Способ определения содержания гидроперекисей липидов в плазме крови

Из ОО ретение Относитс я к медицине;а имснно к клинической биохимии,Изнестен способ определения концентрации гидроперекисей липидов вбиологиче ких тканях, основанный нарегистрагц я ультрафиолетового (УФ)поглощения липидных экстрактов вобласти 232-234 нм, которое соответствует интенсивному максимуму погло -щения коньюгиронанных диеноных структур полиненасыщенных гидроперекисейлипидон 1,Однако данньй метод довольно трудоемок и предназначен для научныхисследований, где необходима максималько возможная эк тргкция гидроперекисей липидон . Реализация способатребует сложного биохимического оборудования: специальной химическойпосуды,. роторного испарителя илисистемы для упаринания н токе инерт -ногОгаза.Наиболее близким к предлагаемомуявляется способ определения гидроперекисей липидов н биологическихтканях,. согласно котсрому к 1 гткани или 1 мл плазмы крови добавляют 10 мл гептан-изопропанольнойсмеси. Полученную смесь встряхивают,центрифугируют и отбирают супернатант, К супернатанту добавляют 1/10объемную часть воды и после расслаивания гептан-водно-изопропанольнойсмеси отбирают гептановый слой,Кон -центрацию глдроперекисей определяютпо пОглощению В гептановой Фракции,Этот способ более прост,. так,как исключает доло.1 нительную операцию перевода липидов ин хлороформ - ме"аноль:" ного экстракта. н гептан-метанольную фазу и не требует биохимическогооборудования для упаривания липицных экстрактов 2),Однако способ П ацера имеет рядсущественных недос гаткон; требуетбольшого количества гглазмы крови;экстракция гидроперекисей лиггидовпроисходит не полностью; при разделении Фаз после добавления воды кгептан-изогропанольному раствору ли 5 Опидов наблюдается образонанис мутнойводно-изопропанольной Фазы (н рядеслучаев слабая мутность регистрируется и н гептановом слое), Кроме то: ометод включает иного операций.Г 5Целью изобретения янляетс:. повыше - вние чунстнительнос.и и ускорение спо-.соба,указанная цель достигается тем,что согласно способу определениясодержания гидроперекисей липидов 60в плазме крови путем экстракиии ихгептан-изопропанольной смесью с последующим измерением оптической плотности гептановой Фракции в диапазоне 232-234 нм, к образцу плазмы кро ви добавляют 15-25-кратное количество гептан- изопропанольной смеси в соотношении 1:1, а после экстракциин смесь вносят 1/10-1/7 объемнуючасть раствора соляной кислоты грирН 1 - 2.К 0,2 мл плазмы крови, содержащеймг/мл ЭДТА в качестве антикоагулянта и антиоксиданта, добавляют4 мл гептан-изопропанольной смеси,1:1). Интенсивно встряхивают в течение 5-10 мин, Определено, что этовремя достаточно для полной экстракции гидрогерекисей липидов предлагаемым способом. Затем добавляют 1 млраствора НСГ с рН 1-2 и 2 мл гептана, Встряхивают 30-60 с. После расслоения гептан-водно-изопропанольнойсмеси не менее чем через 20 минОтстаивания образца отбирают гептачовый слой и измеряют оптическуюплотность при 233 нм (Д 23 З) на серийном спектрофотометре. В качествеконтрольной гробы используют образец,содержащий нместо плазмы 0,2 мл воды и подвергнутый всем перечисленнымпроцедурам. Величина Д 2 З, обуслов -ленная содержанием гидроперекисей. в ,ипидов, равна разности между значениями Д 2 опытной и контрольной пробД (гидроперекиси липидон) = д233(оййт) - Д (контроль),2 ЪЪП р и м е р 1, Обследован практигески здоровый мужчина С., 50 лет,напранленный на профилактический осмотр в рамках эпидемиологическогокардиологического обследования. После исследования плазмы крови предлагаемым способом получено значениеД 23 = О, 09 или Д 2 з /мл = 1, 84П р и и е р 2. Больной К., мужчина 46 лет, поступил в клинику сдиагнозом хроническая ишемическаяболезнь сердца,. стенокардия напряжения, атеросклероз аорты и венечныхартерий сердца, После обследованиябольного предлагаемым способом получено значение Д 2330165 или Д 2 /мл=:33,Всего предлагаемым способом былообследовано 10 здоровых и 12 больныххронической ишемической болезньюсердца (ИБС) мужчин н возрасте 4059 лет.В норме среднее значение концентрации гидроперекисей липидов в плазме крови было равно Д /мл 1,42+233,10,50, а у больных ИБС этот показательбыл н 1,4 раза выше и равнялсяП ./мл=2,05+0,60,увеличение степени экстракции гид,роперекисей липлдон в основном зависит от величины рН водной фазы и .максимально н диапазоне рН 1-2, н котором экстракция гидроперекисей липидсв на 45-55 выше исходного уровня (таблица),Заказ 3529/42 Тираж 873 Подписное ВНИИПИ Гссударствениого комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 у Москвар Ж 35 у Раушская наб у д 4/5филиал ППП фПатентфф, г. ужгород, ул. Проектная, 4 аъ аь еПредлагаемый способ может применяться при массовых клинических исследованиях при изучении заболеваний, сопровождающихся повышением интенсивности перекисного окисления липидов.15Предлагаеьый способ определения гидроперекисей липидов в плазме крови по сравнению с существующим способом Плацера имеет следующие преимуществаг требует в 5 раэ меньшее количество плазмы крови упрощает исследование, так как не нуждается виспользовании центрифугированияуулучшает разделение гептановой нводно-изопропанольной Фаз и увеличивает зкстракцию гидропеФекнсей липидов по сравнению с известным методомза счет относительного увеличенияобъема экстрагирующей смеси и изменения рИ водной Фазы,