Способ определения биологической активности метаболитов гриба тriсноdеrма lignоruм

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 51)я А 01 К 63 ОП альского от ев и Л.И,Ан. 27,%6, р. рода Триходерма ктике, - Алма-Ата; ГО СУДА Р СТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОУУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Институт физиологииления АН СССР(56) Тетгайебгопецегз, 19735-738.Сейкетов Г,Ш, Грибыи их испОльзование В праНаука, 1982, 248 с. Изобретение относится к области изучения биологически активных веществ микроорганизмов и биохимии,Известен способ определения токсических веществ АзрегцОз Ьгп 9 а 1 оз, включающий культивирование гриба, экстракцию и концентрацию экстракта, разделение веществ тонкослойной хроматографией на пластинах МегсК Гв системе 57; метанол в метиленхлориде.Недостатки известного способа заключаются в том, что он не использовался для определения биологической активности метаболитов с использованием операции биоавтографии;он не пригоден для проведения биоавтографии в связи с тем, что система разделения 5;4 метанол в метиленхлориде на других аналогичных типах пластинок не делит метаболиты, разделяемые ею на пластинках МегсМ 60 Р; а пластинки МегсМ 60 Рне пригодны для биоавтографии вследствие того, что они обладают собственной антибиотической активностью,Наиболее близким по технической сущности является способ определения биоло,З 2 1755758(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕ 1-и. БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МЕТАБОЛИТОВ ГРИБА Тй СНООЕВМАОКОВАМ (57) Использование: биохимия, определение биологической активности грибов. Сущность изобретения; проводят культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости хлороформом, разделение метаболитов осуществляют на пластинах зВЛО в системе 1-280 этанола в хлороформе, биоавтографию осуществляют на тех же пластинах, 1 табл, гической активности метаболитов з ТгСЬодегеа 9 погат, предложенный, включающий культивирование гриба, экстракцию и концентрацию экстракта, разделение веществ бумажной хроматографией в 10 системах растворителей, предло- Б женных Всесоюзным институтом антибиотиков с последующей биоавтографией хроматограмм на Васцз зпЬОз.Недостатком известного способа является низкая эффективность каждой из предложенных систем, так как ни в одной из них не удалось удовлетворительно разделить индивидуальные вещества способом, большое количество операций, в сочетании с их низкой эффективностью, а от этого большая длительность процесса; ограниченность применения способа, определяемая более низкой чувствительностью бумажной хроматографии по сравнению с тонкослойной хроматографией,Целью заявляемого изобретения является повышение эффективности способа.Поставленная цель достигается тем, что по способу, вкл.очающему культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости1755758 0,22 0,27 0,17 0,37 0,42 125 5 хлороформом, концентрацию экстракта,разделение и биоавтографию метаболитов,разделение ведут методом тонкослойнойхроматографии на пластинках 311 ц 1 о в системе 1 - 28% этанола в хлороформе, биоавтографию метаболитов осуществляют сиспользованием пластинок 5 Ицто 1,Способ осуществляют следующим образом, -,;.фГриб Тг 1 сЬодегва Иопогцгп культивируют глубинным способом.в течение 5 суток.Культуральную жидкость (КЖ) фильтруют изкстрагируют хлороформом трижды (100,400 и 400 мм хлороформа на каждый литрфильтрата), Экстракт концентрируют,упари- ванием под вакуумом, Индивидуальные вещества разделяют тонкослойнойхроматографией (ТСХ),П р и м е р 1. Для экспеоиментальнойпроверки заявляемого соотношения компоНентов смеси разделения концентрат Культуральной жидкости разгоняют напластинках ЯИц 1 о 1 Оl-254 в заявляемой смеси.оотношения компонентов смеси и результаты указаны в таблице.Вывод: удовлетворительное разделение и выделение индивидуальных компонентов можно проводить при составе смеси0 - 28% этанола в хлороформе, 30р и м е р 2, Для экспериментальной.проверки заявляемого способа концентратхлороформного экстракта КЖ разгоняют всистеме 5% этанола в хлороформе на пластинках ЮцХо ОЧ, Пластинки; разрезают вдоль для грубой проверкибиологической активности; из пластиноквырезают полоски, соответствующие выявленным индивидуальным веществам для более тонкой проверки; пластинки, 40. полученные по пп, 1 и 2, помещают на Чапек-агар с тест-организмом (Бас 1 цззцЬОИз), Результаты четко проявлялись после 2 суток выращивания в термостате притемпературе 28" С, 45Выводьь Заявляемый способ приодендля проверки веществ хлороформного экстракта КЖ Тг 1 сЬос 3 еггпа Иопогцгп на биологическую активность, Пластинки ЯИц 1 о ОЧ не обладают собственной антибиотической активностью. Система 5% этанола в хлороформе (как показала биоавтография) разделила все наличные биологически активные вещества хлороформного экстракта,П р и м е. р 3, Для экспериментальной проверки соотношения компонентов смеси, предложенной австралийскими авторами (5% этанола в метиленхлориде), вещества хлороформного экстракта наносили на пластинки Мегс 1 60 Ри ЯИИо ОЧ. Разделения веществ на пластинках Яцко не произошло,В ы вод. Предложенная австралийскими авторами смесь для разделения не работает на пластинках ЯИЦ ОЧ, не обладающих собственной биологической активностью.П р и м е р 4. Для проверки пригодности способа разделения, предложенного австралийскими авторами для биоавтографии,. пластинки Мегс 1 60 Р, полученные, как в примере 3, наносили на среду с Вас,зцЬОИз, как в примере 2, Результаты калибронались по стрептомицину, Обнаружено, что и в контроле пластинки Мегс 1 60 Робладают собственной биологической (антибиотической) активностью,Вывод, Пластинки Мегс 1 60 Робладают собственной антибиотической активностью, в отличие от пластинок 31 Мо И, Вследствие этого пластинки Мегс 1 60 Гне пригодны для проведения биоавтографии.Формула изобретения Способ определения биологической активности метаболитов гриба Тг 1 сЬодегпа Ис 1 погцщ, включающий культивирование гриба, экстракцию культуральной жидкости хлороформом, концентрацию экстракта, . разделение и биоавтографию метаболитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения эффективности способа, разделение ведут методом тонкослойной хроматографии на пластинках в системе 1 - 28% этанола в хлороформе, а биоавтографию метаболитов осуществляют с использованием пластинок эцио,1755758 Продолжение таблицы Составитель С. ПестовскийРедактор М. Кузнецова Техред М.Моргентал Корректор Н. Гунько и ГКНТ СССРТираж Подписное Государственного комитета по йзобретениям и открытиям п 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5