Способ получения стрептавидина

сорбции стрептавидина из одной порции культуральной жидкости.Очистку, целевого продукта осуществ-,ляют преимущественно на сефацексахС, 100, 150, причем фракции, содержащие стрептавидин, собирают винтервале относительных объемов элюции: 1,2-1,7 в случае использованиясефадекса С; 1,4-1,9 для сефадекса С, 1,7-2,3 для сефадексаС.П р и м е р 1. Культуру ЯгерСо.шусез ачЫп 1 д выращивают на жидкойпитательной среде, содержащей, г/л:пептон 10, МаС 1 5, декстроза 10,рН 7,2 в течение 72 ч, центрифугируют 30 мин при 5000 об/мин.К 1 л супернатанта добавляют твердый сульфат аммония до степени насыщения 0,7,Осадок отделяют центрифугировани"ем при 5000 об/мин в течение 1 ч ирастворяют его в 50 мл воды. Растворосветляют центрифугированием при 253000 об/мин и в течение 5 мин и супернатант наносят на колонку объемом850 мл с сефадексом С, уравновешенным 0,002 М аммоний карбонатнымбуфером рН 8,9. Фракции, содержащиестрептавидин, собирают в интервалетносительных объемов элюции 1,401,90. Выход получают продукта составляет 40 мг/л культуральной жидкости,Препарат гомогенен не содержит примесей нуклеаз,. пригоден для генноинженерных работ.П р и м е р 2. Препарат получаютаналогично примеру 1, но гель-хроматографическую очистку осуществляют40на сефадексе С; Фракции, содержащие стрептавидин, собирают в интервале относительных объемов элюции:1,2-1,7. Выход целевого продуктасоставляет 38 мг/л культуральной жид 45кости. Препарат гомогенен не содержит примесей нуклеаз, пригоден длягенноинженерных работ.П р и м е р 3, Препарат получаютаналогично примеру 1, но гель-хроматографическую очистку осуществляютна сефадексе С, Фракции, содержащие стрептавидин, собирают в интервале относительных объемов элюции:1,7-2,3. Выход целевого продуктасоставляет 40 мг/л культуральной жидкости, Препарат гомогенен, не содержит примесей нуклеаз,пригоден длягенноинженерных работ. Зависимость степени очистки целевого продукта от типа используемогосорбента представлена в таблице.Из таблицы видно, что наибольшуюстепень очистки стрептавидина обеспечивают гель-фильтрационные сорбентыС, С, С. При использовании гель-фильтрационных сорбентовдругого типа, например Р или Т, скорость тока и степень очистки снижаются. Сбор фракций, содержащих стрептавидин, осуществляют в экспериментально подобранных оптимальных интервалах относительных объемов элюции, что позволяет исключить потерюцелевого продукта, повысить его качество, так как максимально исключается возможность попадания в целевую фракцию низко- и высокомолекулярных примесей.На чертеже представлена гель-хроматограмма стрептавидина на сефадексе С.Гель-хроматографию проводили0,002 М и аммонийкарбонатным буфером рН 8,9. Объем колонки 850 мл,свободный объем 230 мл, объем фракций 10 мл.По оси абсцисс отложен относительный объем элюции,кривая 1 - Акривая 2 - биотиносвязывающая активность стрептавидина. Пунктиром обозначены границы целевой фракции.Из чертежа видно, что дальнейшеерасширение границы сбора целевойфракции приводит к увеличению примесей в целевом продукте,Таким образом, предлагаемый способ имеет следующие преимущества: использование очень простой среды, содержащей в качестве источника амин- ного азота пептон, позволяет получить гомогенный целевой продукт с выходом 30-40 мг/л культуральной жидкости, гель-хроматограФия на гель-.хроматографических сорбентах типа С позволяет эффективно разделить смесь белков и выделить гомогенный целевой продукт, что, в .свою очередь, позволяет исключить из процесса хроматографическую очистку на аффинном сорбенте, получение которого трудоемко. Кроме того, качество полученного предлагаемым способом стрептавидина позволяет использовать его для тонких генноинженерных работ.ССТип сорбента РРСкорость тока,мл/ч.Степень очисткиОтносительный,объем элюции 48,015 30,010 14,3 30,012 13 73,013 57,017 1,1-1,5 1,2-1,6 1,2-1,7 1,4-1,9 1,7-2,3 2,0-2,5 О. 00 го зщ юкФ кз в Относительобъем эльции оставитель О.Ск ехред П,Олнинь к думова Корректор И.Эрдейи Редак А.Шандор Заказ 3435 НИИПИ Государственного 113035, Тираж омитета по осква, Ж2 Подписноеобретениям и открытиям при ГКНТ СС Раушская наб., д. 4/5 Производственно в издательск комбинат "Патент", г.ужг ул. Гагарина, 1 5 1604861 6 ф о р м у л а и з о б р е т е н и яиспользуют пептон, очистку осуществ-ляют гель-хроматограФией на сефадек1. Способ получения стрептавидина, сах типа Свключающий выращивание 51 герСовусез, 2. Способ по п. 1, о т л и ч а юачЫ 1 п 1 д на жидкой питательной среде, щ и й с я тем, что при гель-хрома 5содержащей источник аминного азота, тографии используют сефадексы СИаС 1, декстрозу, и последующую хро- или С, или С, при этом фракматографическую очистку целевого про- . ции, содержащие стрептавидин, собидукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, 10 рают в интервалах относительно объечто, с целью упрощения способа, в мов элюции соответственно 1,2-1,7 качестве источника аминного азота или 1,4-1,9 или 1,7-2,3.