностьСОД - 34%. Был сдален вывод о наличии убольной гипертонического криза,50 В дальнейшем комплексное клинико-.лабораторное исследование и наблюдение 55 за течением болезни подтвердили предположение о наличии у больной гипертонического криза.П р и м е р 2. Больной М., 47 лет, был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения АД с,массы гемолизируют и разбавляют 0,9 мл 5мМ трис-НС буфера рН 7,4), переносят вцентрифужную пробирку, добавляют 0,25мл этанола, 0,15 мл хлороформа и 0,6 г кристаллического КН 2 Р 04. Все это перемешивается стеклянной палочкой в течении 15мин, выдерживается в холодильнике при4 С 30 мин и центрифугируется при 5000аб/мин 15 мин, Затем отбирается надосадочная жидкость. В пробирку последовательно вносят 1,7 мл фосфатного буфера(0,15 М, рН 7,8), 2 мл раствора нитросинеготетразолия (0,01 г на 100 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8), 0,5 мл раствора феназинметасульфата (0,003 г на 150 мл 0,15 Мфосфатного буфера, рН 7,8). 0,1 мл надосадочной жидкости и 0,9 мл раствора НАД Н(0,01 г на 24 мл 0,15 М фосфатного буфера,рН 7,8), Содержимое перемешивали стеклянной палочкой, и пробирку помещали в 20темноту и термостатирвали при 25 С в течении 10 мин. После чего, сразу на фотоэлектроколориметре при длине волны 450 нмопределяли величину экстинции и сравнивали с экстинцией контрольной пробы, которую получали таким же образом, только впробирку не вносили надосадочную жидкость. 0 величине активности СОД судят поразнице экстинций контрольной и опытнойпроб и выражают в процентах от экстинции 30контрольной пробы),При рассмотрении изучаемых показателей в исследуемых группах было выявлено,что у 90 О больных 1 Б во время криза активность каталазы составила от 165 мМ 35Н 202/л.с до 235 мМ Н 202/л,с, тогда как вовнекризовом периоде у 907 ь больных этотпоказатель находился в пределах 240-314мМН 202/л.с, Активность СОД от 32яо447. отмечена у 90,5 больных ГБ во время 40криза, а от 47- до 64 оь - у 90,5% больных вовнекризовом периоде.П р и м е р 1, Больная Г 50 лет, былагоспитализирована в терапевтическое отде ление предварительным диагнозом; гипертоническая болезнь И стадии,При исследовании антиоксидантныхферментов обнаружено: активность. каталадиагнозом: гипертоническая болезнь И стадии,При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено; активность каталазы составила 183 мМ Н 202/л.с активность СОД - 32. На основании этих данных было высказано мнение о наличии у больного гипертонического криза,Детальное изучение анамнеза, клиниколабораторные данные, наблюдение за динамикой процесса и эффективностью терапии подтвердили данное предположение.П р и м е р 3. Больная К,; 48 лет, поступила в терапевтическое отделение в плановом порядке при отсутствии значительных жалоб с умеренно повышенным АД (170- 175/100-105 мм рт.ст.), Диагноз при поступлении; гипертоническая болезнь И,стадии,При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 221 мМ Н 202/л.с, активность СОД - 41. На основании этих данных был сделан вывод о наличии у больной гипертонического криза.Тщательное изучение анамнеза, эффективность терапии и динамика реабилитации больной подтвердили наличие у нее гипертонического криза.П р и м е р 4. Больная Л 43 года, поступила в терапевтическое отделение по поводу повышенного АД, Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь И стадии, криз.При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 235 мМ Н 202/л.с., активность СОД - 40, Полученные данные позволили сделать вывод о наличии у больной гипертонического криза.В дальнейшем данный клинический диагноз изменен не был,П р и м е р 5, Больной С., 50 лет, был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения АД, Диагноз при поступлении; гипертоническая болезнь И стадии, криз.При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 230 мМ Н 202/л с, активность СОД - 4. Был сделан вывод о наличии у больного гипертонического криза.