Способ дифференциальной диагностики реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей

(19 33/5 ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ДИ- ИЛЬА У е, в ис- гноОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Ленинградский педиатрический медицинский институт и Научно-исследовательский институт экспериментальноймедицины(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙАГНОСТИКИ РЕАКТИВНОГО И ЮВЕННОГО РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТДЕТЕЙ(57) Изобретение относится к медицинчастности ревматологии, и может бытьпользовано для дифференциальной диа Изобретение относится к медици частности ревматологии, и может бы пользовано для дифференциальной ди стики ювенильного ревматоидн реактивного артритов у детей.Цель изобретения - ранняя диагностика и повышение точности способа.Способ осуществляют следующим образом,Для оценки влияния вольтарена на стимулированную митогеном фитогемагглютинином (ФГА) функциональную активность клеток периферической крови используют метод культивирования цельной крови в микроплатах. Для исследования используют культуральную среду следующего состава: среда 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков(пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл). стики ювенильного ревматоидного и реактивного артритов у детей, Для повышения точности диагностики и ранней постановки диагноза иследуют иммунологические показатели периферической крови; определяют митогенстимулированную активность лимфоцитов, вносят вольтарен в дозе 1 мкг/мл и определяют митоген - стимулированную активность лимфоцитов в присутствии вольтарена. При увеличении активности лимфоцитов в присутствии вольтарена по сравнению с исходной диагностируют ювенильный ревматоидный артрит, а при уменьшении активности - реактивный артрит. Применение способа в практике здравоохранения позволит повысить. точность дифференциальной диагностики артритов у детей на 270, и обеспечит возможность постановки диагноза в более ранние сроки,На 100 мл этого раствора добавляют 3% глютамина 1 мл, 7,50/ гидрокарбоната натрия 2,5 мл, 100 Д хлористого кальция 0,07 мл, 400 глюкозы 0,25 мл. Гепаринизированную венозную кровь (25-30 ед. гепарина на 1 мл крови) смешивают с 10;4-ным желатином в отношении 5:1 и инкубируют при 37" в течение 30 мин. Лейковзвесь снимают, проводят подсчет общего числа лейкоцитов и лимфоцитов и разводят культуральной средой до концентрации лимфоцитов 130 тыс/мл. 0,15 мл этой суспензии вносят в каждую лунку полистиролового 96-луночного Ч-образного планшета для иммунологических реакций, добавляя дополнительно 10 млн аутологичных эритроцитов на лунку, В каждую лунку вносят митоген фитогемагглютинин в объеме 20 мкл, концентрация его составляет 40 мкг/мл. В половину культуродновременно с митогеном вносят вольтарен в концентрации 1 мкг/мл культуры. Для каждого больного ставят по 6 культур (3 - без препарата, 3 - в присутствии препарата). Затем культуры инкубируют при 37 в атмосфере абсолютной влажности с 50 СО 2 в течение 72 ч. За сутки до окончания инкубации вносят радиоактивную метку (0,4 мкКи Н-тимидина на лунку). После окончазния инкубации культуры снимают с помощью коллектора .с осаждением и промывкой клеток на фильтрах, фильтры с исследуемым клеточным материалом высушивают, помещают в счетные флаконы со сцинтиллятором и просчитывают на сцинтилляционном счетчике "Ракбета" ( КВ, Швеция). Сцинтиллятор готовят следующим образом; на 1 л толуола берут 5 г 2,5-дифенилоксазола (ППО) и 100 мг 1,4-ди-(5-фенилоксазоллил)-бензола(ПОПОП). ПОПОП предварительно смешивают со 100-200 мл толуола и в течение 20 - 30 мин греют на водяной бане под ватно-марлевой пробкой до.полного растворения. Компоненты смешивают и сцинтиллятор выдерживают в темноте в течение 1 - 2 суток, после чего используют, внося по 5 мл на счетный флакон, Оценку функциональной активности лимфоцитов проводят по стимулированному митогеном фитогемагглютинином синтезу в ДН К лимфоцитами периферической крови, который учитывают по включению радиоактивной метки Н-тимидина в ДНК лимфоцитов и выражают числом импульсов в минуту. После получения результатов со счетчика вычисля.ют среднее значение показателя включения метки для культур без вольтарена и в присутствии препарата. Оценку чувствительности лимфоцитов к вольтарену проводят. путем сравнения этих величин. За изменение функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена принимали только достоверное (р0,05) увеличение или уменьшение показателей под влиянием вольтарена. Для этого вычисляли границы доверительного интервала для показателей функциональной активности лимфоцитов каждого больного с вероятностью Р = 0,95 по методу определения доверительной зоны линейной регрессии. Если показатели функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена попадали в пределы вычисленного доверительного интервала, заключали, что вольтарен не оказывал значимого влияния на функциональную активность лимфоцитов, т.