Способ размножения растений ячменя in viтrо

,д;н. САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ВТОРСКО ИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ ЯЧМЕНЯИ Ч (57) Изобрет логии, в час растительнь изобретения каллусов с вь собностью, С сы НС-типа фитокамере и воздуха 30-50 о-производствен льство СССР3/00, 1985. куГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТПРИ ГКНТ СССР Изобретение относится к биотехнологии, в,частности биологических исследований растений методом культуры изолированных тканей, и является усовершенствованием способа по авт,св. М 11.61024.Целью изобретения является увеличение выхода каллусов с высокой регенерационной способностью.Способ состоит в том, что при получении и субкультивировании каллусов НС-типа с хлорофиллосодержащими клетками на питательной среде с последующей регенерацией растений, получение и субкул.ьтивирование каллусов Н С-типа с хлорофиллсодержащими клетками проводят в фитокамере при относительной влажности воздуха 30-50%.П р и м е р 1. В исследования вовлечен сорт ячменя Олимп.В качестве эксплантатов для получения каллусной культуры используют зародыши зрелых семян, Предварительно зародыши освобождают от пленок. Семена стерилизуют сначала в 70%-ном этиловом спирте в течение 10 мин, затем - в 0,1%-ном растворе сулемы в течение 10 мин. ПростерилизоРАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ1 ТВОение относится к биотехнотности к культивированиюх тканей и клеток, ЦельюявляЕтся увеличение выходаосокой регенерационной спо.пособ состоит в том, что каллуполучают и культивируют ври относительной влажности%. 1 табл. ванные семена промывают 6-кратно по 5 мин стерильной водой.Верхние половинки зародышей (160 - 200 в каждом варианте) сажают на агаризованную питательную среду (на модифицированную среду В 5) перпенди лярно к поверхности среды срезом вниз.Состав среды рН 5,5 следующий, мг/л: КМОз2500 йаНгР 04 Нг 0 150 (й Н 4)г 504 134 Мд 304 7 НгО 250 СаСг 2 НгО 150Ее 504 7 НгО 27,8Наг-ЕОТА 2 НгО 37,3 НЗВОЗ 3,0МПЯ 04 НгО 10,0 Лп 5047 НгО 2,0 йагМо 04 2 НгО 0,25СоЯ 045 НгО 0,25 Со Сг 6 НгО 0,025 К 3 0,75 Витамин В 1 10,0 Витамин Вб 1,0 Никотиновая кислота 1,0 Мезоинозит 1005 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 2,4-Д 5,0 Сахароза 20000 Агар-агар 8000 Культивирование эксплантатов и субкультивирование полученных каллусов проводят при 16-часовом фотопериоде, освещенности 1000-1500 лх, температуре 23 - 25 С в пробирках, содержащих по 25 мл питательной среды, закрытых ватно-марлевыми пробками. При этом в фитокамере относительную влажность воздуха поддерживают на уровне 30-50 о .При культивировании эксплантатов выделяются каллусы, обозначенные как каллусы НС-типа, НС-каллусы образуют обычно агрегаты, состоящие из плотных сегментов лопастной формы белого или желтоватого цвета с участками зеленого цвета или без них,Первичные НС-каллусы выделяются через 90 - 120 дней, В дальнейшем при субкультивировании пересадки на свежую среду делают через 45 - 60 дней, При пересадках для дальнейшего культивирования вычленяют комочки НС-каллусов с хлорофиллсодержащими клетками размером 4 - 6 мм, Таким путем происходит отбор форм с высокой регенерационной способностью, При этом регенерационная способность культур до 2 - 3 лет сохранялась на уровне 70-80 о .При получении и субкультивировании каллусов в фитокамере при относительной влажности воздуха 30 - 50 одостигается оптимизация условий для формирования каллусов НС-типа с хлорофиллсодержащими клетками. Предполагается, что этот эффект связан с транспирацией, Видимо, происходящая с определенной при данных условиях интенсивностью транспирация способствует созданию вллусах нео ходимого градиента каллусогенных веществ,П р и м е р ы 2 и 3, Получение культуры проводят аналогично примеру 1, но исследуют размножение п ч 1 го при использовании предлагаемого способа у сортов ячменя Целинныйи Одесский,Зависимость формирования НС-каллусов с хлорофиллсодержащими клетками от относительной влажности воздуха в фитокамере у различных сортов представлена в таблице,Число оцениваемых культуральных пробирок в каждом варианте 100-120.Для получения растений-регенерантов НС-каллусы с хлорофиллсодержащими клетками пересаживают на агаризованную питательную среду, например на среду В 5 без 2,04-Д, и выращивают их при 16-часовом фотопериоде, освещенности 3000-5000 лк, температуре 16 - 18 С ночью и 23-25 С днем.Растения-регенеранты размером 10- 15 см пересаживают в сосуды с почвой и выращивают в фитокамерах до полного созревания семян при 16-часовом фотоперио- . де, освещенности 20000-2500000 лк, температуре 16-18 С ночью, 23 - 25 С днем,За 5 - 7 дней до пересадки в почву растений-регенерантов для постепенной адаптации их к новым условиям с пробирок снимают ватно-марлевые пробки,При пересадке, чтобы меньше повредить корневую систему растений, используют приспособление для выталкивания из пробирок агаровых блоков вместе с растениями-регенерантами, Это приспособление представляет собой шланг, один конец которого соединен с металлической трубкой -иглой диаметром 3 мм, длиной 250 мм, а другой конец подсоединяется к водопроводу, Трубку-иглу проводят через араговый слой до дна пробирки, и давление воды выталкивает агаровый блок вместе с растеньицами, Затем растения-регенеранты отмывают водопроводной водой от агара и сажают в сосуды с почвой,Всего получено более 2000 растенийрегенератов.Изучение растений-регенерантов и их потомства показывает наличие широкого спектра изменчивости. Генетическая изменчивость наблюдается по таким хозяйственно-ценным признакам как продуктивность, высота растений, темпы развития и т.дчто дает возможность использовать растениярегенеранты в селекции для отбора форм с новыми. хозяйственно-ценными свойствами,Применение способа позволяет увеличить выход. каллусов ячменя с высокой регенерациоНной способностью посредством оптимизации условий для формирования НС-каллусов с хлорофиллсодержащими клетками и повысить эффективность использования культуры тканей ячменя в селекционном процессе для получения новых хозяйственно-ценных форм. Формула изобретения Способ размножения растений ячменя и а 1 го по авт,св, И. 1161024, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода каллусов с высокой регенерационной способностью, получение и субкультивирование каллусов НС-типа проводят вфитокамере при относительной влажностивоздуха 30-50%.1664840 1атное увеличение после каждой пересадкичерез 45 дней) оставитель В.Демкиехред М. Моргентал едактор Н.Рогулич Корректор М.Кучерявая Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 2366 Тираж 370 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5