Способ получения рекомбинантов у томатов

)5 А 01 Н 1 О Т АВ скои генетики ас и В В Бужоряну .Э. Влияние биолов на частоту реком- АН ЛатССР, 1975,Я РЕКОМБИНАН ющим абра азе ранней бутом механической ся в натирании тений с добавлеОСУДАРСТВ Е ННЫ Й КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР. НИЕ ИЗОБ ОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(56) Дитлер В.Я., Кавацгически активных вещесбинаций у томата. - ИздМ 9 (338), с.53,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНТОВ У ТОМАТОВ Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетике растений, и может быть использовано в сельском хозяйстве для увеличения генотипической изменчивости растений в селекционно-генетических работах.Цель изобретения - увеличение частоты рекомбинаций и разнообразия рекомбинантов,Способ заключается в том, что обработ- кЕ подвергают внутривидовые гибриды г, в фазе ранней бутонизации 1-й кисти их заражают нулевым штаммом вируса табачной мозаики, отбирают плоды, завязавшиеся из бутонов, в которых мейоз протекал в интервале 4-6 дней после появления первых симптомов болезни, выделенные из них семена используют для посева и отбирают рекомбинантные растения с хозяйственно-ценными пр.иэнаками.Данный способ позволяет увеличить количество рекомбинаций (увеличивается частота мейотического кроссинговера на 20070(57) Использование: сельское хозяйство, способы селекции и генетики овощных культур. Сущность изобретения: внутривидовые гибриды Р 1 в фазе ранней бутонизации 1-й кисти заражают нулевым штаммом вируса табачной мозаики. Отбирают плоды, завязавшиеся из бутонов, в которых мейоэ протекал в интервале 3-6 дней после появления первых симптомов болезни. Из полученных плодов выделяют семена и используют их для посева. Отбирают рекомбинантные растения с хозяйственно-ценными признаками.1 табл,и выход оекомбинантных форм по сегменту2-й хромосомы на 64-137 О), а также разнообразие (спектр) рекомбинаций.Способ осуществляют следу Растения заражают в ниэации первой кисти пут инокуляции, заключающ листьев соком больных р нием карборунда. У зараженных растений через 5-7 дней в мейотических бутонах обнаруживают вирусные частицы, а через 9-12 дней появляются симптомы заболевания на листьях верхних ярусов. Наиболее существенное увеличение выхода рекомбинантных форм у вирус-инфицированных гибридов наблюдается в потомстве. полученном из бутонов, прошедших стадию мейоза в интервале 3-6 дней после появления симптомов болезни. Плоды. образовавшиеся из этих бутонов, этикитируют и убирают. Выделенные семе 1741677на высевают для размножения и отбирают рекомбина нты.П р и м е р 1, В опыте используют внутривидовой гибрид Г 1 между мутантами 393 и 504, маркированными соответственнопо 2-й и 6-й хромосомам (-, - -С - ), Опытные растения заражают в фазе ранней бутониэации 1-й кисти, Момент обнаружения вирионов в пыльниках томата устанавливают путем исследования отобранных через каждые 12 ч образцов методом иммуносорбентной электронной микроскопии. Динамика накопления инфекционных вирусных частиц в тычинках была выявлена биологическим тестированием,Были этикитированы бутоны: вирионы ВТМпроникали в предмейотической стадии; вирионы ВТМпроникали в профазе мейоза; вирионы ВТМ-О проникали на постмейотических стадиях.Контролем служат растения, обработанные дистиллированной водой и дающие отрицательные результаты на тесты по обнаружению вирионов ВТМв период сбора спелых плодов.Для каждого варианта определяют частоту хиазм. Частоту кроссинговера по маркированным сегментам хромосом устанавливают при оценке потомства само- опыления внутривидового гибрида Г 1. Ведут учет завязываемости плодов, их веса, осемененнасти и всхожести семян. Аналогичные исследования проводят на протяжении месяца через каждые три дня, начиная с момента обнаружения вирусных частиц в тычинках,Установлено, что в мейотических бутонах интактные вирусные частицы обнаруживаются уже на 6-7-й день после инокуляции, В течение первых 2-3 дней количество частиц резко возрастает, после, чего остается примерно на одном уровне.