Питательная среда для диагностики бруцеллеза

)5 С 12 й 1/ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ПАТЕНТУ следовательски ина и Г.А.Бело- исследовательвания в вете гропромизд Я ДИАГН ристый, хедицинска. ский ветеринарный институт(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА Изобретение относится к ветеринарной и медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики бруцеллеза человека и животных,Целью изобретения является улучшение ростовых свойств питательной среды для бруцелл, удешевление состава среды и расширение сырьевой базы для приготовления основы питательной среды.Это достигается путем применения в качестве основы питательной среды ферментативного гидролизата из плацентарноэмбрионально-маточных тканей (отходов производства. мясокомбинатов) от убойного крупного рогатого скота и свиней или смеси гидролизатов этих тканей, которые составляют в общем объеме убойного скота мясокомбинатов от 80 до 90. В питательную среду для выращивания бруцелл в качестве(57) Использование: ветеринарная и медицинская микробиология, бактериологическая диагностика бруцеллеза. Сущность изобретения заключается в том, что в питательную среду в качестве белковой основы (источника аминного, общего азота) вводится ферментативный гидролизат из отходов производства мясокомбината - плацентарно-эмбрионально-маточных тканей от коров и свиней как в отдельности, так и в виде их смеси при следующем соотношении ингредиентов, мас, : гидролиэат плацентарноэмбрионально-маточных тканей (с сухим остатком 9 - 10) 1,2-1,6; натрий хлористый 0,4-0,6; глюкоза медицинская 0,9-1,1; глицерин 2,75-3,25, агар-агар 1,75-2,25; вода дистиллированная остальное. 4 табл. ковой основы вводится ГПЭМ - гидролиэат из плацентарно-эмбрионально-м ных тканей стельных коров и свине отдельностиили вместе взятых в ра объеме) при следующем оптимальном ношении ингредиентов, мас. ф;Гидролизат плацен- тарно-эмбриональноматочный (сухой остаток9 - 10) 1,4Натрий хло ч 0,5Гюкоза м . я 1,0Глицерин 3,0Агар-агар 2,0Вода дистиллированная Остальное Среду кипятят 5 - 10 мин, фильтруют, разливают в пробирки, колбы, стерилизуют, рН готовой среды составляет 7,2 - 7,3.Предлагаемый гидролизат, являясь продуктом глубокого расщепления белков, содержит широкий спектр аминокислот, играющих важную роль в метаболизме бруцелл,являющихся.аминогетеротрофными микроорганизмами, Кроме. того, указанный гидролиэат является источником стимулятора 5роста бактерий за счет содержания в своемсоставе биологически активных веществплацентарной ткани.П р и м е р 1, Гидролизат плацентарноэмбрионально-маточный готовят следующим образом: ткани плаценты, матки,мягких тканей эмбриона, полученные намясокомбинате после убоя животных (непозднее 2 - 3 часов) подвергают фермента тивному гидролизу, к 1 кг измельченной на 15мясорубке ткани добавляют 1,5 л кипящейводы, перемешивают, подщелачивают 20 ф раствором щелочи (едкий натр) до рН 8,0,подогревают до 70 С, В отстуженную до 40 -45 С смесь добавляют 150 г фарша поджелудочной железы или 20 г панкреатина сактивностью 45 ЕД, добавляют 22,5 мл хлороформа, емкость герметично закрывают иведут гидролиз при периодическом перемешивании 4 - 5 суток при Т=43 С, поддерживая рН смеси на уровне 7,4-7,6, Поокончании гидролиза гидролизат переливают в емкость из нержавеющей стали, кипятят 15 мин, при рН 5,0, отстаивают,фильтруют, стерилизуют, подвергают лиофильному высушиванию. В гидролизате определяют общий и аминный азот, уровеньпептидов,Готовый продукт должен соответствовать биохимическим показателям, отраженным в табл. 1, из которой видно, чтогидролизаты из плацентарно-эмбрионально-маточных тканей коров и свиней малоотличаются друг от друга, а по величинамобщего и аминного азота превосходят прототип - гидролизат кильки.П р и м е р 2. Для изучения ростовыхсвойств питательной среды для бруцелл наоснове гидролизата плацентарно-эмбрионально-маточного проводились опыты по 45титрации компонентов питательной среды взависимости от роста микроорганизмов -известных вирулентных тест-штаммов бруцелл (3 вида рода бруцелл, 7 биотипов), пол-ученных из ГИСК им. Тарасевича, типичных 50по морфологическим, культурально-биохимическим и серологическим свойствам: бруцелла абортус 544; бруцелла суис 1330;бруцелла мелитензис 25; (референтныештаммы) и бруцелла абортус штаммы 271- 552803; 276-720; 275-138; 280 - 381-К(полевые штаммы).Для приготовления микробных взвесейсуточные культуры тест-штаммов смывали0,9 раствором хлористого натрия, доводили взвесь до содержания 1 млрд/мл микробных клеток по оптическому стандарту мутности, затем серийными десятикратными разведениями довотдили до содержания 1 тыс, (10 ) и 100 (1 0 ) микробных клеток в 1 мл взвеси. Иэ разведения 10 и 10 взвеси каждого штамма культуры бруцелл высевали по 0,1 мл на чашки Петри с предлагаемой и известными средами. Учет результатов проводили через 72-96-144 часов инкубации посевов при 37 С.