Способ ингибирования активности фермента аскорбатоксидазы в проростках ячменя

(51) ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР. -:,;"-ТЕВР.,Г"ф ЗОБ РЕТ ЕЛЪСТ АВТОРСКОМУ АНИЯ АКТИВРБАТОКСИДА-. Яогия растений, ь изобретения; орбатоксидазы алицилальдок- М, а введение ем погружения тора, 4 табл.(71) Калининградский государственный университет(56) Гавриленко В,ФЛадыгина М,Е., Хандобина Л.М, Большой практикум по физиологирастений. М.:Изд-во, Высшая школа, 1975, с254.(54) СПОСОБ ИНГИБИРОВ НОСТИ ФЕРМЕНТА АСКО ЗЫ В ПРОРОСТКАХ ЯЧМЕН (57) Использование, фиэиол биохимия растений. Сущност в качестве ингибитора аск используют водный раствор с сима в концентрации 5 х 10 ингибитора осуществляют пут среза листа в раствор ингиби Изобретение относится к области физи- Поставленная цель достигается тем, что ологии растения, в частности к регуляции срезанныелистья проростков ячменя помеобмена веществ, . щаются срезом в раствор салицилальдоксиСуществует способ регуляции активно- ма (С 7 НФО 2) в концентрации 5 10 4 М, сти ферментов с использованием ингибито- Данная концентрация обладает максимальров. В частности,для регуляцииактивности ным ингибирующим эффектом по сравнеаскорбатоксидазы широко применяется ди- нию с другими исследованными - 5 10 5 и этилдитиокарбамат, 5 10 М. При всасывании листьями раство- фОднако данный способ имеет следую- ра вместе с водой в лист поступает салици щие недостатки; лальдоксим, которы й вызывает (Оа) для введения ингибитора в ткань лис- ингибирование активности аскорбатоксида- О та используется метод вакууминфильтра- зы, С) ции, требующий специального Заявляемый способ соответствует криоборудования для создания вакуума; терию изобретения "новизна", так как вперб) ингибитор готовится на буферном вые для ингибирования активности растворе,чтотребуетдополнительныхреак- фермента достигается не за счет введения тивовдляприготовлениябуфераиусложня- ингибитора в ткань листа методом вакууетпроцедуруприготовления ингибитора. минфильтрации, а путем помещения сре- азанных листьев в растворЦелью предложенного способа являет- салицилальдоксима срезанной частью, Это ся регуляция активности аскорбатоксидазы позволяет заключить, что заявляемый спопутем введения в растения ингибитора фер- соб соответствует критерию "существенные мента, салицилальдоксима, при этом упро- отличия". щена процедура введения ингибитора в Ингибирование активности аскорбатокткань листа и сокращено время приготовле- сидазы в 7-дневных проростках ячменя ния ингибитора. 5 10 М раствором салицилальдоксима в1786070 Таблица 1 Влияние салицилальдоксима на активность аскорбатоксидазы проростков ячменя, находящихся в темноте темноте и на свету демонстрируют данные опытов (табл,1 и 2),Опыт 1. Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима в темноту (табл,1), В присутствии ингибитора через 1 ч произошло снижение активности аскорбатоксидазы,и этот эффект сохранялся и при суточной экспозиции.Опыт 2, Срезанные листья проростков ячменя помещались на 1 ч или на 24 ч в раствор салицилальдоксима на свет (табл,2). В присутствии ингибитора активность аскорбатоксидазы снизилась на 52 и при часовой и при суточной экспозиции. Следует отметить, что величина ингибирования активности аскорбатоксидазы салицилальдоксима была выше на свету, чем в темноте,В табл,З приведены данные сравнительной эффективности ингибиторного действия салицилальдоксима и диэтилкарбомата натрия, в концентрации 0,005 М, которая обычно употребляется,Укаэанная концентрация дизтилдитиокарбомата натрия оказала меньшее ингибирующее действие на активность аскорбатоксидазы, чем салицилальдоксим (5 10 М).Следует отметить, что салицилальдоксим (5 10 М) в отдельных опытах проявлял большое ингибирующее действие, доходящее до полного блокирования фермента (табл.4). Из представленных данных видно, что салицилальдоксим в концентрации 510 М на 10000 ингибировал аскорбатоксидазу зеленых и этиолированных проростков и только у альбиносов, отличающихся высокой активностью фермента, ингибирование бы ло не полным, но максимальным из исследованных концентраций,Таким образом, диэтилдитиокарбоматнатрия для ингибирования аскорбатоксида 5 зы рекомендуется вводить в ткань листа методом вакууминфильтрации, требующимсоздания вакуума, в то время как ингибирующее действие салицилальдоксима проявляется и при погружении срезанных листьев10 в раствор, т.е, используется более простая именее длительная процедура.Диэтилдитиокарбамат натрия готовитсяна буферном растворе, салицилальдоксим -на воде, Предварительное приготовление15 буферного раствора также требует дополнительной затраты времени. Следовательно,на приготовление и использование ингибитора по способу-прототипу затрачиваетсязначительно большее количество времени,20 чем по предложенному способу,Сравнительные данные об эффективности ингибиторного действия салицилальдоксима и диэтилдитиокарбамата натрия,говорящие о большей активности салици 25 лальдоксима в ингибировании фермента ас-,корбатоксидазы.Формула изобретения Способ ингибирования активности фер- ЗО мента аскорбатоксидазы в проростках ячменя путем введения водного .раствора ингибитора вткань проростка, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью упрощения и повышения эффективности способа, в каче стве ингибитора используют водный растводо салицилальдоксима в концентрации 5 ф с 10 М, а введение ингибитора осуществляют путем погружения среза листа в раствор ингибитора.401786070Таблица 2Влияние салицилальдоксима на активность аскорбатоксидазыпроростков ячменя, находящихся на свету, Интенсивность света30 тыс,эрг, смс 1саблица 3ТВлияние салицилальдоксима и диэтилдитокарбомата натрия на активность аскоррбатоксидазы проростков ячменя, находящихся на свету.Экспозиция 1 час, Интенсивность света 30 тыс, эрг, см с 1,абВлияние салицилальдоксима на активность листьев чменя, различающихся по содержанию пигментов