Способ определения гидроперекисей липидов в крови

(9) АНИ ЗОБ К АВТОРСКОМ ЕТЕЛЬСТВ 30-1 ательскии ,К, Фадесакэ, 1980,ИДРОПЕническ ано в н Изобретен и биохимиии и м медико-биологи Цель изобр сти способа,Способ осущ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРЕКИСЕЙ ЛИПИДОВ В КРОВИ(57) Изобретение относится к клбиохимии и может быть использо е относится к клиническоожет быть использовано еских исследованиях,тения - повышение точно вляется следующим образом.Берут 3 - 5 мл крови из вены в предварительно охлажденные флакончики, содержащие 3 - 5 капель 6;6 - ного раствора этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА), Отделяют плазму от эритроцитов путем центрифугиравания (при количестве оборотов, равном 1000 аб./мин) в течение 5 мин, Проводят 3-кратную промывку эритроцитов охлажденным физиологическим раствором, разводят тем же раствором до получения 25%-ной суспензии.Берут 0,5 плазмы крови и обрабатывают ее путем добавления 0,1 мл 1%-наго спиртового раствора антиаксиданта ионола, 0,1 мл 0,27 О/-ного спиртового раствора 505 6 01 й 33/52,3 учных исследованиях, Цель изобретения - повышение точности способа. Способ заключается в обработке плазмы и эритроцитов антиоксидантом ионола, треххлористым железом, тиобарбитуровой кислотой и додецисульфатом натрия в 0,44 М солянокислом буфере рН 3,6, Проводят инкубацию в течение 30-60 мин при 90-92 С, затем экстрагируют окрашенное соединение смесью ледяной уксусной кислоты и хлороформа и определяют оптическую плотность при 532- 534 нм, Способ обеспечивает повышение точности засчет образования стабильного окрашенного комплекса гидроперекисей с тиабарбитуровой кислотой. греххлористого железа, 1,1 мл глицин-солянокислого буфера (1 М, рН = 3,6 мл тиобарбитуровой кислоты (ТБК) (500 мг/100 мл) я додецилсульфате натрия (300 мг/мл). Берут 0,1 мл 25 О-ной суспензии эритроцитов и обрабатывают их путем добавления 0,1 мл 1 О-ного спиртового раствора ионола,0,1 мл 0,27 о-ного раствора хлористого железа.1,5 мл глицин-солянокислого буфера (рН = 3,6) и 1,5 мл ТБК, Приготавливают контрольную пробу для плазмы путем использования 0,5 мл физиологического раствора и всех необходимых указанных компонентов. Приготавливают контрольную пробу для зритроцитов путем использования 0,1 мл физиологического раствора и всех указанных компонентов.Инкубируют опытные и контрольные пробы в термобане при 90 - 92 С в течение 30 - 60 минут. Охлаждают опытные и контрольные пробы в ледяной бане. Проводят экстракцию гидроперекисей липидов в1603299 Таблица 1 Зависимость содержания гидроперекисей в плазме крови от режима инкубации (температурный режим))м; инкубацию осуществляли1 группой; Р 0,05;3 группой; Р 0,05. лазмы; испольконечная конв течение 60 мин, - остальные усзован 1 М глцентрация 0,44- сравнение с- сравнение опытных пробах путем добавления 1 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл хлороформа в каждую пробу - опытную и контрольную.Центрифугируют все пробы при 3000 об.1 мин в течение 10 мин. Отбирают верхний окрашенный слой для спектрофотометрическай оценки интенсивности окраски опытных проб. Определяют гидроперекиси.липидов по интенсивности окраски опытных проб относительно контрольных по величине оптической плотности Е при длине волны 532-535 нм на спектрофотометре типа СФ - 26.Определяют в опытных пробах (в эритроцитах и плазме крови) содержание белка по Лоури. Рассчитывают содержание гидроперекисей липидов (ЗГП) для каждой опытной пробы, т.е. вэритроцитах и плазме, по формулеБ 1,58 10где ГП - содержание гидроперекисей липидов, нмольмг белка;Е - величина оптической плотности; Б - содержание белка в эритроцитах и плазме, мг/мл;1,56 10 - молярный коэффициент экс тинкции.В табл. 1 и 2 представлены данные конкретного эксперимента,Из таблицы следует, что оптимальныйрежим инкубации 90 - 92 С, при нвм достигается увеличение интенсивности окраски на 43 и 47 оь соответственно.5 Таким образом, продолжительность инкубации - существенный фактор при выбранном температурном режиме.Для реализации предлагаемого способа 10 можно использовать эритроциты и плазму вколичестве 0,05 - 0,1 мл,Изобретение позволяет повысить точность исследования за счет создания оптимальных условий реакции гидроперекисей с 15 ТБК.Формула изобретения Способ определения гидроперекисейлипидов в крови путем инкубации проб зритроцитов и плазмы в присутствии анти оксиданта, солей железа, додецилсульфатанатрия, глицин-солянокислого буфера с последующей обработкой тиобарбитуро вой кислотой, экстрагированием окрашенного продукта смесью уксусной кислоты и хлоро форма и спектрофотометрированием, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве антиоксиданта используют ионол, инкубацию проводят при 90-92 С в течение 30-60 мин при концент рации буфера 0,44 М.1603299 Таблица 2 Зависимость содержания гидропероксидов в плазме крови от времени инкубации- инкубационна содержит 0,1 нокислого буф- Р 0,001. я смесь кроме прочих ингредиентовмл плазмы и 1,5 мл 1 М глицин-соляера; температурный режим -90 С; Редактор И.Касарда Составитель Н,Гуляев ехред М.Моргенталорректор И.Муск Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 3382 Тираж 528 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035,Москва,Ж, Раушская наб., 4/5