Питательная среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба

)5 С 12 И 1/2 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР МИТЕТ ТКРЫТ ИКАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 54 ВАН ЯЗВ о-исследовательскийут(57) Илогидиффязвеявлятель Садыков и Л.С.Сален.511 (088.8) льная среда ГКИ для биреязвенного мика. М.; Колос, 1976,ея а- й раств .няетс г льство СССР1/20, 1988.ская энциклопедия.опедия, 1981; т, 15,5(71) Всесоюзный научветеринарный инстит(56) Колесов С.Г. Питатвыявления капсулы сроба, Сибирская язс, 104.Авторское свидетМ 1538508, кл, С 12 йБольшая медициМ,: Советская энцикс, 481. Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибирской язвы.Известна питательная среда ГКИ для выявления капсулы сибиоеязвенного .мик-. роба, состоящая из 40 ф 6 сыворотки крупного рогатого скота и 60 раствора Хенкса,К недостаткам известной питательной с)еды относится то, что она не является оптимальной по Составу, посколькурбеспечивает капсулообразование не более 60-80Известна также питательная среда.для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба с использованием.столовой минеральной воды.Недостатком известной среды является то, что в качестве стимулятора капсулообразования используют пищевой продукт (стоИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩ ИЯ КАПСУЛЬНОИ ФОРМЫ СИБИР ННОГО МИКРОБАзобретение относится к микроби и и касается питательной среды дл еренциальной диагностики сибир нного микроба. Целью изобретени тся упрощений и удешевление пит ной среды.этой целью солево ор в жидкой питательной среде зам я на мочу здорового человека, 1 табл ловую минеральную воду), который в экстремальных условиях (в частности, в полевых и особых ситуациях, в отдаленных и южных регионах страны) бывает малодоступным.3Цель изобретения - упрощение и удешевление питательной среды.Поставленная цель достигается тем, что среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба и дифференциации возбудителя сибирской язвы,.содержащая сыворотку крупного рогатого скота, взамен столовой минеральной воды содержит свежую мочу человека при следующем соотношении компонентов, об,:Сыворотка крупногорогатого скота 35-40 Свежая моча здорового .человека 60-6Известно, что наиболее оптимальной средой для жизнедеятельности сибиреязвенного микроба является организм челове- ка и животных. Поэтому предлагаемая питательная среда является моделью условий пребывания микроба в естественных условиях, т.е. в организме человека или животного, поскольку содержит те же компоненты (сыворотку крови, соли, аминокислоты, ще- лочность, которые присутствуют в крови и моче)Свежевыделенная моча человека имеет слабощелочную реакцию (рН 7,8), является сложным продуктом обмена, веществ, содержит более 150 компонентов органического и неорганического происхождения, г/л: азот 10 - 20; белки 0,02 - 0,07; аминокислоты (1 наименований) 0,02-6,06; соли Са 1,5; Мо 20-40; натрия 0,5 - 13,6; фосфора 15- 20; хлора 0,01 - 1,0; мальтозы 75; тиамина 5-30. Из аминокислот в моче содержатся, мг/л: аланин 3 - 3,1; аргинин 16 - 60; валин 8 - 70; гистидин 8,3; гликокол 17 - 19; изолейцин 0,3-4,0; лизин 1,5 - 10,5; метионин 0,2- 0,9; треонин 2-5; триптофан 0,5-3,0; тирозин 0,8 - 5,5; фенилаланин 1 - 4,0; цистин 7,0 - 23,0. Иэ приведенного материала видно, что моча человека является естественным химическим раствором, содержащим незаменимые аминокислоты, соли, сахара и витамины, необходимые для нормальной жизнедеятельности сибиреязвенного микроба, которые в производственных условиях приходится готовить но специальной рецептуре (раствор Хенкса, среда Игла и т.д.),Культивирование сибиреязвенного микроба во всех примерах проводили в колбах емкостью 0,5 л, коэффициент заполнения (К) = 0,5, при 36-38 С, доза посевного материала 5 105. спор/100 мл, экспозиция инкубации 10-18 ч.П р и м е р 1. К 35 мл стерильной сыворотки, крупного рогатого скота (кр.рог,ск.) прибавляют 65 мл свежепрлученной мочи человека. Среду разливают в колбы по 0,05 л и засевают споровой культурой Вас, апйгас 1 з штамм 11-й вакцины Ценковского из расчета 5 "10 спор/100 мл среды, закрывают резиновыми пробками и культивируют 10 - 18 ч при 36-38 С. По истечении указанного времени стерильно готовят мазки иэ выросшей культуры, окрашивают синькой Леффлера и просматривают в световом микроскопе, используяиммерсионную систему, По наличию и коли честву инкапсулированных клеток оценивают степень и характер капсулообразования. 5 Степень капсулообраэования к 18 ч роста в культуральной жидкости 85 м, а титр клеток составил 1,7+0,2 10 /мл (титр8клеток определяли методом предельных разведений),10 П р и м е р 2. Предлагаемая среда(об,):38 мл сыворотки кр,рог.ск., 62 мл мочи человека. Условия инкубации как в примере 1.Степень капсулообразования к 18 ч в культуральной жидкости достигла 92+2 о , а титр 15 клеток составил 8,4+0,3 10 на 1 мл среды.в 40 Формула изобретения Питательная среда для выращиваниякапсульной формы сибиреяэвенного микроба, содержащая сыворотку крупного рогато го скота и солевой раствор, о т л и ч а ю щ ая с я тем, что, с целью упрощения и удешевления питательной среды, в качестве солевого раствора она содержит свежую мочу здорового человека при следующем соотно шении компонентов, об,%:Сыворотка крупногорогатого скота 35-40 Свежая моча здоровогочеловека 60-65 П р и м е р 3, Предлагаемая среда(об. О ):40 мл сыворотки кр.рог.ск., 60,0 мл мочи человека, Условия инкубирования и прове дения анализа аналогичны примеру 1, Степень капсулообразования к 18 ч роста в .культуральной жидкости составили 97+30 , а титр клеток составил 2,2 +0,1 10 на 1 мл среды.25 Результаты зависимости капсулообразования ВасИцз аптпгасз от соотношения компонентов среды представлены в таблице.Таким образом, предлагаемая питатель- ЗО ная среда для культивирования Вас,апйгас 1 з имеет по сравнений с известной следующие преимущества: замена пищевого продукта более доступным - продуктом метаболизма человека, который позволяет 35 полностью сохранить диагностическую ценность известной оптимальной дифференциально-диагностической среды и проводить достоверную идентификацию возбудителя.1712409Составитель А,Федоров Редактор Ю. Середа Техред М.Моргентал Корректор С, Шевкун аказ 510 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10