Уровень рекомбинаций зависит от динамики накопления вирионов в тычинках, наибольшая цитогенетическая активность отмечается начиная с 9-12-го дня после заражения. Она выражается в резком повышении частоты интерстициальных хиазм на материнскую клетку пыльцы: 0,07-0,10 против 0,02-0,03 в контроле. Этот пик длится 5-6 дней, после чего наблюдается спад. Уровень рекомбинаций в дальнейшем снижается.Данные изменения частоты рекомбинаций у пораженных растений в зависимости от времени, прошедшего после заражения, представлены в таблице,5 10 15 20 30 35 40 45 50 55 П р и м е р 2, Апробация способа индуцирования рекомбинаций у томата с помощью вируса табачной мозаики.Используют Р 1 и Е 2 между сортами Ликурич и Призер,Растения Г 1 заражают в фазе ранней бутонизации первой кисти, На протяжении бдней с момента появления первых симптомов заболевания зтикитировали бутоны, находившиеся на стадии мейоза. Семена, выделенные с этикитированных плодов, служат опытным материалом, а контрольным материалом - . семена, выделенные из плодов, завязавшихся на здоровых растениях одновременно с опытными,При работе с Г 2 каждое растение служит источником получения как контрольного, так и опытного вариантов, Получают их следующим. образом, Растения заражают в фазе ранней бутонизации 2-й кисти. Бутоны, в которых мейоэ протекал до инокуляции, служат для получения семян для контрольных вариантов, бутоны, в которых мейоз протекал в интервале 5 дней с момента появления симптомов заболевания, - для опытных,Выделенные опытные в контрольные партии семян высевают в поле и проводят морфофенологический, биохимический и фоновый анализы,Биометрические измерения касались таких признаков, как высота растений,.копичество листьев, кистей, завязавшихся товарных плодов на главном стебле и в целом на растении, вес плодов с 1-й, 2-й кисти и с растения, средний вес и осемененность плодов, Потомство, полученное от гибридов Г 1, оценивается также на содержание сухих веществ общего сахара, витамина С и титруемую кислотность в плодах,В результате установлены существенные отклонения от нормы по целому ряду показателей; высота растения, количество листьев на главном стебле, количество кистей на главном стебле, количество плодов на 1-й кисти и т.д.).Количество признаков, по которым установлено достоверное отклонение от нормы, зависит от генотипа растения.Выявлено, что вирусная инфекция приводит к расширению или сужению спектра изменчивости, В популяциях, полученных от пораженных родителей, появляются (или исчезают) классы как с максимальными, так и минимальными значениями анализируемых признаков (количество плодов на 1-й кисти, количество кистей на растении, урожайность впоколении гибридов Рг томата, пораженного ВТМ-О). Появляются формы, редко встречаемые в контроле. Так, с одного и того же растения Р 2 в потомстве, полученСоставитель Г.Кириякедактор И.Шмакова Техред М,Моргентал Корректор О.Кр а Тираж Подписноеосударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035. Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 каз 2229 ВНИИП зводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ном иэ бутонов, в которых мейоз протекал до заражения, частота встречаемости подобных растений 0,9-",ь. Иэ бутонов, в которых мейоз протекал в интервале 3-6 дней после заражения, 12,4,Способ позволяет увеличить количество рекомбинаций (частота мейотического кроссинговера увеличивается на 200, выход рекомбинантных форм по некоторым сегментам хромосом - на 64-137).Формула изобретения Способ получения рекомбинантов у томатов, включающий обработку растеМний, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения частоты рекомбинаций и разнообразия рекомбинантов, обработке подвергают внутривидовые гибриды Г, в фазе 5 ранней бутонизации первой кисти их заражают нулевым штаммом вируса табачной мозаики, отбирают плоды, завязавшиеся иэ бутонов, в которых мейоз протекал в интервале 4-6 дней после появления первых сим птомов болезни, выделенные из них семенаиспользуют для посева и отбирают рекомбинантные растения с хозяйственно-ценными признаками,