Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИЕСПУБЛИК з 601 ЕНИЯ ТЕЛЬС ится к медицине, а повышение точноовременной фиксазии разнотипных нав- за- ной ом рительбы полательно бъекты, ь, желуи пробы до нулерхн ости тельная ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБР К АВТОРСКОМУ С(54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ СКОРОСТИДИФФУЗИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ КЛЕТОКПОЛИКОМПОНЕНТНОГО РАСТВОРА ВМОНОСИСТЕМЕ(57) Изобретение относится к медицине, аименно к гематологии. Цель изобретенйя -повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузииразнотипных компонентов. Помещают иссИзобретение отно именно к гематологии. Цель изобретения сти способа путем од ции скоростей дифф компонентов.Способ осуществляют следующим об Предварительно готовят измную трубку и две емкости.Производят забор в емкость прикомпонентного раствора, не обязсодержащего цветоконтрастныеЭто может быть кровь, плазма, желдочный сок и т.д.Производят забор из .емкостраствора в измерительную трубкувой отметки (на наружной поветрубки. имеется одна разграничи ледуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, извлекают после экспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измеряют в ней и в остатке пробы концентрацию исследуемых компонентрв и по формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентнаго раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов,метка). В емкости должна быть оставленачасть раствора.Трубку на период экспозиции усталивают под любым углом к горизонту ввисимости от применяемой той или идвижущей силы.По окончании экспозиции производятизвлечение фиксированной (т,е, до уровняразграничительной метки) части раствораиз трубки в емкость. При этом извлечениедолжно быть произведено только из одной,но любой части трубки без механическогоперемешивания смежных частей раствора.Раствор в емкости, а также оставшуюсячасть раствора взбалтывают.Необходимое количество раствора попарно забирают (повторно) из емкости дляизмерения концентрации разнотипных объектов, например клеток, молекул белков,жиров, углеводов и т.д,Измеряют парные концентрации соответственна для каждого типа микрообъектов, используя формулу, или рассчитываютскорость и направление каждого типа микрообъектов в отдельности, Число таких типов для измерения их взаимоперемещенияв одной трубке не ограничено.Направление и величину перемещениякомпонентов рассчитывают по формуленс-с.5=где 3 - длина пути перемещения в трубкекомпонентов раствора определенного типа,м, за время экспозиции;- длина части трубки, м;С - концентрация компонентов определенного типа, измеренная в пробе, извлеченной из первой части трубки;С 0 - концентрация компонентов определенного типа, измеренная в исходнойпробе раствора.П р и м е р 1. Диффузионный анализраствора в моносистеме применен к пробамкрови, взятым у здоровых и больных лиц,Измерены одномоментные скорости седиментации эритрацитов (визуально), а такжеперемещения лейкоцитов и их фракций вцельной (несепарированной) крови в однойизмерительной трубке.Последовательность предварительныхи основных технологических операций способа следующая,Предварительно готовят стабилизаторкрови по прописи:2,8-ный раствор поливинилового спирта (мол,вес 60000), мкл 5,0Цитрат кислый, г 0,16Глюкоза, г 0,16Вода дистиллированная,мкл Да 10,0СтерильноОдновременно готовят три емкости -флаконы А, Би В,Предварительно готовят измерительную стеклянную трубку, нижний конец которой эапаян и общая длина канала которойравна 120 мм, Отметка 0 нанесена у верхнего (открытого) конца трубки. Разграничительная метка делит длину канала трубки надве части (объема): верхнюю длиной 50 мми нижнюю длиной 70 мм. Внутренний диаметр трубки 7 мм. Размеры длин верхней инижней частей трубки обоснованы следующим: предварительные контрольные измерения показали, чта скорость оседанияэритроцитов не превышает 75 мм/ч, а скорость перемещения лейкоцитов вверх - 55мм/ч. Шприцем берут пробу крови из веныпациента - 5,0 мкл и помещают ее в отдельную предварительно приготовленную емкость - флакон А, куда налит стабилизатор5 крови в объеме 1,7 мкл. Полученную смесь вобъеме 6,7 мкл (соотнашение 3:1) взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток крови,Пробу крови из флакона А в объеме 5,710 мкл выливают в измерительную трубку донулевой отметки. Трубку устанавливаютвертикально при комнатной температуре напериод экспозиции - 1 ч, Диффузионныйпроцесс идет под воздействием градиента15 сил гравитации.По окончании экспозиции (1 ч) визуально фиксируют скорасть оседания эритрацитов по известной методике.Одновременно определяют направле 20 ние и скорость перемещения лейкоцитов.Для этого, избегая механического переиешивания, шприцем с иглой извлекают пробукрови полностью из верхнего объема трубкии выливают ее в предварительно приготов 25 ленную емкость - флаконБ, а пробу кровииз нижнего объема трубки - ва флакон В,Пробы крови во флаконах Б и В взбалтывают до получения равномерной взвесиклеток.30 Из каждого Флакона (Б и В) берут необходимое количество крови для измеренияконцентрации лейкоцитов и подсчета дифференциальной Формулы, концентрациифракции.35 Определяют направление движения(вверх или вниз) лейкоцитов в целом и каждой из их Фракций, Для этого сравниваютполученные концентрации однотипных клеток из флаконов Б и В. Например, если кон 40 центрация клеток во флаконе Б больше ихконцентрации во флаконе В, следовательно;клетки перемещаются вверх, и наоборот.Рассчить 1 вают длину пути и скоростьдиффузии клеток по формуле45, вс-с.13=Параметры трубки: 1=50 мм; 2=70 мм.Исследуемый раствор - кровь,Экспозиция - 1 ч.Требуется определить в одной трубкевеличину СОЭ, направление и скорость лейкоцитов, направление и скорость сегментоядерных нейтрафилав.По окончании экспозиции величинуСОЭ определяют визуально по известной методике. Получают (например) 40 мм/ч,Определяют парные концентрации лейкоцитов; С 0 10,9 х 10 шт,/л; С = 15 х 10 шт,/л,скорос экспози длина ч ен забо концен оненто оторои осуи трубки, изаствора;ция компоне а в эабранта в неиэвонцен проб ация компон енн Составитель А.Бобров Редактор А.Лежнина Техред М.Моргентал Корректор И,МУСкаТираж Подписноевенного комитета по изобретениям и открытиям и113035, Москва, Ж, Раушская наб;, 4/5 каз 533ВНИИПИ Госуда КНТ СС роизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 1 По формуле 3 - 50 15 10 - 10,910,910Определяют парные нейтрофилов: Со=2,5 х 10 шт,/л, По формуле9Я -В м/ч,ск в =+18 мм/ч вверх);ск офилов =-10 мм/ч(вниз).,Применение предлагаемого способапозволяет повысить точность измеренияскорости диффузии биологических клетокполикомпонентного раствора в моносистеме за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов.Формула изобоетенияСпособ измерения скорости диффузиибиологических клеток поликомпонентногораствора в моносистеме, включающий помещение исследуемого раствора в измери. тельную трубку с постоянной площадью поперечного сечения, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии раэнотипных компонентов, 5 пробу раствора разделяют в измерительнойтрубке на две смежно-контактные части, после экспозиции осуществляют забор пробы из одной части трубки, перемешивают и измеряют в ней концентрацию исследуемых 10 компонентов, измеряют длину части трубки,из которой осуществлен забор пробы, измеряют концентрацию компонентов в неизвлеченной пробе и определяют скорость диффузии компонентов за время экспоэи ции по формуле