Способ криоконсервирования эритроцитов

)5 А 01 Ы ологии и кри а и М,И,Шраго иональная со- низкотемперав растворах дис, канд,мед ВИРОВАНИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт проблем криобомедицины АН УССР(56) Бредихина Л,П. Функцхранность эритроцитов притурном консервированииполиэтиленоксида. - Автор,наук, Харьков, 1983, с,16,(54) СПОСОБ КРИОКОНСЕЭРИТРОЦИТОВ Изобретение относится к области криобиологии,Наиболее близким к заявляемому является способ криоконсервирования эритроцитов, согласно которому к эритроцитам добавляют 30%-ный криопротектор ПЭО до конечной концентрации 15%, а затем замораживают путем погружения в жидкий азот. Отогревают на водяной бане (Бродихина Л,П. - Функциональная сохранность эритроцитов при низкотемпературном консервировании в оастворах полиэтиленоксида. Авт.дисс, 1983),Этот способ не обеспечивает достаточно высокой сохранности эритроцитов, что обусловлено перепадом осмотических давлений между внутри - и внеклеточной средой при добавлении довольно высокой концентрации криопротектора.Целью изобретения является повышение сохранности функциональной полноценности эритроцитов.П р и м е р 1, К 90 мл эритромассы, полученной путем спонтанного осаждения из крови донора, сначала добавляли тонкойЫ 2 1766345 А 1(57) Изобретение относится к криобилогии, Цель изобретения - повышение функциональной полноценности сохранности криоконсервированных эритроцитов. К зритромассе добавляют криопротектор полиэтиленоксид молекулярной массы 1500 в два этапа: сначала в концентрации 10 - 15%, затем 35 - 40%, Конечная концентрация 15%. После этого клетки заморажива:от до -196 С путем погружения в жидкий азот, Отогрев осуществляют на водяно" бане при45 оС струей 30 мл 10%-ного, а затем 60 мл 40%- ного раствора ПЭО, растворы ПЭО готовили на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия. Полученную зритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане при температуре 42 - 45 С. Сохранность эритроцитов определяли по гемолизу и осмотической хрупкости, Резул ьтаты представлены втаблице,П р и м е р 2. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 22 мл 15%-ного, а затем 68 мл 35%-ного раствора ПЭО, Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и замораживали путем погружения в жидкий азот, Отогрев осуществляли на водяной бане (42 - 45 С). Результаты представлены в таблице,П р и м е р 3. К 90 мл эритромассы добавляли тонкой струей сначала 15 мл 5%- наго, а затем 75 мл 35%-ного раствора ПЭО, Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и заморажива1766345 ретения вирования эритробавление к эритрополиэтиленоксида концентрации 15% иванием, о т л и ч ас целью повышения льной полноценно- ение криопротектоэтапа - сначала в затем 35 - 40%. ототипом сохран - 30%.функциональной итов после криодится расчет про- ле аблиц ли путем погружения в жидкий азот. Отогрев осуществляли на водяной бане при 42 - 45 С. Результаты представлены в таблице.П р и м е р 4. К 90 мл эритромассы добавляли сначала 45 мл 20%-ного, а затем 5 45 мл 40%-ного раствора ПЭО, Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и-замораживали путем погружения в"жидкий азот, Отогрев осуще- стЪлялиЪВводяной бане при 42 - 45 С. 10 Результатыпредставлены в таблице.П р и м:е р 5, К 90 мл эритромассы добавляли по каплям 90 мл 30%-ного раствора ПЭО. Полученную эритровзвесь переливали в гофрированный контейнер и 15 замораживали путем погружения в жидкий азот, Отогревали на водяной бане при 42 - 45 С. Результаты представлены в таблице,Из таблицы следует, что высокая сохранность эритроцитов отмечается при до бавлении криопротектора ПЭОна первом этапе в концентрации 10 - 15%, на втором - 35 - 40%.При добавлении ПЭО в концентрациях. выше или ниже заявляемых наблюдается 25 снижение сохранности эритроцитов. При введении на 1 этапе ПЭО в концентрации выше 40% происходит эгрегация эритроцитов, в связи с чем эту концентрацию не исследовали. 30 По сравнению с и ность увеличивается наДля подтверждени полноценности эритро консервирования прив цента гемолиза по форм Процент гемолиза криоконсервированных эритроцитов в зависимости от способа добавления криопротектораи = 5 представлен в таблицеГематокритная величина эритромассы до смешивания с криопротектором составляла от 0,7 до 0,8, т.к. получалась путем спонтанного осаждения. РН эритромассы был в пределах 7,05 - 7,2.Изменение криоскопическим методом осмолярности надстоя после смешивания с криопротектором не дает достоверных результатов, Это связано с высокой концентрацией полимера, при которой раствор не кристаллизуется, а переходит в аморфное состояние, Определить осмотичность удается лишь в разбавленных растворах полимеров,Осмотичность 5%-ного раствора ПЭО, приготовленного на основе 2%-ного раствора среднего цитрата натрия. составляет 100 мосм/л при определении криоскопическим методом на осмометре ОМКА 1 Ц,Формула изоб Способ криоконсер цитов, включающий до массе криопротектора мол, м, 1500 до конечной с последующим замораж ю щ и й с я тем, что, сохранности функциона сти эритроцитов, добавл ра осуществляют в два концентрации 10 - 15%1766345 Таблица 2 Кулака орректор Н.Корол ед Тираж Подписноеарственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 изводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина аказ 3491 ВНИИП Составит Техред М Л.Конюховаргентал