Способ микроклонального размножения безвирусного картофеля

(5 Н ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ(56) Бутенко Р. Г, Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. - М,: Наука. 1984, с, 272.Авторское свидетельство СССР М 1015868.Трофимец Л, Н Остапенко Д. Пбойко В. В. и др. Оздоровление и ускоренное размножение семенного картофеля. - М.: Издво ВАСХНИЛ, 1905,35 с. Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к области микроклонального размножения растений.В практике микроклонального размножения для культивации растений используют стерильные искусственные. питательные средй, что делает технологию трудоемкой, дорогостоящей и материалоемкой. Доращивание растений производят в теплицах при искусственном освещении,Наиболее близким способом тиражирования безвирусного картофеля является технология, заключающаяся в укоренении микрочеренков в приборочной культуре на искусственной питательной среде, состоящей из элементов минерального питания, пластических веществ и регуляторов роста.Однако для приготовления сред используются химически чистые, дорогостоящие реактивы,специальноеоборудование. Культивирование мериклонов проводится в режиме жесткой стерильности, для чего(54) СПОСОБ МИКРОКЛОНАЛЬНОГО РАЗМНОЖЕНИЯ БЕЗВИРУСНОГО КАРТОФЕЛЯ(57) Использование: сельское хозяйство,. картофелеводство, биотехнология, семеноводство, Сущность изобретения: безвирусный картофель размножают путем выращивания на стерилизованной прокаливанием почвенной смеси при 10 - 15 клк и обеспечении водного режима поливом или подтоплением субстрата дистиллированной водой растений, полученных из меристем, после чего проводят их черенкование и укоренение. используется автоклавирование сред. Это делает технологию трудоемкой, материало- емкой и дорогостоящей.Цель изобретения - упрощение технологии микроклонирования безвирусного картофеля, снижение ее материало- и трудоемкости.Способ осуществляется следующим об; разом.Искусственная питательная среда заменяется продезинфицированной термическим путем почвенной смесью, употребляемой для горшечных культур. Для полного уничтожения бактериальных и вирусных частиц почву выдерживают 2 ч в термостате при 2000 С. Обеспечение растений водой достигается увлажнением субстрата до йолной влагоемкости при трансплантации черенков в пробирки, а также дополнительным поливом на б - 8-й день культивирования. Дополнительного полива можно избежать, положив на дно пробирки, под субстрат, ватный тампон и,заполнив этот объем водой, что создаст достаточный для культивации мериклона запас. Водоснабжение мериклона обеспечивается поливом дистиллированной водой. Отсутствие в среде пластических веществ делает необходимым усиление фотосинтетической деятельности мериклонов.В связи с этим освещение в культивационном сооружении увеличивают до 10 - 15 клк, Освещение варьирует, так как мериклоны по разному удалены от источника света. Через 18 - 23 дня мериклон формирует 5 междуузлий и заполняет весь объем пробирки. Заготовку черенков проводят, не извлекая маточного растения из пробирки, нарезая их скальпелем для микрохирургии глаза, Пенек с корневой системой оставляют в пробирке для получения второй генерации черенков. С одного маточного растения можно получить 3 - 4 генерации черенков.Таким образом в сравнении с известным, предложенный способ исключает применение реактивов, в том числе дефицитных, используемых для приготовления искусственных питательных сред, в частности: агар, сахароза, ряд минеральных солей, витаминов, гормональных регуляторов роста.В связи с этим отпадает необходимость в оборудовании для растворения. внесения реактивов и стерилизации сред:стеклянная посуда, магнитные мешалки, нагреватели, дозаторы, рй-метр, автоклав и т. д.Приготовление почвенной смеси требует значительно меньших трудозатрат, чем приготовление искусственных питательных сред.Все зто вместе взятое снижает себестоимость единицы продукции с 0,8-1,3 руб до 20 - 25 коп,П р и и в р 1. Для культивации мвриклонов готовят почвенную смесь, состоящую иэ деревной почвы, песка и торфа в соотношении 2:1:1.Пробирки, ватные пробки, тампоны, и почвенную смесь стерилизуют в термостате в течение 2 ч при 200 С. В стерильном боксе на дно пробирки помещают ватный тампон, объемом 1,5 - 1,8 см, заливают этот объемэ.свежим дисциллятором и доливают ещв 2,2 -2,5 мл дистиллированной воды, Затем насыпант 3,5 - 4 г стерильного субстрата.(2,8 -3 см). Закрывают ватной пробкой и настаивают 30-40 мин. Материнские растения сорта "Адрвттэ" нарезают на черенки посередине мвждуузлия. Нижний узел оставляют на мвтвринском растении, доливают 1,7 - 2,3 млдистиллята и материнские растения оставляют для поворотной генерации черенков.Черенки длинным пинцетом помещают в субстрат так, чтобы узел находился на глубине 3-5 мм, пробирку закрывают пробкой.Пробирки с черенками устанавливают на световые стеллажи с комбинированным освещением: вертикальный ряд люминисцентных ламп и расположенную сверхулампы М Х-Г. Освещенность 15 клк, освещение 5 10 круглосуточное. Температура воздуха в период вегетации 18- 20 С, влажность 50- 60 . , Укореняемость черенков составилэ 84 ,П р и м е р 2; Почвенную смесь готовят из перегнойной земли, песка и торфа в соотношении 2;1:1. Стерилизацию проводят описанным выше способом. В пробирки насыпают 3,4 - 4 г сухого субстрата, заливают 2,2 - 2,5. мл дистиллированной воды, закрывают пробкой и настаивают 30 - 40 мин. 20 Использовали мериклон сорта "Невский". Технология черенкованияи выращивания растений аналогична описанной выше, освещенность 10 кдк. Укореняемость черенков составила 90 . Формула изобретенияСпособ микроклонвльного размножения безвирусного картофеля, включающий выращивание на стерильном субстратв полученных из мериствм растений, их черенкоП р и м е р 3. Стерильная почвеннаясмесь применялась также в широкодонной посуде, в частности, в трехлитровых склян. ках, В стерильную посуду насыпают суб страт - окультуренный чернозем с песком(2:1) высотой до 5- 7 см, поливают из расчета 0,65 - 0,75 мл дистиллята на 1 г субстрата.Черенки сорта "Изора" высаживают по схеме 2,5 х 2,5 концентрическими окружностя ми. Отверстие склянки закрываютватно-марлевым фильтром. Культивируют в тех же условиях, за исключением освещенности 12 клк, укореняемость черенков повышается до 95 %, что обуславливается 40 улучшением условий аэрации субстрата.Имуноферментный анализ показываетсохранение бвзвирусности мвриклонов при описанных способах тиражирования.Время формирования мериклонами пя ти междоузлий составляет 18 - 20 дней, чтосоответствует прототипу,Использование предлагаемого способатиражирования безвирусного картофеля обеспечивает по сравнению с известными 50 способами следующие преимущества: значительно снижается мэтериалоемкость технологии; уменьшаются трудозатраты; снижается себестоимость продукции; упрощается технология.551738170 СоставительТехред М.Моргентал Корректор Н.Король Редактор В,Бугренкова Заказ /ИФ Тираж . Подписное . ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 вание и укоренение полученных черенков, о тл и ч а ю щи й с я тем, что, с целью упрощения технологии микроклонирования, снижения ее материало- и трудоемкость, в качестве субстрата используют стерилизованную прокаливанием при 200 С в течение 2 ч почвенную смесь, выращивание осуществляется при освещенности 10 - 15 клк при обеспечении необходимого водного режима поливом или 5 подтоплением субстрата дистиллированнойводой,