Способ клонального микроразмножения растений огурца

( 7 ОПА 1 й,К1 ЕИНИ%СУЕИБЛЦПт 2 ,.САНИЕ ИЗОБРЕТЕН материала и не лучаемых расте гии, в и мик огурц лекц (Сцс) жен рез эмб кул особа являются 3 - 5 мес, получеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева и Всесоюзный научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур(56) 1.Аппаз о 1 Вотапу, ч. 52, р. 417-420, 1983.Техп 1 са зцПа ргораца 1 оп чецесаоп 1 п чго б 1 серегоо (Сцсцпз забч(з 1.) Еогопало, 1.Могопе, .Мапс 1 п "Апп. Гас.ацг.Оп 1 ч.Ваг", 1981 - 1982, ч. 32, р. 651- 689.(54) СПОСОБ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНО)КЕНИЯ РАСТЕНИЙ ОГУРЦА (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам культивирования и микроклонального размножения растений огурца, и может быть использовано для селекции и семеноводства культуры огурца Изобретение относится к биотехнолочастности к методам культивирования роклонального размножения растений а, и может быть использовано для сеии и семеноводства культуры огурцап)1 з заТ 1 чцз ).Известен способ вегетативного раэмноя огурца из эксплантов гипокотиля чеобразование каллуса, соматических иоидов, регенерации из них побегов, тивирования их.Недостатки этого спельность процесса -(Сосцаз зат 1 чцз 1.), Целью изобретения является сокращение продолжительности процесса и повышение коэффициента размножения. Поставленная цель достигается тем, что выделяют экспланты размером 0,25-0,35 мм, культивируют их до получения побегов на агаризованной среде МурасигеСкуга, содержащий витамины по Стаба, 1-2 мг/л гибберелловой кислоты и дополнительно 1-2 мг/л глицина, 0,4 - 0,6 мг/л кинетина, 30-40 мг/л аденина, 5-10 тыс,мг/л активированного угля, После этого побеги переносят для укоренения на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, содержащую элементы минерального питания, уменьшенные вдвое, витамины по Мусариге-Скугу и дополнительно индолилуксусную кислоту 0,8 - 1,2 мг/л, кинетин 0,02-0,04 мг/л и 5 - 10 тыс.мг/л активированного угля. Способ позволяет достичь высокого коэффициента размножения, - до 25 - 81 шт. черенков в месяцц при сокращении продолжительности процесса за счет ускорения этапов размножения, 2 табл,ние генетики разнороднодостаточное количество иний. Известен способ вегетативного размножения огурца посредством прямой регенерации побегов из латеральных апексов, имеющих размер 5 - 6 мм и выделенных из растений на стадии 4-5 листьев.Этот способ включает выделение эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последу 17205955 10 20 30 35 40 ющую адаптацию растений-регенерантов впочве.Недостатками указанного способа являются высокая продолжительность процесса и низкий коэффициент размножения.Цель изобретения - сокращение продолжительности процесса и повышение коэффициента размножения.Поставленная цель достигается новымспособом клонального микроразмножениярастений огурца (Сосоа 1 з зо 11 чоз Ц, включающим выделение эксплантов, культивирование их на питательной средеМурасиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последующую адаптациюрастений-регенерантов в почве, причем выделяют экспланты размером 0,25-0,35 мм,культивируют их до получения побегов наагаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей витамины по Стаба,1-2 мг/л гибберелловой кислоты и дополнительно 1-2 мг/л глицина, 0,4 - 0,6 кинетина,30 - 40 мг/л аденина, 5 - 10 тыс,мг/л активированного угля, после чего побеги переносят для укоренения на агаризованнуюпитательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую элементы минерального питания,разведенные вдвое, витамины по МурасигеСкуга и дополнительно 0,8 - 1,2 мг/л индолилуксусной кислоты (ИУК), 0,02-0,04 мг/лкинетина и 5-10 тыс.мг/л активированногоугля,П р и м е р 1 (известный). Из растенийогурца Сосоа 1 з зос 1 чоз 1,со степенью развития 4-5 листьев вычленяют апексы 5 - 6мм, стерилизуют их, культивируют на высокогормональной среде, содержащий мг/л:6-БАП 5-20, 21 Р 1 - 30, а -НУК 1, СНз 0,010,025, до получения растений, которые затем укореняют. Этот способ длится от 4 доб мес при коэффициенте размножения от1:3 до 1:5,П р и м е р 2. Апикальные меристемыполучали из 3 - 4-дневных проростков семян.Элементы предварительно стерилизовали0,1-ным раствором диацида с последую-.