Способ определения наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании в эксперименте

СОК)З СОВГ ТСКИХСОЦИА/1 ИСТИЧЕСКИХРГСГ)УБЛИК 9) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ 1 КНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Якушко В,Е, Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1980, М 8,с, 146 - 149.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАСТУПЛЕНИЯ ДЫХАТЕЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ЕЕ МОДЕЛИРОВАНИИ ВЭКСПЕРИМЕНТЕ. Изобретение относится к медицине, а именно - экспериментальной пульмонологии, и может быть использовано для определения повреждения субклеточных структур легких у животных и наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании у экспериментальных животных.Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляется следующим образом.Для моделирования дыхательной недостаточности используется распространенная модель с применением пестицида диквата, обладающего выраженным пневмотропны л действием. Подопытным животным (морским свинкам) указанный пестицид вводится в дозе 1/10 Ю 5 о (полулетальной дозы), т.е. 18 мг/кг массы перорально в течение 3 дней, Через 7 дней животные забиваются под легким эфирными наркозом, митохондрии из легких выделяются дифференциальО, 1672359 А 1(57) Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной пульмонологии. Целью изобретения является повышение точности способа, Повышение точности определения наступления дыхательной недостаточности в эксперименте достигается тем, что из легких животных выделяют митохондрии, определяют скорость потребления кислорода в пробах с сукцинатом в присутствии АДФ и без него, рассчитывают величину отношения первого ко второму и при уменьшении отношения относительно нормы не менее чем на 20% определяют наступление дыхательной недостаточности. Точность прогноза 86,4% (по прототипу - 68,2%). ным центрифугированием, Непосредственно после выделения дыхание митохондрий записывается полярографически, для этой цели можно испольэовать отечественный д полярограф ППТ. Митохондрии добав- О. ляют в кювету с инкубированной средой при 25 С (0.15 М сахарозы, 0,005 М КС 1; 0,005 КН 2 РО 4; 0,001 М 9 С 2), Через 1 - 1,5 мин добавляют сукцинат (10 мМ) и через 1 мин - О 200 мкМ аденозиндифосфата (АДФ). Затем СЛ делают необходимые вычисления: скорость Ч 0 дыхания с АДФ делят на скорость после исчерпания АДФ, )Полученная величина характеризует степень сопряженности дыхания и фосфорилирования, поэтому служит показателем интактности ткани.При патологическом процессе в легких (дыхательной недостаточности) степень сопряженности дыхания и фосфорилирования снижается, отношение скоростеи дыхания митохондрий в присутствии сукцината при55 добавлении аденозиндифосфата и без него - уменьшается, Степень снижения этого показателя и служит индикатором уровня повреждения субклеточных структур легких.В норме этот показатель равен 2,05 + .0,12. в легких, поврежденных пневмотропным пестицидом, показатель сопряжен. ности снижен до 1,58 + 0,12.При снижении показателя сопряженности относительно нормы не менее, чем 20 ф, определяют наступление дыхательной недостаточности, Анализ требует 20 - 30 мин.С целью контроля за достоверностью предлагаемого способа определения повреждения субклеточных структур легких параллельно проводят морфологические исследования легких животных с экспериментальной дыхательной недостаточностью. Морфологические исследования проводят общепринятыми методами световой микроскопии (окраска гематоксилин-эозином).В легких свинок с дыхательной недостаточностью отмечена инфильтрация межал ьвеолярных перегородок, выраженные перибронхиальные и периваскулярные лимфоидно-клеточные инфильтраты. В просветах бронхов наличие слизи, Обнаруживаю 1 ся периваскулярные изменения.Степень морфологических изменений в легких соответствует степени нарушений изученных биохимических показателей, что свидетельствует об адекватности предлагаемого способа определения повреждения субклеточных структур легких,Повышение точности способа демонстрируется на полученных в результате статистической обработки данных по определению наступления дыхвтельной недостаточности предлагаемым способом и по известному способу (табл.1). Контролем достоверности определения служили данные морфологического исследования, проведенные общепринятыми методиками световой микроскопии.П р и м е р 1. Морская свинка (самец), вес 350 г, вводят дикват трехкратно по 6,3 мг (т,е. 18 мг/кг, что составляет 1/10 1 05 о).Животное забивают через 7 дней. Определяют дыхание митохондрий легких в присутствии и отсутствии АДФ и рассчитывают отношение первого показателя ко второму. Определяот активность СОД в гомогенате ткани. Проба легкого поступает на морфологическое исследование. Патоморфологическое исследование установило, что легкие поражены пневмотропным пестицидом - выражена дыхательная недостаточность.Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,50, т.е. против нормы 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 снижен на 26.8" т.е. свидетельствует о наступлении дыхательной недостаточности,Активность СОД в ткани легкого равна 0,68 ед, активности на 1 г белка, что не отличается достоверно от нормы (0,72 ед. акт,).П р и м е р 2. Морская свинка (самец), вес 300 г. Вводят дикват трехкратно в дозе 18 мг/кг, а именно по 5,4 мг. Через 7 дней определяют все указанные параметры,Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,45, т.е. снижен по сравнению с нормой на 29.3, что свидетельствует о дыхательной недостаточности.Активность СОД равна 0.45 ед.активности, что соответствует активности при дыхательной недостаточности,Патоморфологическое исследование установило характерное повреждение ткани легкого. П р и м е р 3, Морская свинка (самец). вес 300 г, Ввводят дикват трехкратно в дозе 18 мг/кг, т,е. 5,4 мг, Через 7 дней определяли все вышеуказанные параметры,Показатель, характеризующий дыхание митохондрий, равен 1,74, т.е. снижен меньше, чем на 20 ф по сравнению с контролем, дыхательная недостаточность не регистрируется. Активность СОД равна 0.67 ед., что не отличается достоверно от нормы. Патоморфологическое исследование установило наличие изменений в легких. свидетельствующих о наступлении дыхательной недостаточности, т.е. в данном случае оба показателя "не сработали",В табл.2 приведены данные, характеризующие точность установления дыхательной недостаточности с помощью предлагаемого способа в зависимости от степени снижения показателя, характеризующего дыхание митохондрий. Видно, что способ работоспособен при снижении не менее, чем на 20 , показателя сопряженности. Формула изобретения Способ определения наступления дыхательной недостаточности при ее моделировании в эксперименте. включающий биохимическое исследование легких контрольных животных и животных с экспериментальной дыхательной недостаточностью, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, иэ легких животных выделяют митохондрии, определяют скорость дыхания и рассчитывают величину отношения потребления кислорода в пробах с сукцинатом в присутствии аденозиндифосЗаказ 2836 Тираж 396 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 1 О 1 фата и после его исчерпания и при уменьшении отношения не менее чем на 20 Ж определяют наступление дыхательной недостаточности.