Способ выделения супероксиддисмутазы

1 (1 З) А 1 дерации знакам ИЗОБ льству ТЕНИЯ ОО О Комитет Российской Ф по патентам и тоаарным (12) ОПИСАНИЕКаВТОРСКОМУ СВИД 1(71) Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков медицинского назначения(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ(57) Использование; биотехнология и медицинская промышленность. Рекомендован в настоящее время за рубежом для лечения патологии суставов, дисплозии легких; Сущность изобретения; выделение супероксиддисмутазы из биомассы продуцента(19) 80 (11) 18 (51) 6 С 12 Х 9/О ЗасЬаговусез сегеезае, осуществляют разрушение клеток замораживанием - оттаиванием, экстракцией 0,04 - 0,06 моль/л калий фосфатным буферным раствором, рН 7,7 - 7,9 при соотношении влажного мнцелия и экстрагента 1:3, при 7 - 10 С в те- Оф чение 20 - 24 ч, перед удалением О отработанной клеточной массы суспензию подкисляют до рН 4,4, после чего удаление проводят центрифугированием, йонооб- Оф менную хроматографию суп ернатанта ь, проводят на карбоксильном катноните КМТ с последующим концентрированием элюатов методом ультрафильтрации, гель-филь= трацию полученнОго концентрата проводят на сефадексе 0-75 с последующей лиофилизацией целевого продукта. 1 таблЬф1800841 3 Экстракция Пример Концентрация буферного раствора, моль/л рН бу- ферного раство- ра Соотно.- шение влажного мицелия и экстра- гента Темпе- ратура, ОС Время экстркции,ч, 0,005 0,05 0,1 7,8 1:3 1:3 1;3 7 8 10 23 22 24 100 120 120 7,7 7,9 венных показателейСнижение активностиТо же 7,5 100 100 90 120 0,04 0,06 0,05 0,048 7 10 8 1:3 1:3 1.2 1:4 23 24 22 21 8,3 1 й т 7,7 7,9 20 0,04 7,8 1;3100 9 10 11 0,06 1;3 1:3 1:3 15710 23 16 30 90 80 120 7,7 0,05 7,8 0,06 Изобретение относится к микробиологической и медицинской отраслях промышленности, в частности к способам выделения фермента медицинского назначения, который рекомендован в настоящее время за рубежом для лечения патологии суставов, дисплозйи легких и др.Целью. изобретения является упрощение способа вытделеййя СОД.П р им,е,р, Полученную влажную био.- массу продуцента Яаспагвпусез сегеч 1 з ае замораживали при -24 С и размораживали в комнатных условиях, после чего экстрагировали 0,05 моль/л калийфосфатным буферным раствором, рН 7,8, в течение 24 ч при 7 С. По окончании процесса суспензию подкисляли концентрированной уксусной кислотой до рН 4,4, Снижение рН ведет к инактивации фермента, при рН более 4,4 снижается выход фермента на стадии ионообменной хроматографии, Отработанную клеточную биомассу удаляли центрифугиро 4ванием. Получали экстракт, который в ральнейшем последовательно очищали сначалас помощью ионообменной хроматографиина КМТ, затем гельфипьтрацией на сефа 5 дексе 6-75. Полученные активные фракциилиофилизировали,Исследования по выбору оптимальныхусловий выделения представлены в таблице. Как видно из таблицы, несоблюдение10 хотя быодного из условий способа по изобретению ведет либо к уменьшению активности в экстракте. либо не увеличиваетсясодержание целевого продукта, но увеличивается продолжительность технологическо 15 го процесса,Использование способа по изобретению позволит. исключить использование органического растворителя, сократитьколичество стадий выделения, повысить20 производительность труда за счет повышения скорости процесса на стадии ионообменной хроматографии. Увеличение расходных норм сырья без улучшения качестУвеличение объемов реакционной массы без улучшения качественных показателей Сложность поддержания температуры,снижение активностиСнижение активностиТоже .Удлинение технологическогопроцесса без улучшения качественныхпоказателей1800841 Составитель Г. КазанинаТехред М.Моргентал Корректор Н, Король Редактор Л, Волкова Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж, Рэушская нвб., 4/б Заказ 82 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул, Гагарина, 101 1 Формула изобретенияСПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ, включающйй разрушение клеток продуцента Заспагогпусез 5 сегечзаве, зкстрэкцию и центрифугирование, ультрафильтрацию, ионообменнуюхроматографию полученного супернатанта, гель-фильтрацию и лиофильную суш ку целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, разрушение клеток проводят замораживанием - оттаиванием, зкстракцию осуществляют 0,01 - 0,06 моль/л калийфосфатным буферным раствором с рН 7,71,9 при соотношении 1: 3 и температуре 7 - 10 С в течение 20 - 24 ч, полученную суспензию подкисляют до рН 4,4 и центрифугируют, после чего проводят ионообменную хроматографию на карбоксильном катионите КМТ, полученный злюат подвергают ультрафильтрации, а затем проводят гель-фильтрацию на сефадексе 6 -75,