Результаты указанных исследований при разном соотношении компонентов питательной среды на основе ГПЭМ представлены в табл, 2, из которой следует, что при испытании 7 известных вирулентных штаммов бруцелл установлены граничные концентрации компонентов по составу предложенной среды. При этом по наибольшему количеству выросших колоний эа оптимальную концентрацию компонентов состава питательной среды авторами принято, мас.:Гйдролизат плацен- тарно-эмбриональноматочный (сухой остаток9 - 10;4) 1,4Натрий хлористый, х,ч, 0,5Глюкоза медицинская 1,0Глицерин 3,0Агар-агар 2,0Вода дистиллированная Остальное Граничные с ним минимальные концентрации составляют, мас. :Гидролизат плацен- тарно-эмбриональноматочный (сухой остаток9 - 10 ф,) 1,2Натрий хлористый, х.ч, 0,4Глюкоза медицинская 0,9, Глицерин 2,75Агар-агар 1,75Вода дистиллированная Остальное Граничные с ним максимальные концентрации составляют, мас, ф :Гидролизат плацен- тарно-эмбриональноматочный (сухой остаток9-10 о ) 1,6Натрий хлористый, х.ч. 0,6Глюкоза медицинская 1,1Глицерин 3,25Агар-агар 2,25Вода дистиллированная Остальное Предложенная питательная среда на основе гидролиэата плацентарно-эмбрионально-маточного по оптимальных концентрациях компонентов по своим ростовым свойствам не уступает составам питательных сред по прототипу.1806186ющем: 1) на питательной среде по изобретению в сравнении с прототипом ускоряется на 1 - 2 суток рост культур бруцелл; 2) повышается диагностическая эффективность по5 количеству выделенных колоний возбудителя бруцеллеза из патологического материала (на 7,0 - 10,7;); 3) расширяется сырьевая база непищевого белка для изготовления питательной основы сред с ис 10 пользованием отходов производствамясокомбинатов, годовой объем которых только на одном мясокомбинате (г, Казань) составляет 50 - 60 тонн; 4) в значительно меньшей стоимости сырья - плацентар 15 но-эмбрионально-маточного материала(в 3-7-9 раз) в сравнении с общепринятыми в микробиологической практике источниками белка (рыба - печень - мясо) и экономии дефицитных пищевых мясоры 20 бопродуктов,Все сказанное обусловливает возможность промышленного изготовления для нужд бактериологических лабораторий основы питательной среды для выделения25 бруцелл в лиофилизированном состоянии,Формула изобретения Питательная среда для диагностики30 бруцеллеза, содержащая питательную основу. агар-агар, натрий хлористый, глюкозу, глицерин и дистиллированную воду, о тл и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью ускорения диагностики за счет повышения 35 ростовых свойств среды, в качестве пита. тельной основы она содержит ферментативный гидролизат плацентарно-эмбрионально-маточных тканей коров и/или свиней при следующем соотношении компо 40 нентов, мас, )ь:Гидролизат плацен- тарно-эмбриональноматочных тканей корови/или свиней 1,2-1,6 45 Натрий хлористый 0,4 - 0,6Глюкоза 0,9-1,1 Глицерин 2,75-3,25 Агар-агар 1,75 - 2,25 Вода дистиллированная Остальное1806186 Таблица 1 блицКоиовити итателььй среди иас.о ество колоний, еыросаих прм всавв 100 микробна пф пис оГлоко" зв Лиар"агар рй ре таиь бруцем вив целл дистиллиф"веммел 76.720 275-138280.881 К 4 128 Бруцеллсуис,1330 руцелборту44 бруцелламелттеизис,вт 25Ч1,81,2 5623 6 ьо 1,5 2,52 75 ь и1111 1,7530 2,0325 2253,5 25 71 сб 7627 51 тЗ 0,5 69 65+ 58+ 6 36 и 1,8 о+ итль 70 6724 65+5 25 6 пмтательиав среда по про у-агар Д юпвптомо глекпитательна рмиоаий аг зоРеда чвио 9-6 И.О. 592 О 2 вблица ктаристика капо Зест - етемии бруцепл еиросаих коолий еве 100 и,клеток Рост крлоиий езиер,колоний,ии, на е сутки разийхвиия Нзксииальнйсутки Ко лр б в г а б веовраитею атвиии вбортус 6925 БЫ 2-3 23 2"Э 2.3 2 8 Фора 8"Фариа 8"Фо-3 2и левке отани Бруцепла абортус,271-2808 Бр)вема вбортус, 276720 2-3 23 23 2-Э11 1161 2 3изата кильки 0 ь - агар Д ико ивчеии мальм-мвточех тканей коров из плзцентари" нове гидролиза в)ф свиней (Г 18 агариа основе спеси гидролизатов Гпзн коров и свиней (111) 1 1, Брук5442 бруц1 ЭЗ3 Боузис зат пле.цемтармЬвибриониат.(суест.9 188)от воров 566 624 59 Ь 707 7126 70 5 49.4 5623 53(4 6215 6767 6836 5924 6704.7327 646 5 о 23 5425 6224 6024 5323 6127 6534, 71 6 6723 6336% выделения Эффективность предложенной сеы,Выделенокультур Бр.абортус Кол-во исследуемыхживотных Патоматериал от исследуемых животныхМатериал от крупного рогатогоскота, экспериментально зара-.женных бруцеллезом- на питательной среде по изобретению- на питательной среде по прототипуМатериал от крупного рогатогоскота из неблагополучного по бруцеллезу хозяйству- на питательной среде по изобретению- на питательной среде по прототип 52,7 158 10,7 300 42,0 300 126 29,0 100 29 7,0 100 22 Составитель Н, МамлеваТехред М,Моргентал Корректор М. Керецман Редактор Производственно-иэдательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 965 Тираж Подписное ВНИЙПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5