Способ получения s-аденозилгомоцистеина

(19 ГОсудАРстВенныйПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ПЛАНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 25 15 с ия аденозилгомо ечени и йол изото тивнымитеина высок ель д е рибркаинное и диоксипропилад На фимики и(71) Всесоюзный онкологический научный центр АИН СССР(57) Изобретемии и биотехн ние относится к биохиологии. Целью изобретеувеличение выхода 8- цистеина на 1 г ткани учение меченого радиоакпами 8-аденозилгомоцисим уровнем включения остигается через внутнъецирование животныменйна в дозе 150 -Изобретение относится к биохимии, а именно к способам получения соединений, играющих ключевую роль в обмене серосодержащих клеточных компонентов и используемых в медицинской биохимии, экспериментальной онкологии и генной инженерии.Целью изобретения является увеличение выхода 8-аденоэилгомоцистеина на 1 г ткани печени и получение меченого радиоактивными изотопами 8- аденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки. 1 1 представлен график динения уровня содержания0 мг/кг массы тела в концентрацииО"250 мг/мл физиологического раст вора за 2-6 ч до забоя и введение за 20 мин до забоя Ь-метионина и глицина в дозе 100 мг/кг массы тела в физиологическом растворе, с последующими извлечением печени, гомогенизацией, центрифугированием, зкстракцией диэтиловым эфиром, хроматографией на колонке с фосфоцеллюлозой Се 11 ех-Р, элюцией целевого продукта и его лиофилиэацией. Предлагаемый способ позволяет получить выход 8-аденозилгомоцистеина 1 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого В-аденоэилгомоцистеина составляет 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ по экспериментальной онкологии, медицинской биохимии Я-аденоэилгомоцистеином.з.п. ф-лы, 2 ил. Б-аденозилгомоцистеина в ткани печени крыс после введения им диоксипропиладенина; на фиг.2 - график динамики изменения радиоактивностифракций Б-аденоэнлгомоцистеина, полученных после хроматографии экстрактов ткани печени крыс после внут 1 Лривенного введения Ь-Б- С -метионина.Достижение поставленной цели осуществляется за счет предварительного (эа 2-6 ч до забоя) внутрибрюшинного введения диоксипропиладенина с последующим (за 20 мин до забоя). внут рибрюшинным введением Ь-метионина иглицина. В результате получают 10 кратное увеличение содержания Б-аденозилгомоцистеина (АсоНеу) на 1 гпечени крыс по сравнению с известным способом. Повышение выхода меченого радиоактивными изотопами Б"аденозилгомоцистеина с высоким включением метки достигается путем введения животным внчтриве но эа 4-б мин 10,меченого радиоактивныии изотопамнЬ-метионина.П р и м е р 1. Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г эа4 ч до забоя внутрибрюшинно вводятдиоксипропиладенин в дозе 200 мг/кгмассы тела в концентрации 200 мг/млфизиологического раствора. Затем за20 мин до забоя внутрибрюшинно вводят Ь-метионин и глицин в дозе по100 мг/кг каждый в физиологическомрастворе. Животных забивают транслокацией шейного позвонка, извлекаютпечень и охлаждают в ледяном физиологическом растворе, гомогенизируют с17 НО и 47 50%-ной трихлоруксуснойкислоты. Затем гомогенат центрифуги-.руют в течение 20 мин при б 000 об/мин,супернатант трижды экстрагируют 1 Чэфира, водную фазу фильтруют и наносят на колонку ( х l см) с Се 11 ех-Руравновешенную 1 глИ НС 1. Примесиотделяют пропусканием 100 мл 10 глЕНС 1, АйоНсу элюируют с 20 мл 50 мЬНС 1 и определяют спектрофотометриЭ 5чески при 257 нм. Для длительногохранения элюат лиофилиэируют.Содержание АйоНсу после указанныхвоздействий составляет в печени более 1 мкг/г ткани, что более чем в10 раз превышает его значение при использовании известного способа. Чистота продукта при этом составляетболее 95%.45П р и м е р 2., Проводят аналогично примеру 1, но для получения АаоНсу,меченого радиоактивными изотопами,допощительно за 5 мин до забоя животныи внутривенно вводят 5 мКи/кгмассы тела Ь- рф Б 1-метионина. Приэтом выделяют около 100 мкКи ПЬ --Б -АйоНсу или 50 мкКи Ь -Б-АйоНсу с удельной активностью около 20 мкКи/ммоль. Чистота продуктаболее 95%,Таким образом, предлагаемый способ позволяет в лабораторных условиях быстро и достаточно просто получать значительные количества Б-аденоэилгомоцистеина - до 1 мкг/г тка- . ни печени, инъекция же меченого радиоактивными изотопами Ь-метионина обеспечивает выход 100 мкКи Ж Я -АйоНсу с удельной активностью до 20 мкКи/ммоль. Чистота продукта при этом составляет более 95%.Полученные предлагаемым способом препараты немеченого и меченого Б" аденозилгомоцистеина по своим характеристикам удовлетворяют требованиям, предъявляемым к этому соединению в целях его использования для определения тестовых ферментативных активностей серосодержащих соединений клетки, в ингибиторном анализе систем переноса метильных групп. Кроме того, применение способа ускорит и упростит обеспечение работ в области экспериментальной онкологии, медицинской биохимии и генной инженерии таким важным клеточным интермедиатом, как Б-аденозилгомоцистеин.Формула изобретенияСпособ получения Б-аденозилгомоцистеина, включающий внутрибрюшинное введение Ь-метионина и глицина, забой животного,извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хроматографию на фосфоцеллюлозе Се 11 ех-Р, лиофилизацию выделенного продукта, о т л и ч а ю - щ и й с я тем, что, с целью увеличения выхода Б-аденозилгомоцистеина на 1 г ткани печени, эа 2-б ч до забоя вводят диоксипропиладенин в дозе 150-250 мг/кг массы тела в кон" центрации 150-250 мг/мл физиологического раствора.2. Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью получения меченого изотопами Б-. аденозил" гомоцистеина с высоким уровнем включения метки, за 4-.6 мин до забоя животным дополнительно внутривенно .вводят 2,5-10 мКи/кг массы тела Ь-метионина, меченого радиоактивными изотопами.Составитель Н.АлександрушкиРедактор И.Дербак Техред М.Ходанич ректор Т Заказ 3 Тирах 491 Подписноесударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5 НИИПИ Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ухгород, ул. Гагарина, 101.