Дополнительное изучение анамнеза, наблюдение эа динамикой процесса, эффективностью терапии и реабилитации подтвердили первоначальный диагноз,П р и м е р 6, Больной В., 50 лет, поступил в терапевтическое отделение с резким повышением АД на фоне эмоционального стресса, Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь И стадии, криз,1803869 5 10 15 20 25 Формула изобретения.Способ определения периодов гипертонической болезни, включающий отбор венозной крови, получение эритроцитов и последующий их бихимический анализ, о т 30 35 л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения трудоемких операций, проводят гемолиз эритроцитов, в гемопизате определяют активность катэлазы или супероксиддисмутазы и при активно сти кэтапазы 165 - 235 ммопей НгОг/л х с или активности супероксиддисмутазы 32 - 44% ступени ингибирования восстановления нитросинего тетразолиевого определяют наличие гипертонического криза, а при активности кэталазы 240-313 ммолей НгОг/л с или активности супероксиддисмутазы 4764% определяют внекризовый период ги.пертонической болезни. Составитель В,НескоромныйТехред М.Моргентал Корректор А. Козориз Редатор А.Козлова Заказ 1055 Тираж. Подписное ВНИИПИ Государственного комитетапо изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издэтельский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 При исследовании антиоксидантныхферментов обнаружено; активность каталазы составила 240 мМ НгОг/л.сактивностьСОД - 477 ь, НА основании этих данных былсделан вывод об отсутствии у больного гипертонического криза,В дальнейшем динамика состояниябольного, быстрая нормализация АД приподдерживающей терапии позволили отказаться от предварительного диагноза наличия у больного гипертонического криза.П р и м е р 7. Больная Ф., 45 лет, обследована амбулаторно по поводу повышения АД.Диагноз; гипертоническая болезньстадии,При исследовании энтиоксидантныхферментов обнаружено; активность каталазы составила 259 мМ НгОг/л с, активностьСОД - 52%. Был сделан вывод об отсутствииу больной гипертонического криза.В дальнейшем при динамическом наблюдении данное предположение былоподтверждено.П р и м е р 8; Больной С 53 года, поступилв терапевтическое отделение с диагнозом:гипертоническая болезньстадии, криз,При исследовании антиоксидантныхферментов обнаружено: активность каталазы Составила 314 мМ НгОг/л с, активностьСОД - 60%. На основании этих данных быловысказано мнение об отсутствии у больного, гипертонического криза.Ц дальнейшем наблюдение за больным, быстрая нормализация его состоянияс переходом на поддерживающую гипотензивную терапию, э также выписка больногона 8-й день подтвердили предположение оботсутствии гипертонического криза у данного больного.П р и м е р 9. Больная Н., 40 лет, находится на диспансерном учете по поводу гипертонической болезнистадии в течении4 лет. При профилактическом осмотре обследована.Активность каталазы составила 297 мМНгОг/л с, активность СОД - 64%. 4Отсутствие гипертонического криза истабильное течение гипертонической болезни было подтвержено. П р и м е р 10, У служащей Е 37 лет, при проведении профосмотра какой-либо патологии обнаружено не было.Исследование антиоксидантных ферментов показало; активность катэлазы составила 322 мМ НгОг/л с, активность СОД - 67%.Таким образом было подтверждено, что обследуемая практически здорова.Предлагаемый способ диагностики различных периодов клинического течения ГБ позволяет сократить (по сравнению с прототипом) время проведения методики в 11,3 раза при определении активности каталэзы и - В 3,8 раза при определении активности СОД. Значительно сокращается количество трудоемких операций, таких как получение мембран, экстрагирование липидов. Кроме того, устраняется влияние токсичных веществ (гептан, серная кислота по Савэлю) и необходимость дополнительных рассчетов (вычисление ди агностического коэффициента). Разработанный способ является простым, надежным и доступным для обычной клиникобиохимической лаборатории, при этом точность диагностики различных периодов клинического течения ГБ в сравнении с известным способом не снижается.