Способ диагностики аутоиммунных заболеваний

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСА ЛИК 1)5 с 01 И 1/2 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ГНОСТИКИ АУТОИММУНН(57) Изобретенне, а именно к Р 7биологии АН меди является повыш Бель достигает крови облучают том длиной во,ностику за туханию фо ток, котор .фектность.ции до 307 стируют за ол(088,8)Е, и др. Изме фоцитов при бр Иммунология, 1 ор ени При и б боле хи 1,300 нм и после Изобретение относи к медицине,ращени че реги рируют кине енции в циф рмах, т.е. трого компо на основани атухания фос - или аналогоеляют время жиз фосфоресценченных реэуль- ефектности ой овы орес ой ф и бы ше п ент о и полии татов судят о нал мембран лимфоцито При этом возбуждается триптофановая фосфоресценция при комнатной температуре, обусловленная излучательной дезактивацией элек 1 ронно-возбужденных триплетных состояний триптофановых остатков белковКинетическая кривая затухания исследуемых образцов в пределах двух порядков интенсивности имеет биэкспоненциальный характер (т.е, представляет собой сумму двух экспонентов) и определяется соотно- шением етюГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ТКНТ СССР Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ 1(71) Институт фотои Минский государственныйцинский институт(56) Добрецов Гв мембранах лимальнбй астме. -б, 68. именно к иммунологии.11 елью изобретения являетсние точности способа.Способ осуществляют следу разом.Из периферической крови выделяют лимфоциты на градиенте фиколл-веро- графин. Клетки дважды отмывают изотоническим раствором или средой 199 и готовят их взвесь с концентрацией 4-610 кл,/мл. Полученную взвесь6лимфоцитов инкубируют 45 мин при 37 С По окончании времени инкубации кл ки ресуспендируют и переносят в к вету в объеме 0,4 мл. После удаления кислорода из суспензии лимфоцитов в образце возбуждают триптофановую фосфоресценцию путем облучения в течение 3-5 с ультрафиолетовым светом спектрального диапазона 265 е относится к медицииммунологии. Пелью ние точности способа. я тем, что лимфоциты в течение 2-5 мин све ны 265-300 нм. Диагания проводят по засценции мембраны клезволяет оценить их де снижении фосфоресценлее от нормы диагноание, 16297871(с) =1 е -- +1 е- - рЛ У где 1 - интегральная интенсивность свечения в.любой момент 5времени после прекращениявозбуждения1 и- соответственно начальнаясинтенсивность и время жизни быстрого компонента свечения1 и м- начальная интенсивность.иЛмвремя жизни медленного ком"понента свеченияе - основание натурального логарифма;Ли ь - соответствуют промеЖуткаммвремени, в течение которогоначальная интегральная интенсивность быстрого и медленного компонентов соответственно уменьшается ве (2,72 раз).При уменьшении времени жизни быстрого компонента более чем на 55 мсили на 30,5 Х нормы судят о. наличиинарушения структурного состояниямембран клеток.П р и м е р 1, Больная. Жалобыпри поступлении: постоянные ноющиеболи в суставах, боли в области серд"ца, одышка при физической нагрузке,общая слабость, выпадение волос,головные боли.Больна в течение 2,5 лет, после 35переохлаждения появились боли и отечность в коленнйх суставах, затем присоединились боли в других суставахи мьпццах, отмечает повышение температуры до 38 С, потерю в весе. Поставлен диагноз СКВ.При объективном осмотре: кожныепокровы чистые, бледной окраски. Суставы внешние не изменены, движения вполном объеме болезненные. Пыхание в 45легких везикулярное. Тоны сердцаприглушены, систолический шум надвсеми точками, ритм правильньп,пульс 78 у 1. в мин, АП 110/70 мм рт,ст,Живот мягкий, безболезненный, печень 50и селезенка не увеличены. Видимых,отеков нет.Анализ крови: Нв 108 г/л, лейкоциты 4,110 1 /л: С 51 Х, П 67 Л 28 Х, М 9 Х, Э 5 Х, СОЭ 35 мм/ч. Общий белок 78 г/л, М-глобулины 9 рЗХу28 6 Х, СРП 1+, нейреминовая кислота29,4 ммоль/л, 1,Я клетки единичныев препарате; уровень антител к ДНК (реакция Фарра) - 15 мкг/мл, уровену комплемента 38,8 СНО. Реакции на Рф - отрицательные. Иммунные комплексы 260 ед.опт.пл. 18 Г 24,8 г/л, 1 яМ 2,3 г/л, 18 А 4,9 г/л, Т-лимфоциты 39 ; В-лимфоциты 12 Х "пц 11" лимфоциты 49 Х; Т-супрессоры 7 Х," .Т-хелперы 31 Х.Анализ мочи: Уд,вес 1012, .белок1-3 0,3 г/л, сахар - нет, 1. , пло 2-5ский эпителийДиагноз: СКВ, активная фаза, 11 ст. активностихроническое течение, люпус-нефрит, полиартрилгия, сиокардиострофия, Н 1.Из стабилизированной крови больного СКВ в градиенте плотности фикоол-верографина выделены лимфоциты и дважды отмыты средой Хенкса, Приготовлена их взвесь с концентрацией 6 10 клеток/мл. Клетки инкубировалиб45 мин при 37 ф С, затем ресуспендировали, в объеме 0,4 млпереносили в еварцевую кювету и после удаления кислорода измеряли время жизни быстрого компонента ТФКТ лимфоцитов. При этом ьу равнялось 93 мс, т.е. степень снижения от контроля составляла 87 мс или 48 Х, что свидетельствует .о дефектности мембран лимфоцитов обследованной больной.У данной больной наблюдаются значительные отклонения от нормы подав-, ляющего большинства иммунологических параметров, в том числе показателей клеточного звена иммунной системы, свидетельствующих о патологических изменениях иммунокомпетентных клеток. Таким образом, предлагаемый спо- . соб позволяет повысить точность и информативность выявления дефектности мембран лимфопитов при иммунопатологических заболеваниях. Более высокая точность способа обусловлена возможностью исследования нативного состояния мембран интактных клеток, так как роль мембранного зонда играет природная аминокислота триптофан, входящая в состав мембранных белков. Предлагаемый способ позволяет исклю" чить ряд дополнительных процедур: введение дефицитных, дорогостоящих зондов, дополнительньп учет свето- рассеяния образцов клетокф, введение поправки на флуоресценцию несвязан162978 ного с мембраной зонда, сложный математический расчет. Способ диагностики аутоиммунных заболеваний, путем исследования мембран лимфоцитов, облучение их ультрафиолетовым светом и диагностики заболевания по наличию клеток с Составитель Л,Стебаева Техред М.Дидык Корректор М; Шарощи Редактор А,111 андор Заказ 433 Тираж 389 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 Формула изобретения5 76дефектными мембранами, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, облучение проводят в течение 2-5 мин, при этом для облучения используют свет длиной волны 265-300 нм, а дефектность мембран определяют по скорости затухания фосфоресценции и при снижении дефектности мембран до 307 и более диагностируют заболевание.