е, клетки были не чувствительны к вольтарену, При получении в культурах с препаратом показателей выше верхней границы доверительного интервала диагности 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 руют ювенильный ревматоидный артрит, а при показателях функциональной активности лимфоцитов в присутствии вольтарена ниже нижней границы доверительного интервала - диагностируют реактивный артрит.П р и м е р 1. Больная Ж, 1975 г. рождения, Поступила в кардиоревматологическое отделение для обследования и лечения. Из анамнеза известно, что заболела 3 недели назад, когда после перенесенной ОРВИ у девочки появилась болезненность и припухлость правого коленного сустава, Амбулаторно получала лечение нестероидными противовоспалительными препаратами без положительного эффекта, В анамнезе у девочки сигмоидит, При поступлении на основании клинических признаков поражения суставов и данных анамнеза был поставлен диагноз реактивный артрит правого коленного сустава.Проведено обследование по предлагаемому способу через 3 недели после начала заболевания.Получены результаты: ФГА - стимулированная активность лимфоцитов по включению радиоактивной метки 1276 имп/мин при доверительном интервале от 1039 до 1513 имп/мин. ФГА - стимулированная активность лимфоцитов в присутствии вольта- рена составила 2149 имп/мин, Выявлено достоверное повышение функциональной активности лимфоцитов у больной под влиянием вольтарена, Таким образом, вольтарен оказывает стимулирующее действие, значит, диагноз по предлагаемому способу - ю вен ил ьн ый ревматоидн ы й а ртрит.Проведена реакция Ваалер-Розе, Результат: жидкость осталась гомогенной и мутной, агглютинация не произошла, РФ не обнаружен, что соответствует диагнозу ревматоидного артрита.В качестве контроля использовали комплексное обследование, включающее совокупность клинических, рентгенологических и лабораторных признаков, По совокупности этих признаков через 4 месяца с начала заболевания девочке поставлен диагноз ювенильного ревматоидного артрита.Таким образом, диагноз, поставленный по предлагаемому способу, совпал с окончательным контрольным диагнозом ювенильного ревматоидного артрита.П р и м е р 2, Больная И. 1975 г. рождения, Диагноз при поступлении: реактивный артрит, Заболела 7 дней назад, когда после перенесенной ОРВИ появилась отечность и болезненность левого локтевого сустава, ограничение подвижности в суставе, местное повышение температуры, Лабораторная акЗаказ 1813 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 тивность отсутствует. Наследственность благоприятная. Ренгтенологические признаки поражения сустава отсутствуют.Проведено обследование по предлагаемому способу через 10 дней после начала заболевания, Получены следующие результаты: функциональная активность лимфоцитов периферической крови по Ф ГА-стимулированному синтезу ДН К составила 2049 имп/мин при доверительном интервале от 1457-2641. Функциональная активность в присутствии вольтарена - 1047 имп/мин, т.е. выявлено ингибирующее действие вольтарена. По данным обследования с помощью предлагаемого способа установлен диагноз реактивного артрита.Кроме того, получили отсутствие РФ по реакции Баадер-Розе и латекс-тексту, т.е, по данным обследования диагноз: реактивный артрит.Контролем служила постановка диагноза реактивного артрита по совокупности клинико-лабораторных и рентгенологических данных и эффекту антибактериального лечения через 1 месяц после поступления в стационар. Таким образом, выявлено совпадениедиагнозов по данным предлагаемого способа с контролем.Использование предлагаемого способа 5 в медицинской практике обеспечивает повышение точности дифференциальной диагностики артритов у детей на 27; и возможность ранней постановки диагноза за счет возможности оценки изменения на 10 клеточном уровне Т-звена иммуногенеза вусловиях блокады синтеза медиаторов воспаления.Формула изобретения Способ дифференциальной диагности ки реактивного и ювенильного ревматоидного артрита у детей путем иммунологического исследования крови, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет ранней диагности ки, определяют митоген-стимулированнуюактивность лимфоцитов в пробах крови до и после внесения вольтарена и при снижении этого показателя относительно исходного уровня диагностируют реактивный артрит, а 25 при увеличении - ювенильный ревматоидный артрит.