Способ определения сенсибилизации к аллергенам

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН 1569705 1)5 С 01 И 33/48 САНИЕ ИЗОБРЕТЕН титут ио СССР 02,01,8ИБИЛИЗАедици ожет я с зобретениеенно к алле использовано д лизации органиЦелью изобр щение и повышени Способ осущес разом. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР Х А ВТОРСХОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСЦИИ К АЛЛЕРГЕНАМ(57) Изобретение относится кв частности к аллергологии,быть использовано для выявле тносится к медицине, гологии, и может быть выявления сенсибиа к аллергенам.ения является упрое точности способа. твляют следующим обЛимфоциты вьделяют из 2 мл гепаринизированной крови (20 ед/мл) на градиенте плотности 1,077 г/см по методу Бойум (Воуап), Лимфоциты двукратно отмывают в растворе Хенкса без индикатора, центрифугируя 5 мин при 1500 об/мин, и подсчитывают число клеток в камере Горяева. Раствором Хенкса доводят концентрацию клеток до 1,0- 1,5 млн/мл и помещают в пластиковые кюветы по 1 мл суспензии клеток, Выдерживают 5 мин в биостате хемилюмино метра (ХЛМ 1 Ц) при 37 С . Измеряют сибилизации организма к аллергенам,Целью является упрощение и повышениеточности способа. Способ заключаетсяв том, что иэ крови больного вьделяютлимфоциты и определяют их спонтаннуюхемилюминесценцию и хемилюминесценцию после 10-20 мин инкубации с 20 мклр-ра аллергена (0,01-0,05 мкг/мл) ипри возрастании уровня хемилюминесценции на 113 и более после инкубации с аллергеном диагностируют сеисибилиэацию к данному аллергену, Изобретение позволяет с точностью 1 ООХв течение 40 мин проводить выявлениесенсибилизации к аллергену, 2 табл. уровень спонтанной хемилюминесценции(ХЛ) клеток за 500 с в импульсах всекунду, вносят в пробу 20 мкл раствора аллергена в конечной концентрации 0,01-0,05 мкг/мл, разведенного,на растворе Хеикса или физрастворе,инкубируют 10-20 мин в биостате при37 С и измеряют ХЛ в течение 500 с,оПри возрастании показателя ХЛ на 17.,и более после инкубации с аллергеномдиагностируют сенсибилиэацию к данному аллергену,П р и м е р 1, Больной М, Поступил в клинику с жалобами на приступызатруднения дыхания до 3-4 раз в сутки, кашель с трудноотделяемой мокротой, слабость, недомогание. В результате клинико-лабораторного обследования установлен диагноз: бронхиальнаяастма 1 ст течение средней тяжести,фаза обострения, хронический бронхит,дыхательная недостаточность 1 ст. ХеЭ 15 б 9765 4 Таблица Показатели Аллергены Стафило- Гем,стреп- Пыпьца Домашняякокк тококк тимофе- пыльевки В 282 Прирост уровня ХЛ, ЕКожные пробы Отрица- Отрицательная тельная 1,05 0,91 0,97 милюминометрия лимфоцитов по предлагаемому способу показала сенсибилиэациюольного к стафилококковому аллергенутабл,1),5 Как видно из данных таблицы, прирост уровня ХЛ на 117. наблюдался на стафилококковый аллерген, что подтверждается результатами кожных проб и ИИМЛ. Прирост уровня ХЛ на 7 Х не сопровождается изменением кожных проб И ИИМЛ, что свидетельствует об отсутствии сенсибилизации. После проведеНия курса специфической десенсибилизирующей терапии этот больной выписан из клиники в удовлетворительном состоянии.П р и м е р 2. Больной Г. ПостуПил в клинику с жалобами на сухой кашель без мокроты, носящий приступообразный характер, периодическую заложенность носа, недомогание. На основании клинико-лабораторного обследонания больному поставлен диагноз: хроНический обструктивный бронхит в фазе обострения, ЛСН 1 ст. Сенсибилизация к бытовым аллергенам. Хемилюминометрия лимфоцитов крови по предлагаемому способу выявила сенсибилизацию к ал бергену пыльцы тимофеевки и библиотечной пыли Р 133, при этом использовались различные дозы каждого аллергена 0,01-0,05, 0,005; 0,1 мкг/мл (табл.2). 35Специфическая десенсибилизирующаятерапия привела к улучшению состояниябольного и выписке его из клиники(положительный результат способа).П р и м е р 3, Больной П. Поступил в клинику с жалобами на слабость,потливость, периодические высыпания на коже, боли в области сердца, ХЛ по предлагаемому способу с набором аллергенов показала повышение показателя на б 7. на стафилококковый аллерген и на 7 Я на аллерген кишечной палочки (отрицательный результат). Кожные пробы также отрицательные, У больного обнаружены положительные ревмапробы. При дальнейшем клинико-лабораторном обследовании установлен диагноз; ревматизм, активная Фаза, 1 ст, активности. Курс противоревматической терапии привел к улучшению состояния больного и выписке его иэ клиники.Всего обследовано 25 больных с сенсибилиэацией к стафилококковому аллергену, аллергену библиотечной пыли и др. Изобретение позволяет увеличить точность выявления сенсибилизации на 787 - 100 Х, а также упростить способ за счет уменьшения числа реактивов, этапов исследования, отсут. ствия необходимости применения токсичных реактивов и уменьшения до 40 мин времени исследования. Формула изобретения Способ определения сенсибилизации к аллергенам путем инкубации лейкоцитов с аллергеном и беэ него с последующим Физико-химическим исследованием образцов, о т л и ч а ю щ и й - с я тем, что, с целью упрощения и повышения точности способа, выделяют фракцию лимфоцитов, измеряют их хемилюминесценцию и при увеличении уровня хемилюминесценции после инкубации с аллергеном на 113 и более по сравнению с исходной определяют сенсибилизацию к аллергену,1569705 Таблиц.а Й Аллергены Показатели ДомащГеи,с трепт,Стайи- лококк няя пыльУ 282 6 3 9 4 220,97 1,05 0,71 0,94 0,57 Отрица-тельная О трица. О трицательная тельная Составитель О.ФилатовТехред М,Дидык Корректор Л,Патай Редактор И,Иулла Заказ 1444 Тираж 512 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101 ПриростХЛ, ЕИИМЛКожныепробы Бытов аяпыльУ 133 Пыльцатимофеевки