Способ диагностики угрозы прерывания беременности

Оп ИСАКИИИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ нц 876111 Союз СоветскикСфцналнстнческикреспублик1Опубликовано 30.10,81, бюллетень М 40 Дата ояублнкованмя Описания 30, 1 О 81,В.С. Толмачев, И. Б. Беклемишев, Е И. Боровнцкая.- и Б.П.Шабаев(72) Авторы изобретения г Казахский ордена Трудового Красного Знамени, государственный университет им.СМ,-Кирова. и Научно- исследовательский институт акушерства и гинекологии(54) СПОСОБ ДИЛГНОСТИКИ УГРОЗЫ ЛРЕРЬБЛНИЯ БЕРЕИЕННОСТИИзобретение относится к медицине,а именно, к акушерству.Известен способ диагностики угрозыпрерывания беременности путем выделения лнмфоцитов крови,с последующей .инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым и измерения интенсивности флуоресценции 13,Однако известный способ обеспечи"вает низкую точность диагностики ине позволяет проводить раннюю диагностику, что ограничивает область егоиспользования.Цель изобретения - повышение точности способа и ранней диагностики.Указанная цель достигается тем,15что при осуществлении способа диагностики угрозы прерывания беременОности путем выделения лимфоцитовкрови с последующей инкубацией ихв среде, окраски акридиновым оранжевым (ЛО) и измерения интенсивностифлуоресценции, в среде предваритель. но до внесения.лнмфоцитов инкубируют,эритроциты обследуемой в течение 5-60 мин, далее эритроциты удаляют, после инкубации лимфоцитов интенсивность флуоресценции измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывания беременности.Способ осуществляют .следующим об" разом.Берут кровь из локтевой вены пациента в количестве 5-10 мл, осаждают эритроциты, надосадочную жидкостьс лимфоцитами отделяют от эритроцитов. Эритроциты трехкратно отмывают от плазмы в 0,852-ном растворе хлористо". го натрия в объеме,З-х кратно превышающем объем эритроцитов. Затем иэ эритроцитарной массы и раствора Рин гера-Локка в объемном отношении 1:2 готовят взвеси и помещают в диффузи онную камеру, две полукамеры которой, разделены мембранным фильтром с диаметром пор 04 мкм. Эритроциты инку5 мин555 1 5 бируют и течение 30 мин при периодическом встряхивании для предотвраиения их оседания.В результате инкубации эрнтроцитарный белок диффуэно проникает в5 полукамеру с раствором Рингера-Локка. По истечении срока инкубации раствор Рингера-Локка с проникшими туда эритроцитарными белками извлекают и добавляют в культуру с лимфоцитами, ко торые инкубируют на покровных стеклах в течение 5-60 мин. После инкубации покровные стекла с приклеившимися лимфоцитами вынимают и фиксируют в смеси спирт-ацетон (1:1) в течение 30 мин при 4 С.Препараты с клетками окрашивают в следующей последовательности.Этиловый спирт 1000 СТо же 90 206030Бидистиллнро- .ванная водаАцетатный буфер(рН 4,4)Раствор АО набуфере (10 м) 15Раствор АО набуфере (10 м)30То же 55Препараты заключают в каплю буферного раствора, содержащего краситель АО (10 м), и помещают на предметное стекло, края которого окантовывают йарафином или резиновым клеем.Измерение интенсивности связывания красителя АО с клетками проводят на цитофлуоринефелометре.40Причем интенсивность флуоресценциь измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации ди" агностируют угрозу прерывания беременности.