щей отмывкой в трех порциях стерильнойводы по 7 - 15 мин в каждой. Экспланты размером 0,25 - 0,35 мм, состоящие из конусанарастания и 1 - 2 листовых примордиевкультивируют на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, состоящей изминеральных солей, г/л: МН 4 ИОз 33,0; К 1 чОз38; СаС 1 г 2 НгО 8,8; МдЯ 047 НгО 7,4; КНгРО 43,4; МагМо 04 0,25; СоЯ 045 НгО 0,025; СоС 1 г"6 НгО 0,025; НзВОз 6,2; МпЯ 04 4 НгО 22,3;2 пЯ 04 4 НгО 8,6; К.1 0,83; ЕеЯ 04 7 НгО 27,8;йаг -ЭДТА 37,8, а также витаминов по Стаба, мг/л: фолиевая кислота 100, рибофлавин 100,биотин 20, Са-пантотенат 200,пиродоксин 200, тиамин 200, никотиновая кислота 400, ,цинкобаламид 0,3; стимуляторов мг/л: глицин 1, кинетин 0,4, гибберелловая кислота 1, аденин 30, исахароза 15000, древесный активированный уголь 5000, агар 6500,Меристемы культивируют в климатиче-ской камере при температуре 26 +1 С, освещенности 5 - 8 тыс,лкс, 16-часовом фотопериоде и относительной влажности воздуха 70 ф 6 в течение 3 дней.Результаты испытаний образовавшихся побегов представлены в табл. 1.После формирования побега из меристемы его отсаживали на агаризованную питательную среду следующего состава: минеральные соли по Мурасиге-Скуга, г/л: ИН 41 ЧОз 33,0; К 1 чОз 38, СаС 1 г 2 НгО 8,8; М 9 ЯО 47 НгО 7,4; КНгРО 43,4; МагМо 040,25; СоЯ 045 НгО 0,025; СоСг 6 НгО 0,025; НзВОз 6,2; МпЯ 04 4 НгО 22,3; 2 пЯ 04 4 НгО 8,6; К 1 0,83; ЕеЯ 047 НгО 27,8; йаг-ЭДТА 37,8, разведенные в 2 раза; витамины по МурасигеСкуга, мг/л; пиридоксин 1, тиамин 1,никотиновая кислота 1, кинетин 0,04, индолилуксусная кислота (ИУК) 0,8; исахароза 10000, активированный уголь 5000, агар 6500, на которой культивируют 5 - 7 дней до получения миниатюрных растений высотой 5-7,5 см, имеющих не менее 3-5 настоящих листьев и мощный стебель с хорошо развитой системой корней, Результаты укоренения регенерантов огурца представлены в табл. 2.П р и м е р 3, Проводят аналогично примеру 2. Условия проведения примера, а также результаты испытаний представлены в табл. 1 и 2 (средняя граФа).П р и м е р 4. Проводят аналогично примеру 2 (нижняя графа), Условия проведения примера, а также результаты испытаний представлены в табл. 1 и 2,В результате клонального микроразмножения огурца (Сосоа 1 забчоз 1) происходит сокращение продолжительности процесса до 8-10 дней при коэффициенте размножения от 1:5 до 1:9. Кроме того, в результате указанного способа, который позволяет использовать экспланты меньшего размера (5 - 6 мм), что дает возможность освободиться от многих патогенных микроорганизмов; использование низких доз цитокининов уменьшает риск получения нарушений генетического аппарата растительных объектов, а также развитие каллуса в основании побега и связанной с этим утратой ценности размножаемого селекционного материала огурца; исключает формирование растений с мужскими цвет1720595 Таблица 1 20 Таблица 2 25 30 Составитель С.КуваеваРедактор Н.Лазаренко Техред М.Моргентал . Корректор М.Максимишинец Заказ 904 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ками, что связано с использованием больших количеств бензиламинопурина,Формула изобретения Способ клонального микроразмножения растений огурца, предусматривающий выделение эксплантов, культивирование их на агаризованной питательной среде Мура- сиге-Скуга до получения побегов, пересадку их на питательную среду для укоренения и последующую адаптацию растений регенерантов в почве, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения продолжительности процесса и повышения коэффициента размножения, экспланты выделяют размером 0,25-0,35 мм, культивирование их на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга ведут в присутствии витаминов по Стеба, а гибберелловую кислоту вводят в концентрации 1-2 мг/л и дополнительно 1 - 5 2 мг/л глицина, 0,4-0,6 мг/л кинетина, 3040 мг/л аденина и 5-10 тыс. мг/л активированного угля, пересадку побегов для укоренения проводят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, содер жащую элементы минерального питания вуменьшенной вдвое концентрации, витамины по Мусариге-Скугу и дополнительно 0,8- 1,2 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,02-0,04 мг/л кинетина и 5-10 тыс.мг/л 15 активированного угля.