Способ размножения растений in viтrо

,50,ЕСПУБЛИ 01 Н 4/00 ТЕНИЯ ЗОБР ПИ КА ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Научно-исследовательский зональныйинститут садоводства нечерноземной полосы(56) Еаг 1 е Е. Р, 1.апдйапз В, чч. Свгпабопргорадат 1 оп Югое зЬоот т 1 рз сосцгеб 1 п 119 ц 1 бМеб 1 ое - Ной, Зс 1 епсе, 1975, чо 1. 10, НЬ,Вест. 1, р. 608-610.Высоцкий В. АПопов Ю. Г., ТрушечкинВ, Г. Способ размножения древесных растений. Авторское свидетельство СССР М626728, кл. А 01 6 7/00, 1978.Попов Ю, Г. Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методомкультуры меристематических верхушек- ММетодические указания, 1979,Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к области культуры изолированных тканей и органов, и .может быть использовано для ускоренного размножения посадочного материала.Известны способы размножения растений в жидкой питательной среде в состоянии вращения на аппаратах роллерного типа. При этом, в качестве вторичных зксплантов используют развившиеся из пазушных меристем побеги или почки.Однако данные способы не позволяют увеличить коэффициент размножения растений до требуемых величин.Наиболее близким к предлагаемому является способ размножения плодовых и ягодных культур, согласно которому проводят поверхностную стерилизацию исходно(54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙй ч 1 ТВО(57)Использование:сельскоехозяйство, биотехнология для ускоренного размножения посадочнего материала, Сущность изобретения: размножение растений в культуре ткани осуществляют. путем культивирования эксплантов на агаризованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, после чего от них отделяют листья, помещают их в культивационный сосуд с жидкой питательной средой и культивируют до получения адвентивных почек при постоянном перемешивании среды. 2 табл. го материала, изоляцию зксплантов, культивирование их на периодически обновляемых искусственных питательных средах до Ы образования конгломератов почек и побе- ОО гов, разделение последних на субъединицц. ф последующее субкультивирование и укоре- фь нение и адаптация к нестерильнцм условиям. Однако, в .качестве вторичных эксплантов в этом способе используют только развившиеся побеги и почки. Многочис- е-ф ленные крупные листья при пересадках отсекают и выбрасывают, что приводит к непроизводительным потерям посадочного материала,Целью изобретения является увеличение коэффициента размножения растений,Предлагаемый способ позволяет увеличить коэффициент размножения в 6-7 раз,25 Предлагаемый способ отличается от известного тем, что после развития конгломератов почек и побегов, производят отсечение развившихся листьев, которые помещают в культивационные сосуды с непрерывно перемещающейся жидкой питательной средой и культивируют до образования адвентивных почек или побегов. Последние могут быть использованы для дальнейшего культивирования или непосредственного укоренения.Изобретение осуществляется следующим образом,П р и м е р 1, Развившиеся в процессе клонального микрораэмножения листья нарцисса отсекают и помещают в культуральные сосуды с жидкой питательной средой, В качестве питательной среды используют среду, предназначенную для размножения нарцисса следующего состава, мг/л: ЙНОЙОз 1650, КЙОз 1900, СаС 2 2 Н 20 440; М 9304 7 Н 20 370, КН 2 Р 04 170, НЗВОз 6,2, Мп 304 4 Н 20 22,3, Еп 804 7 Н 20 8,6, К 3 0,83, ЙаМо 04 2 Н 200,25, Сц 804 5 Н 20 0,025, СоО 2 6 Н 20 0,025; тивмин 0,5, пиридоксин 0,5, никотиновая кислота 0,5, аскорбиновая кислота 1,0, сахароза 30000, 6-бензиламинопурин 10,0, а-нафтилуксуснвя кислота 1,0; Ре 30455,6, ЕДТА Йа 274,6. Поскольку питательная среда использовалась в жидком виде, концентрацию хелатв железа для предотвращения развития хлороза увеличивали в два раза. Сосуды с эксплантвми, для обеспечения непрерывного омывания листьев питательной средой, устанавливали на аппарат роллерного типа, где культивировали 1,5-2 месяца. Результаты по индукции вдвентивных образований на листьях нарцисса приведены а табл. 1. Сравнение между вгвризованной веательной средой, жидкой средой и условиями культивирования (стационарные и обеспечивающие непрерывное омывание листьев) показывает статистически достоверную разницу в частоте индукции адвентивных образований, причем наибольший процент 5 10 15 20 30 35 40 45 регенерируется при использовании жидкои питательной среды в состоянии вращения,П р и м е р 2. Развившиеся в процессе размножения и чего листья земляники (фаза пролиферации) отрезают и помещают на питательные среды разных видов (жидкая и агаризованная), Появление адвентивных образований фиксировали спустя месяц после культивирования, которое осуществляли как в стационарных условиях, так и на аппарате роллерного типа. В качестве питательной среды использовали среду, предназначенную для размножения земляники следующего состава, мг/л: ЙН 4 ЙОз 1650, КЙОз 1900, СаО 2 2 Н 20 440, Мд 304 7 Н 20 370, КН 2 Р 04 170, НзВОз 6,2, Мп 504 4 Н 20 22,3. ЕпЯОа 7 Н 20 8,6, К 0,83, ЙаМо 04 2 Н 20 0,25, Ее 504 27,8, ЕДТА Йа 237,3, тиамин 0.5, пиридоксин 0,5, никотиновая кислота 0,5, аскорбиновая кислота 1,0, сахароза 30000,6-бензиламинопурин 1,0. Результаты по индукции адвентивных почек на листьях земляники приведены в табл. 2, . Как видно из полученных результатов,оптимальным для образования адвентивных почек является вариант с использованием жидкой питательной среды в состоянии вращения. Коэффициент размножения в этом варианте, по сравнению с прототипом, увеличивался у нарцисса в 7,2 раза, у земляники в 6,8 раз.Формула изобретения Способ размножения растений 1 и чего, включающий изоляцию эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде до образования конгломератов почек и побегов, разделение их на отдельные субъединицы и последующее культивирование их на питательной среде до образования растений-регенерантов, о т л ич а ю щи й с я тем, что, с целью увеличения коэффициента размножения, после образования конгломерата почек и побегов от них отделяют листья и помещают их в культивационный сосуд с непрерывно перемешивающейся жидкой питательной средой и культивируют до образования адвентивных почек.1738169 Таблица 1 абли Р 7,2 едактор В.Бугренк ррект орал каз 1944 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС113035, Москва, Ж-ЗЬ, Раушская наб., 4/5 зводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 10 редывращ.фСоставитель С,КуваеваТехред М.Моргентал