Клинико-лабораторные исследования с использованием предлагаемого способа показали (табл.1), что интенсивность флюоресценции повышается в 2 раза при действии среды, где инкубировали эритроциты больных. Действительно, сравнивая столбец 2, где дана интенсивность флуоресценции лимфоцитов донора с собственной сывороткой, со столбцом 4, где дана интенсивность флуоресценции при добавлении сыворотки больной видно, что флуоресценция уменьшается в среднем на 7,52 (столбец 5). В то вр мя как добавление в 5-минутную культуру среды, где инкубировали эритроциты этих же больных, показало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6) в 2 раза и составило 167" столбец 8).Следует обратить внимание, что в тех случаях, когда процент отличий интенсивности флуоресценции под действием сыворотки больных был низок ( столбец 5, номера по порядку 4,5,6) и затруднял постановку диагноза, то под действием среды, где инкубировали эритроциты пациентов, процент отличий достоверно увеличился (столбец 8) и позволял- поставить точный диагноз угрозы выкидыша. 360-минутное культивирование лимфоцитов донора с сывороткой кровибольных показало (табл.2), что ин"тенснвность флусресценции лимфоцитов (столбец 4) увеличивается .в среднем на 6 Х (столбец 5), в то время какдобавление в культуру среды, гдеинкубировали эритроциты пациентов,вызывало увеличение интенсивностифлуореценции (столбец 6) почти в3 раза и составило в среднем 183 е(столбец 8), что,способствовало установлению более точного диагноза.Таким образом, предлагаемый способобеспечивает повышение точности диагностики, а также позволяет проводить более раннюю диагностику угрозы прерывания беременности,иФ В о дх о о 3 оо Во мч л охф хе о ф о е: х сто ец о е Р Р х о Оф Мх ф х о В СЧ+ ф о ло Ц ех Ой ой .хоф,х М М д ф ф В х х о Р о сьо 4:е 1 Щ о о х феВф 3оххх ФЧ ОсЫ сф Р е фххю 34 х хЮ В мо х Й.; хох .й;е д е Оои хвоое ф: Ф хохо ое ехВ ВффЬ О . Ф +1 + о а в о10 чО осч ов лао 1ц Ч1ььм 1 1 1 цр ь ар е л О аоа чи 0 О 11 ч з Р ч д эм авх ц о ЭОМ О Р оьИ ь,Ь Ь Э м цХ Р 3 ххьа дхо ОЭР. хкь Эа 3 ооьдЭР 3о одцхм хвом аф СО о ло е ьь а о о Е Р м о б щ о д Е ц РЬло р ОмЭ 1 ахо мц ььЦцоц1 ом а Змла)1 ХЭ О О Эай Имц мцмцЭ ымЬ.ьмдО аОцЭОВОЫоь м д1 Ж 9 3 Х а,хь" оо сь о 1 ь 4 1 Ц Р ва цо м м м ь- х Ц Э ф о аО о. ф Э ьь а ь цоьс 1 рЮф о ьхо ц оь м хх ц о ь. ьмоэоахР2омомафаь.хо 3 оц х ц ц СО о 6 ь щ4 НО6, е. 1л ой с 1 И 1 м Оц ом цЭЬ м,х хм хХЭмоХО 1 л1 ДХОЭ11" Дьоцо х а дхэоцаьхдо аэ оео1"Е Р м мойо эД эьл Мл ЬоЮ о о О О цО л л л л л е87611 формула изобретения Составитель Л.СоловьевРедактор Т.Макаревич Техред Ж, Кастелевич Корректор С. Щомак Заказ 11458 Тираж 690 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Способ диагностики угрозы прерывания беременности путем выцеления лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым и измерения интенсивности флуоресценции, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повыше. ния способа и ранней диагностики, в среде предварительно до внесения лимфоцитов инкубируют эритроциты обследуемой.в течение 5-60 мин, далее. эритроциты удаляют, после инкубации 12лимфоцитов интенсивность флуоресценцин измеряют в начале и в конце инкубацни и прн возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубациидиагностируют угрозу прерывания бе"ременности. Источники информации, .принятые во внимание при экспертизе1. Й 1 с 11 ег Й. И 1 сгоГ 1 цогаейг 1 с сЬагассег 1 айоп оГ пегасе 1 цаг пос 1 е с ас 1 дз пцс 1 ооогайе 1 пз Ьу ас 1 д 1 пе огапце- АсФа РЬуз 1 о 1.еапд", 1966, ч 67, стр.267.